不同品牌卷烟主流烟气亚硝胺、氢氰酸释放量和卷烟有害生物效应关系

1、不同品牌卷烟主流烟气亚硝胺、氢氧酸释放 量和卷烟有害生物效应关系摘要为探究主流烟气中tsna、hcn的释放量对人体 健康的影响，采用离体细胞培养的方法来检测烟气浓缩物的 细胞毒性、动式被动吸烟小鼠急性毒性试验来检测烟气的急 性毒性，为卷烟的安全性评价提供毒理学依据结果表明卷 烟烟气冷凝物(csc)中tsna、hcn的含量与其生物加权综 合毒性大小并没有明显的线性关系.关键词卷烟烟气冷凝物；tsna； hcn；生物加权综合毒 性中图分类号ts411文献标识码a文章编号1000-2537 (2013) 02-0085-05烟草作为一种特殊商品，满足了消费者生理和心理方面 的需要，但流行病学调查结果

2、显示吸烟对人体健康有一定影 响.随着研究的深入，医学界对吸烟与健康的影响也产生了 迷惑与分歧，吸烟对健康的危害变得模棱两可1.众所周 知，吸烟对人体健康的影响最终是体现在生物体上2,建 立生物指标来检测和评价卷烟对生物体的效应，对低危害卷 烟产品的前期开发和卷烟安全性评价是很有意义的.作者采 用离体细胞培养的方法来检测烟气浓缩物的细胞毒性、动式 被动吸烟小鼠急性毒性试验来检测烟气的急性毒性，共测定 国内外20个不同品牌的卷烟3,试验采用2个生物学指标: 细胞死亡率和小鼠半数死亡时间，将该数据制成加权数值 表，来初步评价卷烟烟气的有害生物效应和烟气中的亚硝 胺、氢氧酸含量的相关性.1材料与方法1

3、. 1实验材料实验所用烟采用在市面上随机抽样提供，每支烟质量为0. 900. 92 g.1.2主要试剂1.3主要实验仪器jjd100型单通道吸烟机（郑州烟草研究所），m00del 2300 c02孵箱（sheldon制造有限公司），月坛牌洁净工作 台（北京冠鹏净化设备有限公司），tdl-5t台式离心机（重 庆光学仪器厂），lxj-64-01型离心机（北京医疗仪器修理 厂），kubota 6930型低温离心机（久保田商事株式会社）， thermo forma 低温冰箱（thermo electron 公司），mcc/340 p酶标仪（multiakan公司），hh-sy21-ni4c型电热恒温水

4、 浴锅（北经长风仪器仪表公司），sartorius bs210s型电子 天平（北京赛多利斯天平有限公司），api3000液相色谱串联 四极杆质谱仪（ab sciex公司）.aaiii型连速流动分析仪（德 国 bran&ru bbe 公司）.1.4细胞培养永生化人支气管上皮细胞系bep2d,以lhc-8无血清培 养液（lhc-8 serum-free medium with glutamine）培养， 接种于25 cm2或75 cm2的培养瓶内，以95%相对湿度、体 积分数为5% （下同）的c02、37 °c在培养箱内孵育；细胞 每周传代1次，传代后2天换1次液.1.5卷烟烟气

5、凝集物（csc）制备jjd100型单通道吸烟机设定为1 口/min,分别经过5 ml有机相（95%的乙醇）和5ml无机相（lhc-12培养液） 收集20支卷烟的烟气，分装后于-80工贮存备用.1. 6mtt法检测把培育的细胞用微孔滤膜过滤除菌后，以lhc-8培养液 稀释至所需浓度进行染毒收集处于指数生长的bep-2d细 胞，按109个/l接种96孔培养板中，其中1排孔作为阴性 对照，不作任何处理；另1排孔作为空白对照，分别进行试 验烟和对照烟的细胞染毒，每种卷烟设计10个染毒剂量.用 25 g/l胰蛋白酶消化bep2d细胞，并且准确计数.然后用 lhc-8培养液稀释单个细胞悬液，以每孔8 00

6、0个细胞接种 于96孔培养板中，每孔体积200 pl；将培养板移入c02孵 箱中，在37 °c, 5%c02和95%相对湿度条件下，培养24 h； 然后以不同浓度csc对细胞染毒，每个剂量设4个平行样， 终体积仍保持200 ul,染毒培养72 h后，每孔加入mtt 溶液（5 g/l） 20 ul, 37瓦继续孵育4 h,终止培养，小 心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150 ul dms0,震荡10 min,使结晶物充分溶解选择570 nm波长，在酶联免疫检 测仪上测定各孔od值，记录结果4.1. 7tsna含量检测将收集了主流烟气粒相物的滤片置于小玻璃瓶中，加入 100 ul 5 mg

7、/l的内标混合溶液和10 ml的01 mol/l乙酸 鞍水溶液，封好玻璃瓶，置于回旋震荡器上以180 r/min转 速振荡萃取30 min；分别用1 ml的甲醇和水先后润洗固相 萃取小柱，移取1.0 ml萃取液，用120 ul的1.0 mol/l 的氢氧化钠溶液将萃取液调为碱性，碱性液上0asismcx (30 mg)固相萃取柱，用1 ml水淋洗，然后用1.0 ml 50%甲醇 (体积分数)的水溶液将分析物洗脱，洗脱液装入液相进样 小瓶，以备lc/ms/ms分析5.1. 8hcn含量检测按yc/t 29-1996标准抽取5支卷烟后，将收集了主流 烟气粒相物的滤片置于小玻璃瓶中，加入50 ml 0. 1 mol/l naoh溶液常温下震荡30 min,用装有过滤头5 ml 次性针 筒抽取滤液，装入样品瓶内进行连速流动分析；用装有30 ml 0. 1 mol/l naoh溶液的吸收瓶扑集5支卷烟主流烟气气相中 的hcn,吸毕，用01 mol/l naoh溶液淋洗吸收瓶与主流烟 气接触的部分，合并扑集液与淋洗液，用0.1 mol/l naoh 溶液定容至50 ml,取约2 ml装入样品瓶中进行连速流动分析；根据吸光度和工作曲线计算扑集液中的hcn浓度，卷烟 烟气中的hcn释放量为粒相(滤片)与气相(吸收瓶)中hcn 测定