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文档简介

1、一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯， 95.5%2. 5% 苯酚：取苯酚 5 g ，置 100 ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。3.标准葡聚糖（ Dextran, 瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。准确称取20m g经 105干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml 容量瓶中，蒸馏水溶解定容。2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖） 10mg于 250ml 容量瓶中，加水至刻度，分别吸取 0.2 、 0.3 、0.4 、0.5 、0.6 、 0.7 、0.8 及0.9ml ，各以蒸馏水补至 1.0ml ，然后加入 5%苯

2、酚 1ml 及浓硫酸 5.0ml, 摇匀冷却，室温放置 20min 以后于 490nm测光密度，以 1.0ml 水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。123456780标准葡萄糖溶液 0.20.30.40.50.60.70.80.90（mL）蒸馏水（ mL）0.80.70.60.50.40.30.20.11.05%苯酚（ mL）0.50.50.50.50.50.50.50.50.5浓硫酸（ mL）2.52.52.52.52.52.52.52.52.5供参考值y = 54.353x + 0.00180.3R2 = 0.9994光吸0.20.10葡萄糖浓度（ m

3、g/ml）00.0010.0020.0030.0040.0050.006葡萄糖标准曲线3 注意事项（ 1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。（ 2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9 校正 g 数。（ 3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（ 4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1 0.3 之间。比如：小于0.1 之下可以考虑取样品时取2克，仍取 0.2ml 样品液，如大于 0.3 可以减半取 0.1ml 的样品液测定。（ 5）正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯度。空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌 （苯酚氧化生成） 的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大， 一般是 5%但是没遇到你说的那么严重， 不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。2、样品检测的时候， 向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋

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