病毒和亚病毒因子

1、1会计学病毒和亚病毒因子病毒和亚病毒因子真病毒：真病毒：亚病毒：亚病毒：至少含有至少含有核酸核酸和和蛋白质蛋白质两种两种组分组分类病毒：类病毒：卫星因子：卫星因子：朊病毒：朊病毒：只含只含不具独立侵染性不具独立侵染性的的核酸核酸组分组分只含只含具独立侵染性具独立侵染性的的核酸核酸组分组分只含只含单一单一蛋白质蛋白质组分组分病毒病毒重点葡萄球菌葡萄球菌(1000nm(1000nm） 牛痘病毒300250nmABCDEFG立克次体立克次体450nm450nm衣原体衣原体390nm390nmA A、大肠杆菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体 ( 65 ( 65 95nm )95nm )B B、腺病毒、腺病毒(7

2、0nm )(70nm )C C、脊髓灰质炎病毒、脊髓灰质炎病毒 (30nm )(30nm )D D、乙脑病毒、乙脑病毒( 40nm )( 40nm )E E、蛋白分子、蛋白分子(10nm )(10nm )F F、流感病毒、流感病毒(100nm )(100nm )G G、烟草花叶病毒、烟草花叶病毒杆状杆状球状球状蝌蚪状蝌蚪状概念：感染病毒的宿主细胞内，出现在光学显微镜下可见的大小、形态、数量不等的小体，称为包涵体。在细胞中的形成部位在细胞中的形成部位：位于位于细胞核细胞核内内如包疹病毒如包疹病毒 位于位于细胞质细胞质内内如狂犬病毒等如狂犬病毒等 细胞核、细胞质内细胞核、细胞质内都有都有麻疹病毒麻

3、疹病毒 包涵体的本质包涵体的本质 大多数是大多数是病毒粒子病毒粒子组成的，少数是细胞对病毒的反应。组成的，少数是细胞对病毒的反应。了解研究包涵体的实践意义了解研究包涵体的实践意义病毒鉴定、病毒鉴定、 临床诊断依据临床诊断依据概念：概念： 指在指在宿主细菌宿主细菌的的菌苔菌苔上，上，噬菌体使菌体裂解而形成的一噬菌体使菌体裂解而形成的一个具有一定形状、大小、边缘个具有一定形状、大小、边缘和透明度的和透明度的空斑空斑（负菌落负菌落）。应用应用： 1 1、噬菌体定量计数、噬菌体定量计数 2 2、噬菌体的鉴定、噬菌体的鉴定烈性噬菌体噬菌斑烈性噬菌体噬菌斑温和噬菌体噬菌斑温和噬菌体噬菌斑空斑和病斑：空斑和

4、病斑：由由动物病毒动物病毒在宿主单层细胞培养物上形成的。在宿主单层细胞培养物上形成的。也可以采用噬菌斑法类似的技术。用于动物也可以采用噬菌斑法类似的技术。用于动物病毒粒子的计数。病毒粒子的计数。枯斑：枯斑： 植物病毒植物病毒在植物叶片上形成的群体称为枯斑在植物叶片上形成的群体称为枯斑nDNARNA(single strand,ss)还是双链(double strand,ds) ，线状和环状，而且有正链(+链)和负链(-链)，其类型为生物之最。病毒病毒种类种类核酸核酸形态形态DNARNAssDNAdsDNAssRNAdsRNA动动物物病病毒毒线状线状细小病毒细小病毒(鼠细小病毒鼠细小病毒)痘病毒

5、。疱疹病毒痘病毒。疱疹病毒腺病毒，彩虹病毒腺病毒，彩虹病毒细小细小RNA病毒病毒(脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒)呼肠孤病毒、质呼肠孤病毒、质型多角体病毒型多角体病毒环状环状乳多孔病毒乳多孔病毒(鼠多瘤病毒鼠多瘤病毒)植植物物病病毒毒线状线状双生病毒双生病毒(玉米条纹病毒玉米条纹病毒)(烟草花叶病毒、烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒黄瓜花叶病毒)伤瘤病毒伤瘤病毒(玉米矮缩病毒玉米矮缩病毒)环状环状花椰菜花叶病毒组花椰菜花叶病毒组微微生生物物病病毒毒线状线状E.coil的的T系和系和系系噬菌体噬菌体E.coil的的MS2 和和RNA噬菌体噬菌体(真菌病毒、假单真菌病毒、假单菌的菌的6噬菌体噬菌体)环状环

6、状(E.coli的的X174、fd、f1噬菌体噬菌体)铜绿假单胞菌的铜绿假单胞菌的PM2噬菌体噬菌体细菌病毒真菌病毒吸附功能： 噬菌体尾丝及包膜糖蛋白刺突吸附在宿主表面的受体上破坏宿主细胞膜与细胞壁：如噬菌体的溶菌酶增殖：各种酶。如DNA和RNA聚合酶，RNA复制酶、逆转录酶等裸露病毒：裸露病毒： 基本结构基本结构( (核衣壳核衣壳) ) 包膜：核心核心( (基因组基因组) )：衣壳：衣壳：病毒核酸病毒核酸由许许多多衣壳粒(蛋白质亚单位)组成由类脂双层膜(来自宿主的细胞膜)组成，有的长有刺突包膜病毒：包膜病毒：病毒粒的模式构造病毒粒的模式构造衣壳粒衣壳粒衣壳衣壳核心（核核心（核 酸）酸）核衣壳

