BDE-209论文：海马神经元细胞形态观察细胞存活率超氧化物歧化酶(SOD)丙二醛(MDA)一氧化氮

1、BDE-209论文：海马神经元细胞形态观察细胞存活率超氧化物歧化酶(SOD)丙二醛(MDA) 氧化氮【中文摘要】多溴联苯醚(Plybrominated diphenylethers,PBDEs)是一些类含溴原子的芳香族化学物，从 20 世纪 80 年代 起，人们发现阻燃剂多氯联苯(Polychlorinated biphenyl,PCBs) 对 人体健康有害，而 PBDE 的化学结构与 PCB 相似，具有相似的阻燃作用，故作为多氯联苯(PCBs)的替代品，被广泛地应用在各种消费品种中。 但 PBDEs 与PCBs-样是一种持续的环境有机污染物。随着工业的发 展,PBDEs 在世界范围的需求不断

2、增加，环境中的 PBDE 啲浓度也逐年 增多,已高于 PCBs 在环境中的浓度。PBDE 可沉积在水体和土壤中，并通过食物链，进入动物和人体。在人体的乳汁、脂肪、血液、肝脏 等器官中均可检测出 PBDEsPBDE啲急性毒性很低，口服的半数致死 量为5g/kg。而慢性暴露在 PBDEs 时,其作用的靶器官为肝脏、肾脏、甲状腺、神经系统等。目前国内外对低溴联苯醚的相关毒性研究较多，而且较肯定。从大量动物实验中发现 PBDEs 可能具有肝毒性、生殖毒 性、甲状腺毒性、神经发育毒性及潜在的致癌性等。因此，在欧盟及美国已禁止使用，十溴联苯醚(decabrominated BDE,BDE-209或 DeB

3、DE) 的毒性较低溴联苯醚类低，在美国及欧洲仍允许生产使用。而我国不 但是PBDE 啲生产、使用和出口大国，其中十溴联苯醚(BDE-209)的生 产使用量最大，而且还是接收电子垃圾的大国。BDE-209 已成为我国 重要的环境污染物。因此,我们深入对十溴联苯醚(BDE-209)的研究有一定的迫切性和必要性。BDE-209 是使用最广泛的 PBDEs 其毒性较低 溴类低,但其可以在进入环境后，经光解、高温分解、生物及微生物降 解等过程,转化成溴二苯并二噁英、多溴二苯并咲喃及低溴代的联苯 醚,引起更强的毒性作用。因此,对于 BDE-209 对机体是否存在有危害 仍存在有很多争议，然而国内外展开了相

4、关的实验。在动物研究发 现,BDE-209 能增加肝细胞癌的发生，使甲状腺激素分泌增加。BDE-209 有胎毒性，在孕期接触 BDE-209,能雄性子鼠的生殖功能受损。而神经 发育毒性是近年人们最关注部分。这是因为在动物实验中发现，在孕期及产后暴露在多种 PBDEs （包括 BDE-47,153,209 等）后,均会产生 持久性的行为改变，特别在肌肉活动及认知、学习、记忆能力方面；而且近年发现乳汁中 PBDES 的含量不断增加，母乳喂养的婴儿体内含 有 PBDE啲水平比非母乳喂养的婴儿高，而且婴幼儿体内 PBDE 啲浓 度比成年人要高，这除了与母乳喂养有关之外，与接触房屋中的垃圾 及婴幼儿排泄

5、 PBDE啲能力较低有关系。可见，对 BDE-209 的深入研 究,对人类的环境健康及优生优育都具有重要的意义。我们的研究小 组在前期实验中，对原代胎鼠海马神经元细胞进行 BDE-209 染毒后，发现在一定剂量的 BDE-209 作用下，原代胎鼠海马神经元细胞可发生 凋亡及氧化损伤，并存在一定得剂量-反应关系,推测氧化应激可能是 BDE-209 引起神经毒性的重要机制之一。但目前BDE-209 是如何导致 学习记忆能力下降的机制仍不清楚，有否基因毒性仍不明确。本课题 主要在细胞水平上研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸（NAC）对 BDE-209 致 原代培养海马神经细胞氧化损伤的影响以及初步研究B

6、DE-209 对原代培养海马神经元细胞整体 DNA 水平甲基化的影响。DNA 甲基化是种基因表达调控的重要机制，在很多毒物毒性及疾病中起重要作用；正常DNA 甲基化对于中枢神经功能具有重要意义，异常 DNA 甲基化状 态与肿瘤、智力发育迟缓、免疫缺陷等疾病有一定的相关；对 DNA 甲基化状态的正确评估，有助于我们对 BDE-209 毒理机制的深入了解。 本课题主要分为以下三部分：第一部分 N-乙酰半胱氨酸对 BDE-209 致 新生鼠海马神经元形态学改变的影响取新生24 小时内的 SD 大鼠海马组织进行原代神经元细胞培养，鉴别神经元的纯度，观察 N-乙酰半胱 氨酸对 BDE-209 引起原代培

7、养新生鼠海马神经元细胞形态结构的改 变及细胞存活率下降的影响。1.购买新生 24 小时内的 SD 大鼠,取海 马组织进行原代神经元细胞培养。2.培养 7 天后海马神经元细胞进行 神经元细胞纯度鉴别。3.原代培养 7 天的新生鼠海马神经元细胞分成 11 组，即对照组和实验组，对照组分为空白对照组（含有含 1%0DMS（的 培养液）和 NACC 寸照组（含有 O.1mmol/L NAC 的培养液）。实验组分成I 组（BDE-209 单独染毒组）、II 组（BDE-209 与 NAC 同时作用）及 III 组（NAC 先作用 24 小时后,BDE-209 再染毒）,各大组中均含有 3 个浓度 的BDE-209 小组,BDE-209 浓度分别为 10、30、50ug/ml。NAC 浓度 均为0.1mmol/L。每组设 3 个平行样，实验重覆 3 次。染毒 24h 后，在 倒置显微镜下进行细胞形态观察。4.