PCR产物的T载体连接和转化实用教案_第1页
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1、PCR产物(chnw)的A尾巴和T载体第1页/共6页第一页，共7页。第2页/共6页第二页，共7页。酶连将产物转移(zhuny)到无菌微量离心管中，加入0.5L T载体，加5L 2连接buffer，16连接反应12小时以上。第3页/共6页第三页，共7页。转化(zhunhu)第4页/共6页第四页，共7页。 取200ul DH5感受态细胞转移至无菌离心管中，每管加2ul酶连产物，轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置30min，将离心管放到预先加热到42的循环水浴中，恰恰放置90秒，不要摇动试管。快速将离心管移到冰浴中，使细胞冷却1-2分钟，每管加800ul LB培养基，用水浴将培养基加温至37，然后将离

2、心管转移至37摇床上，温育45min使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性基因。已转化的感受态细胞转移至20mmol/L MgSO4和相应抗生素的LB琼脂平板上，将平板于室温至液体被吸收(xshu)，倒置平板，于37培养，12-16小时后可出现菌落。 第5页/共6页第五页，共7页。感谢您的观看(gunkn)！第6页/共6页第六页，共7页。NoImage内容(nirng)总结PCR产物的A尾巴和T载体。T4 DNA Ligase 1967。将产物转移到无菌微量离心管中，加入0.5L T载体，加5L 2连接buffer，16连接反应12小时以上。快速将离心管移到冰浴中，使细胞冷却(lngqu)1-2分钟，每管加800ul LB培养基，用水浴将培养基加温至37，然后将离心管转移至37摇床上，温育45min使细菌复苏，并且表达

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