【微生物检验】食品中细菌总数的测PPT课件

1、1、检验程序、检验程序检样检样做成几个适当倍数的稀释液做成几个适当倍数的稀释液选择选择2-32-3个适宜稀释度个适宜稀释度各以各以1ml1ml之量分别入灭菌平皿内之量分别入灭菌平皿内每皿内加入每皿内加入46460 0c c左右适量左右适量营养琼脂营养琼脂培养培养4848小时小时报告菌落数报告菌落数第一节第一节 菌落总数测定菌落总数测定2、检样处理、检样处理（1）以无菌操作将检样）以无菌操作将检样25g（或（或25ml）剪碎，放于含有）剪碎，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或预

2、置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成研磨制成1：10的均匀稀释液。的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min100000r/min的速度处理的速度处理1min，做成，做成1：10的的均匀稀释液。均匀稀释液。（2）用）用1ml灭菌吸管吸取灭菌吸管吸取1：10稀释液稀释液1ml，沿管壁徐徐，沿管壁徐徐注入含有注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制成成1：1

3、00的稀释液。的稀释液。（3）另取）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序的灭菌吸管，按上项操作顺序,制制10倍递增倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支支1ml灭菌吸管。灭菌吸管。（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择选择23个适宜稀释度，分别在制个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至）稀释液移入平

4、皿后，应及时将凉至460c营养琼脂培营养琼脂培养 基养 基 ( 可 放 置 在可 放 置 在 4 6 10c 水 浴 锅 内 保 温水 浴 锅 内 保 温 ) 注 入 平 皿注 入 平 皿15ml20ml，混合均匀，混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（）等琼脂凝固后，翻转平板，置（361）0c恒温箱恒温箱内培养（内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目取出，计算平板内菌落数目, ,乘以倍数，乘以倍数，即得即得每每g（每每ml）样品所含菌落

5、总数。）样品所含菌落总数。 3、菌落计算方法、菌落计算方法（1）菌落计数方法）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告）菌落计数的报告平板菌落数的选择平板菌落数的选择 选取菌落数在选取菌落数在3030300300之间的平板作为菌落总数测定标之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数

6、，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘即可计算半个平板后乘2 2以代表全皿菌落数。平皿内如有链以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条

7、链，则应将每条链作为一个菌落计。条链作为一个菌落计。 稀释度的选择稀释度的选择 应选择平均菌落数在应选择平均菌落数在3030300300之间的稀释度，乘以稀之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在3030300300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于或等于2 2，应报告其平均数；若大于，应报告其平均数；若大于2 2则报告其中较小的数则报告其中较小的数字。字。 若所有稀释度平均菌落数均大于若所有稀释度平均菌落数均大于300300，则应按稀释度，则应按稀释度最高的平均

8、菌落数乘以稀释倍数报告之。最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于若所有稀释度的平均菌落数均小于3030，则应按稀释度，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1 1乘以最低稀乘以最低稀释倍数报告之。释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均不在若所有稀释度的平均菌落数均不在3030300300之间，其之间，其中一部分大于中一部分大于300300或小于或小于3030时，则以最接近时，则以最接近3030或或300300的平均的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

9、菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数的报告菌落数的报告 菌落数在菌落数在100以内时，按其实有数报告以内时，按其实有数报告; ;大于大于100时，时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指的指数来表示。数来表示。注意英文表述l 菌落总数aerobic bacterial count大肠菌群coliform bacteria沙门氏菌salmonella致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli霉菌和酵母molds

10、 and yeasts金黄色葡萄球菌staphylocl 菌落形成单位colony form unitl 微生物学检验 microbiological examination讨论1l真菌菌落算不算菌落总数？（请学生比较新老国标中关于菌落的定义的差异） 讨论2l 新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表什么？ l（n1 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数（含适宜范围菌落数）n2 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数（含适宜范围菌落数）讨论3l成片的菌落如何计数？ 讨论4l对原始记录表的评价 l设计原始记录表菌落总数的测定菌落总数的测定 平板菌落计数法平板菌落计数法 菌落总数记录报告菌落总数记录报告产品名

11、称生产日期细菌总数检验依据 培养基接种110-110-210-310-410-5空白备注检验员：营养琼脂培养基a日期：生产车间抽样日期b平均数复核：班次检验日期结果报告数（个/g或ml）日期：记录表按照以下原则进行编制：可以满足检验过程的复现；可以实现培养基和试剂的溯源及复现其制备过程；一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验项目，也就是一份样品的所有微生物检验项目在一张原始记录上体现。为了符合实验室资质认定评审的要求，可能会有点繁，而且基本上没有办法对原始记录作假，因为记录上体现的内容环环相扣。 菌落总数的测定菌落总数的测定 出现的实际工作问题出现的实际工作问题 做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因？ 我做的菌落总数的测定，是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、10-10稀释，在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候，培养皿中长出来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起，10-8也有一个这样，其他的几乎不长，究竟怎么会事？ 检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌落的可见率？ 我公