7、核衣壳包膜包膜包膜病毒包膜子粒包膜子粒3 3、病毒粒的对称体制、病毒粒的对称体制 杆状：杆状：烟草花叶病毒烟草花叶病毒(TMV(TMV) )等等 丝状：丝状：E.coilE.coil的的f1f1、fdfd、M13 M13 噬菌体等噬菌体等 卷曲状：正粘病毒卷曲状：正粘病毒( (流感病毒流感病毒) )等等 弹状：狂犬病毒，水泡性口膜炎病毒等弹状：狂犬病毒，水泡性口膜炎病毒等 小型：脊髓灰质炎病毒等，小型：脊髓灰质炎病毒等，174174噬菌体等噬菌体等 大型：大型：腺病毒腺病毒等等 无包膜：无包膜： E.coilE.coil的的T T偶数噬菌体偶数噬菌体( (蝌蚪状蝌蚪状) )等等 有包膜有包膜

8、：痘病毒：痘病毒( (砖块状砖块状) )无包膜无包膜无包膜无包膜有包膜有包膜螺旋对称螺旋对称二十面体对称二十面体对称复合对称复合对称有包膜：疱疹病毒等有包膜：疱疹病毒等ssRNA(5%)衣壳粒衣壳粒 (95%)烟草花叶病毒的模式构造腺病毒的模式构造A 二十面体的形态五邻体五邻体腺病毒的模式构造B 衣壳粒形态1212个角，个角，2020个面，个面，3030条棱，条棱，252252个球状衣壳粒个球状衣壳粒70-80nm六邻体六邻体腺病毒的模式构造C 腺病毒的形态 核心为线状dsDNAE.coil的T偶数噬菌体的模式构造T2、T4、T665nm95nm95nm20nm（中空的核心）（中空的核心）噬菌

9、体的六类形态噬菌体的六类形态T-系噬菌体系噬菌体T-系噬菌体是研究的最广泛而又深入的细菌噬菌系噬菌体是研究的最广泛而又深入的细菌噬菌体，按发现的先后顺序进行从体，按发现的先后顺序进行从T1-T7编号，后来发现其中偶数者的编号，后来发现其中偶数者的形态都相同（蝌蚪形形态都相同（蝌蚪形收缩性长尾收缩性长尾），故统称），故统称T偶数噬菌体偶数噬菌体（A型）。型）。The bacteriophage binds to receptors on the bacterial cell wall. The bacteriophage injects its genome into the bacterium

10、s cytoplasm Fig. 2: Penetration Fig. 1: Adsorption 噬菌体的基因组转录和表达具有严格的时序性完整病毒粒完整病毒粒双层盘双层盘双圈螺旋双圈螺旋植植物物病病毒毒的的繁繁殖殖过过程程（2%2%琼脂琼脂底层培养基底层培养基7-8mL7-8mL）上层培养基上层培养基（1%1%琼脂培养基琼脂培养基3mL3mL）底层平板底层平板宿主菌悬液（对数期菌液宿主菌悬液（对数期菌液0.2mL0.2mL）噬菌体试样（合适稀释液噬菌体试样（合适稀释液0.1mL0.1mL）上层平板上层平板双层平板双层平板混均混均3710余余h 计数噬菌斑计数噬菌斑 双层平板法双层平板法计算

11、出来的噬菌体效价总是比计算出来的噬菌体效价总是比用电镜用电镜直接计数直接计数得到的效价低得到的效价低可使所有噬菌斑都近似位于同一平面上，因而大小一致、边缘清晰且无重叠现象琼脂较稀，故形成的的噬菌斑形态较大、特征较明显并便于观察和计数指噬菌体核酸侵入宿主细胞后至第一个成熟噬菌体粒子装配前的一段时间。指潜伏期后的宿主细胞迅速裂解，溶液中噬菌体粒子急剧增多的一段时间。指感染后的宿主细菌全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高点的时期。指在潜伏前期人为地(用氯仿等)裂解宿主细胞后，此裂解液仍无侵染性的一段时间。胞内积累期：指在隐晦期后，若人为地裂解细胞，其裂解液已呈现侵染性的一段时间。噬菌体以分钟计，动物病

