分子生物学专论ppt课件

1、专业：生物化学与分子生物学专业：生物化学与分子生物学方向：动物基因功能组与分子免疫方向：动物基因功能组与分子免疫学学姓名：王姓名：王 文文 文文学号：学号：20191030542019103054;囊型包虫病CE是世界上最为广泛高度传播的人畜共患病之一，在中国西北地域传播也非常盛行。据估计，目前大约6百万人有感染这种疾病的风险，其中超越1百万人亟需药物治疗。此外，还有超越85万驯养的动物58羊曾经感染上了CE，这将导致大量的公共安康问题。因此，控制CE势在必行。在过去的几十年里，基于免疫控制CE的研讨遭到了更多的关注。;主要组织相容性复合体(major histocompatibility c

2、omplex，MHC)MHC是由一个有组织的严密连锁的基因簇编码的分子构成，该分子可结合处置包括原性肽寄生虫在内的肽抗原并提交给T淋巴细胞，从而触发抗原特异性免疫应对。由于免疫活动参与各种疾病的临床过程，MHC基因表达的信息已参与人类疾病，如类风湿关节炎Kerlan-坎东等。 2019年，强直性脊柱炎王等人，2021，过敏性血管炎王等人，2019，以及羊病如淋巴性间质性肺炎伍德尔等人，2019。虽然我们此前曾报道，哈萨克羊的MHC基因与CE抗性或敏感性有关Li等人，2019，然而，没有系统的研讨报道MHC基因在处于不同阶段感染CE羊的表达。本研讨旨在讨论MHC-DQB1基因在感染受细粒棘球绦虫

3、的中国美利奴羊的外周血淋巴细胞PBLmRNA的表达的动态变化。本研讨针对囊型包虫病的有效控制方案将具有根本意义。;1.资料14周岁的中国美利奴羊，预留，与其他种类分开豢养。要求它们体内抗体对包虫囊液HCF抗原均为阴性。抗体由商业绵羊棘球蚴病ELISA试剂盒检测。2.方法每只羊经口感染10个来自于狗肠细粒棘球蚴带有卵细胞的妊娠节片。于0天，7，21，30和60天分别感染后从羊的颈静脉搜集血液样本中的钠肝素溶液，实验终止时按照肉类例行检查和电镜观测，对CE进展诊断，将实验过程中得到的血液样品分为A内部器官有包虫囊肿和B自我治愈组以进展下一步实验。;绵羊外周血分别和体外培育；总RNA的提取和逆转录；

4、经过PCR扩增cDNA；实时RT-PCR；统计分析;聚蔗糖泛影葡胺分层液密度梯度法 离心 分别抗凝静脉血 获得 PLB淋巴细胞 洗涤两次磷酸盐缓冲盐水PBS；pH值7.4台酚蓝溶液 RPMI1640培育基计数稀释 转移 平底24孔板并放在10%二氧化碳的培育箱中。;规范的Trizol提取程序；用紫外/可见分光光度计测定RNA浓度并保管在-80度条件下；加RNA酶抑制剂反响进展逆转录并进展PCR扩增cDNA；用于DQB1PCR扩增的寡核苷酸引物用Primer Premier5.0找出，而G3PDH作为内部控制引物运用蒙塔涅等人所描画的。将PCR产物克隆和测序，以检测能否存在的靶基因。;从上述制备的DQB1转录程度采用实时荧光定量PCR测定DNA在基因转录程度从上面的预备的DNA来确定运用实时荧光定量PCR；寻觅和G3PDH相对应的归一表达程度的内部控制物。;1.结果A组0-21天感染表现逐渐添加直到第30天开场出现迅速锐化；在B组中，在实验过程中，DQB1 mRNA的表达阅历了从开场的急剧添加感染0天，感染后7天，以后表现出明显的减少感染，直到第30天，阅历了从第30天到第60天的高度感染。相比较而