常见缓冲液的配方

1、一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine ):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体 积为10ml。分装成小份贮存于-20 C 01mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。 分装成小份贮存于-20 C 010mol/L乙酸胺(ammonium acetate ):将77.1g乙酸胺溶解于水中，力口 水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物 学试剂级，无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖

2、后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml ,然后分装成小份贮存于-20 C。1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水， 分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，力口 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate ):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中， 加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate ):溶解40.8g的三水乙酸钠于

3、约 90ml水 中，用冰乙酸调溶液的 pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L ),混合 后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH, 并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2 ），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :力口 8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT（异丙基硫代 "-

4、D-半乳糖昔）于10ml 水中，分成小份贮存于-20 C 01mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2 ?6H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml, 然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNase free RNase）:溶

5、解 10mg 的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris - HCl调pH至7.5,于-20 C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N氢氧化钠（NaOH）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁 力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10 %SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（

6、糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使 终体积为100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁 力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 % X gal （5-漠-4-氯-3-呵噪一（3 -半乳糖昔）：溶解25mg的X gal 于1ml的二甲基甲酰胺（DMF），用铝箔包裹装液管，贮存于-20 C。100 x Denhardt 试剂（Denhardt's regent ）成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll, 400 型）2%聚乙烯此咯烷酮（PVP-40）2%BS

7、A （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L DTT 2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5

8、ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul2

9、0 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。20 XSSC成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水 88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于10

10、0ml水中，使 DEPC的体积分数为 0.1%。在37 C 温浴至少12h,然后在15 psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC 失活。DEPC会与胺起反应，不可用 DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide ）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力 搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer ）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷 酸氢二钠（双碱）贮液

11、，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）贮液：溶解 138g于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积 为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值 877850 815 775 7351236856255655104503903302801501852252653153754354905506106707206.16.26.06.3 6.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE （用于悬浮和贮存 DNA）成分及终浓度 配制100m

12、l溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl （pH7.4-8.0 , 25 C）200ul 0.5 mol/L EDTA （pH 8.0 ）98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCl buffer ）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的 pH （25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N ），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml） pH 8.614 2128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液

13、50 X Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )补足1L5X Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )补足1L染料1 %漠酚蓝(bromophenol blue )加

14、1g水溶性钠型漠酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解1 %二甲苯青 FF (xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的漠化乙锭(ethidium bromide )小心称取1g漠化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）6 x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15 %漠甲酚绿0.25 %二甲苯青FF

15、水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.8g15mg25mg补足到10ml6 x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型）水 1.5ml 1 %漠酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.5g补足到10ml6X漠酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.25%漠酚蓝0.25 %二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型）水 2.5ml

16、 1 %漠酚蓝2.5ml 1 %二甲苯青 FF1.5g补足到10ml6 X甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50 %甘油水 1.5ml 1 %漠酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 ) 3ml3.9ml6 x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40 %聚蔗糖水 1.5ml 1 %漠酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L ED

17、TA （ pH8.0 ）4g补足到10ml10 X十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量0.2%漠酚蓝0.2 %二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1 % SDS50 %甘油水 20mg20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 % SDS5ml补足到10ml三. 常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白腺10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB培养基将下列组

18、分溶解在0.9L水中：蛋白腺20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后， 除了在每 100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用0.22um的 滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白腺12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 6

19、0 C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤 除菌）。2X YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白腺16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼 脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白腺20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，局压火菌。建议在局压火菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四. 常用抗生素氨节青霉素(ampicillin ) (100mg/ml )溶解1g氨节青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 0分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。愈节青霉素(carbenicillin ) (50mg/ml )溶解0.5g愈节青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 0分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/m