12、毒和植物病毒以小时或天计。是平均每一宿主细胞裂解后所产生的子代病毒粒子数。其值等于平稳期病毒效价与潜伏期病毒效价之比。噬菌体的裂解量一般为几十至上百个，动物病毒和植物病毒可达数百至上万个Phage plaquesPhage plaques概念概念：又称又称一级生长曲线一级生长曲线，定量，定量描述描述烈性噬菌体烈性噬菌体生长规律的实生长规律的实验曲线。其验曲线。其基本实验步骤基本实验步骤为：为：Samples removed at 5-minute intervalsSamples removed at 5-minute intervalsP h a g e P h a g e suspensi

13、onsuspensionInfected Infected bacteriabacteriaBacteriaBacteriaBacteria Bacteria lysedlysedBacteriaBacteriachlorofomchlorofomHostHostbacteriabacteria melted agarmelted agarBacteriaBacteriaeach cell becones each cell becones infected with one phageinfected with one phageAllow to hardedAllow to hardedS

14、andwich of top agar Sandwich of top agar and nutrient agarand nutrient agarN u t r i e n t N u t r i e n t agar plateagar plateIncubate 24-48 hoursIncubate 24-48 hoursLawn of host Lawn of host cellcellBacteriophagBacteriophage suspensione suspensionAllowed to stand 1 Allowed to stand 1 minute with c

15、hloroformminute with chloroformPour mixture of bacteria and Pour mixture of bacteria and phage onto nutrient agar platephage onto nutrient agar plate1%琼脂培养基 45-482%琼脂双层平板每隔数分钟取样前噬菌体：前噬菌体：没有感染力没有感染力图图1.1-4 细菌受噬菌体感染后的两种反应细菌受噬菌体感染后的两种反应 A.裂解反应裂解反应 B.溶原性反应溶原性反应自发或诱导变异自发或诱导变异营养态营养态游离态整整合合态态自发或诱导变异自发或诱导变异

16、烈性噬菌体与温和噬菌体的生活史比较：烈性噬菌体与温和噬菌体的生活史比较：吸附吸附侵入侵入增殖增殖成熟成熟裂解裂解整合整合同步复制同步复制自发或诱导自发或诱导多次循环多次循环裂解性循环裂解性循环溶源性循环溶源性循环方法：方法：将少量溶源菌与大量的将少量溶源菌与大量的敏感性指示菌敏感性指示菌混合混合倒倒琼脂平板琼脂平板经培养后观察是否有经培养后观察是否有噬菌斑噬菌斑出现。出现。敏感性指示菌敏感性指示菌遇遇溶源菌溶源菌裂解后所释放的裂解后所释放的温和噬菌体温和噬菌体会发生裂解会发生裂解循环者，这些菌株可以从自然界或菌种库中获得。循环者，这些菌株可以从自然界或菌种库中获得。由于溶源菌在细胞分裂过程中有

17、极少数个体会引起自发裂由于溶源菌在细胞分裂过程中有极少数个体会引起自发裂解，其释放的噬菌体可不断侵染溶源菌菌落周围的解，其释放的噬菌体可不断侵染溶源菌菌落周围的指示菌指示菌菌苔，菌苔，于是就形成了一个个于是就形成了一个个中央有溶源菌的小菌落中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈围四周有透明圈围着着的独特的的独特的噬菌斑噬菌斑在合适的培养基中培养待测菌样在合适的培养基中培养待测菌样原噬菌体复制原噬菌体复制除去活菌体除去活菌体倒琼脂平板（或将滤液加到倒琼脂平板（或将滤液加到敏敏感性指示菌感性指示菌的液体培养物中的液体培养物中培养培养观察是否有噬菌斑出现（或使菌液变清）观察是否有噬菌斑出现（或使菌液变清

18、）对数期进行紫外照射对数期进行紫外照射培养，过滤培养，过滤取取少量滤液少量滤液与大量的与大量的敏敏感性指示菌感性指示菌混合混合溶源菌的优化溶源菌的优化检验检验步骤：步骤：分类依据是其免疫学特性与宿主特异性ICTV将其定义为具有一定世代关系并占据一定生境的病毒群。即在具有科和属特征前提下，把某些次要特征不完全相同的病毒归为同一种。 病毒种以下的血清型、基因型、毒力株、变异株和分离株的分类和命名由公认的国际专家小组确定。 病毒的命名 采用英文或英文化拉丁文，只用单名，不用斜体书写。但目、科、亚科、属分别用拉丁文后缀“virales”、“viridae”、“virinae”、“virus”。 2、病毒的理化性质鉴定 病毒颗粒大小和形态、病毒及其组分的沉降系数、浮力密度和相对分子质量、病毒的核酸类型、对理化因子的敏感性等。 3、血细胞凝集性质鉴定 不同病毒所凝集的血细胞种类及发生凝集所要求的温度、pH条件不同 4、病毒的血清学鉴定 采用免疫血清或抗体，进行免疫沉淀反应、凝集反应、酶联免疫吸附测定、血凝抑制实验等 5、病毒的分子生物学鉴定病毒感染宿主所引起的疾病症状；在鸡胚绒毛尿囊膜上所形成的痘疱形态及在单层细胞培养物上所产生的细胞病变表现等nn其产生与人和动物的密切接触有关n严