丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤抑制细胞凋亡关系

1、丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤与抑制细胞凋 亡的关系 【摘要】目的观察丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤 与抑制细胞凋亡的关系。方法建立大鼠在体缺血再灌注模型，健康 成年雄性大鼠 24 只，随机分为三组：假手术组(只穿线，不结扎； sham)、缺血再灌注组(缺血 30 分钟，再灌注 120 分钟；i/r )组， 以及丙泊酚预处理组(b 组)。于再灌 120 分钟末提取心肌组织蛋白， 采用 caspase-3 活性分光光度法检测试剂盒检测其活性，采用氯化 三苯基四氮唑染色法计算心肌梗死面积。结果 caspase-3 :与 sham 组相比，i/r 组 caspase-3 活性增加了

2、40%(p0.05)；和 i/r 组相 比，b组减低了 30%(p0.05 )。ttc 染色：sham 组缺血与梗死面积 均为 0;与i/r 组(48 2.40 )相比 b 组(27 1.84 )的缺血面积 显著降低(pv0.05),同时与 i/r 组(47 2.84 )相比，b 组(32 2.46 )的梗死面积明显减少(p0.05 )。结论丙泊酚预处理可减 轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其机制与抑制细胞调亡有关。 【关键词】心肌缺血再灌注；丙泊酚；细胞凋亡 心肌缺血再灌注损伤常见的临床改变包括心肌顿抑、再灌注心 律失常、微血管功能失调和心肌细胞的凋亡等。细胞凋亡又称程序 性细胞死亡.是指有核细胞

3、在一定条件下通过启动其内部机制，主 要通过内源性dna 内切酶的激活而发生的细胞自然死亡过程。目前 已有一些实验和临床研究发现，细胞凋亡可能是心肌缺血再灌注损 伤发病机制的重要环节之一 1。caspases 家族蛋白酶是细胞凋亡 途径的核心成分2。caspase-3 作为凋亡效应蛋白是三条途径的共 同下游通路，在凋亡信号传导通路中占有举足轻重的地位 3本文 从 caspase-3 和心肌梗死面积两个指标分别来探讨丙泊酚预处理减 轻缺血再灌注损伤的机制。 1 材料与方法 1.1 采用健康成年雄性大鼠 24 只，体重 250-300g。随机分为三 组：假手术组（sham 组，n=8）、缺血再灌注组

4、（i/r 组，n=8）和 丙泊酚预处理组（b 组，n=8）。用 25%乌拉坦（1.2g/kg ）对大鼠行 腹腔注射麻醉，连接心电图（ii 导联），气管切开置管，接动物呼 吸机控制呼吸，10 分钟后，于胸骨左缘第 3、4 肋间开胸，暴露心 脏，切开心包，用 6-0无损伤缝线在左心耳右缘与肺动脉圆锥左缘 之间冠状动脉左前降支起点下 2mn 环绕结扎冠脉，放松后即发生再 灌注。除 sham 组只穿线不结扎冠状动脉，其余各组均缺血 30min, 再灌注 120min;再灌注前 10min 按照不同分组分别经尾静脉给予生 理盐水、丙泊酚（1mg/kg-1/mi n-1 ）共 10mi n。各实验组在预定

5、时 间点开胸，取左室壁相同部分缺血区和非缺血心肌组织 50-100mg 采用分光光度法检测 caspase-3 活性，采用 1.5 氯化三苯基四氮唑 （ttc ）染色，bi-2000 医学图像分析系统测定梗死范围（图 2.2 ）。 1.2统计学处理所有资料以均数士标准差 （x 士 s） 表示， 米用 spss13.0统计软件包单因素方差分析（an ova）分析，p0.05 有统 计学意义。 2 结果 2.1caspase-3 结果 i/r 组 （0.96 士 0.04 ） 表达显著高于 sham 组 （1.59 士 0.06 ）; 口口组（1.11 士 0.04 ） 与 i/r 组、sham

6、组均有显著 差异（图2）。 3 讨论 1972 年 kerr 首次提出了凋亡的概念，认为细胞凋亡是机体的一 种正常生理机制，生理状态下参与调节体内正常细胞的更新和异常 细胞的清除，病理状态下异常的凋亡又与肿瘤的发生，病毒感染、 移植免疫排斥反应，缺血再灌注损伤等有关，它是和坏死完全不同 的另一种死亡形式4。心肌细胞凋亡参与了冠心痛、心律失常等 心血管疾病的形成和发展过程，缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡也 明显加重。caspase （天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶）是一类在 进化上非常保守的蛋白酶类，caspase-3 被认为是各种凋亡刺激因 子激活的 caspase 家族中的关键蛋白酶，与 dna 断裂、染色体凝聚 和凋亡小体形成有关，是直接介导凋亡的效应分子。生理状态下， caspase-3 以无活性的酶原形式存在，凋亡信号可导致 caspase-3 激活， 裂解相应的胞浆和胞核底物， 最终导致细胞凋亡。 因此， caspase-3活性测定成为凋亡相关研究的重要指标。 心肌梗死面积扩大是心肌缺血再灌注损伤的一个重要特征，而 梗死面积的多少决定