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1、会计学1iTRAQ定量蛋白质组学定量蛋白质组学辉骏生物辉骏生物第1页/共21页辉骏生物辉骏生物第2页/共21页辉骏生物辉骏生物第3页/共21页iTRAQ试剂包括3部分:报告部分肽反应部分平衡部位(图2) 报告部分共有8种:质量数分别为114121Da,因此iTRAQ最多可同时标记8组样品(客户可按需选择标记个数)。 肽反应部分:能与肽链N端及赖氨酸侧链发生共价连接,从而将报告部分和平衡部位标记到肽段上,几乎可以标记所有蛋白质。 平衡部分:质量数分别为3124Da,与报告部分相互配合,保证iTRAQ试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比。图图2 ITRAQ试剂结构试剂结构辉骏生物辉骏生物第
2、4页/共21页辉骏生物辉骏生物第5页/共21页iTRAQ实验流程。 1:收集不同组别的样本并分别提取蛋白质; 2:蛋白质经过还原,封闭后用胰蛋白酶酶切; 3:各组样本的肽段混合物分别用不同的iTRAQ试剂标记; 4:等量混合各样本中的标记肽段; 5:MS/MS质谱检测及分析。 辉骏生物辉骏生物第6页/共21页1: 提取各组蛋白质、定量并用胰酶酶切;2. 各组肽段分别用4种iTRAQ试剂标记 (例如对照组用iTRAQ 117标记,其他3个实验组分别用iTRAQ 114, 115, 116标记);3. 标记好的各组样本等量混合,液相分离和质谱分析. 4: 不同样本中蛋白质的差异表达可通过二级质谱中iTRAQ试剂的峰面积确定,如图所示:与对照组相比,该蛋白在3个处理组(114-116)中的相对表达量较高。5. 根据该肽段的二级质谱峰图,结合数据库检索,得到蛋白的定性信息。辉骏生物辉骏生物第7页/共21页辉骏生物辉骏生物第8页/共21页辉骏生物辉骏生物第9页/共21页辉骏生物辉骏生物第10页/共21页辉骏生物辉骏生物第11页/共21页辉骏生物辉骏生物第12页/共21页辉骏生物辉骏生物第13页/共21页辉骏生物辉骏生物第14页/共21页辉骏生物辉骏生物第15页/共21页辉骏生物辉骏生物第16页/共21页辉骏生物辉骏生物第17页/共2
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