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文档简介

1、候选功能基因筛选和验证集锦大家在进行功能基因定位的时候，是不是遇到过定位的区间大，区间内包含的基因非常多的尴尬情况呢？这个时候是不是会有一种无从下手的感脚？为此，图谱君整理了功能基因筛选和验证的方法，希望能够给大家提供一种思路。 1、非同义突变基因筛选：对候选区域内含有非同义突变的基因进行初步筛选。2、转录组测序 :亲本进行转录组测序，寻找亲本表达差异的基因与 QTL 关联基因的一致的候选基因。 3、qRT-PCR： qRT-PCR（ Quantitative real time polymerase chainreaction，qRT-PCR）技术已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法，能够

2、专一、灵敏、快速、高重复的精确定量起始模板的浓度，可用于miRNA 、 mRNA 、 lncRNA 、 circRNA及 DNA 等分子定量检测。 4、QTL 区域内 SNP 图谱构建：在定位的区间内， 利用 KASP 技术对群体进行 SNP 分型并排图与性状进行 QTL 定位，进一步筛选候选基因。 5、BSA 与遗传图联合分析： 利用 BSA 与遗传图联合分析的方法进行关联区域缩小，筛选出更加可靠的候选基因。6、遗传图和GWAS 联合分析：利用遗传图和GWAS 联合分析的方法进行关联区域缩小，筛选出更加可靠的候选基因。二功能基因验证1、利用蛋白质免疫印迹法验证基因功能。2、通过转基因验证基因功能：将候选基因如抗病性状转入到感病的个体中，进行表型鉴定，来确定基因的功能。3、利用 RNA 干扰和转基因技术验证。4、 RNA-seq 测序分析候选基因功能GO 富集：将亲本表达差异并且是关联的候选基因进行GO 功能富集分析。 5、亲本一代基因克隆测序：将亲本中候选基因的序列测出，检测候选基因的序列差异。6、构建 NIL 群体：利用相对性状（抗

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