《红细胞酶缺乏症》ppt课件

1、第十一章第十一章 红细胞酶缺乏症红细胞酶缺乏症第一节第一节 概概 述述 红细胞代谢红细胞代谢葡萄糖代谢葡萄糖代谢铁代谢铁代谢红细胞核苷酸红细胞核苷酸代谢代谢 红细胞要有效维持其正常生理功能，红细胞要有效维持其正常生理功能，必需保证一定的能量代谢，红细胞能量必需保证一定的能量代谢，红细胞能量代谢的主要作用：代谢的主要作用： 维持血红蛋白内的铁处于维持血红蛋白内的铁处于2价铁方式价铁方式 维持红细胞内的高钾、低钠、低钙状维持红细胞内的高钾、低钠、低钙状 态态 维持红细胞内酶、血红蛋白中的巯基维持红细胞内酶、血红蛋白中的巯基团处于激活和复原形状。团处于激活和复原形状。 维持红细胞的双凹形状。维持红细

2、胞的双凹形状。 葡萄糖代谢葡萄糖代谢红细胞的正常能源是葡萄糖。红细胞的正常能源是葡萄糖。红细胞内葡萄糖的分解代谢主要有两个途红细胞内葡萄糖的分解代谢主要有两个途径，即无氧糖酵解和磷酸己糖通路。径，即无氧糖酵解和磷酸己糖通路。成熟红细胞仅靠葡萄糖的无氧酵解获取能成熟红细胞仅靠葡萄糖的无氧酵解获取能量。量。 1、无氧糖酵解、无氧糖酵解 90%-95%在葡萄糖的无氧酵解途径中，葡萄糖分解在葡萄糖的无氧酵解途径中，葡萄糖分解为丙酮酸或乳酸。为丙酮酸或乳酸。代谢代谢1mol的葡萄糖分解可净获得的葡萄糖分解可净获得2molATP。葡萄糖的利用率主要受限于己糖激酶和磷葡萄糖的利用率主要受限于己糖激酶和磷酸果

3、糖激酶所催化的反响。酸果糖激酶所催化的反响。其代谢产物其代谢产物NADH是是MHb酶的辅酶，维持酶的辅酶，维持血红蛋白分子中的铁处于复原形状，坚血红蛋白分子中的铁处于复原形状，坚持血红蛋白的携氧才干。持血红蛋白的携氧才干。酶缺乏如酶缺乏如PK，导致溶血，导致溶血.2、2，3-二磷酸甘油酸二磷酸甘油酸2，3-DPG)代谢支路代谢支路 葡萄糖无氧酵解过程中，在葡萄糖无氧酵解过程中，在1，3-DPG构成后构成后，存在另一条代谢之路，称为，存在另一条代谢之路，称为2，3-DPG代代谢支路谢支路 。该代谢之路的存在使红细胞可以调理每该代谢之路的存在使红细胞可以调理每mol葡葡萄糖代谢产生萄糖代谢产生AT

4、P的量。的量。同时也调理细胞内同时也调理细胞内2，3-DPG的浓度，进而调的浓度，进而调理血红蛋白对氧的亲和力反比。理血红蛋白对氧的亲和力反比。PH值与值与2，3-DPG成正比酸中毒。成正比酸中毒。P36图3、磷酸戊糖途径与谷胱甘肽途径、磷酸戊糖途径与谷胱甘肽途径5%-10%在此通路中，在此通路中，6-磷酸葡萄糖在第一步反响中磷酸葡萄糖在第一步反响中被氧化生成被氧化生成6-磷酸葡萄糖酸和磷酸葡萄糖酸和CO2，同时，同时NADP+被复原为被复原为NADPH。NADPH的一个主要功能是在谷胱甘肽复原的一个主要功能是在谷胱甘肽复原酶酶GR的作用下，作为复原红细胞内含的作用下，作为复原红细胞内含谷胱甘

5、肽二硫化合物的供氧体。谷胱甘肽二硫化合物的供氧体。经过谷胱甘肽途径，复原性谷胱甘肽经过谷胱甘肽途径，复原性谷胱甘肽GSH使红细胞蛋白质分子中使红细胞蛋白质分子中-SH基团处于复基团处于复原形状，维持红细胞膜的稳定。原形状，维持红细胞膜的稳定。P37图 磷酸戊糖途径生成的磷酸核糖可参与嘌呤核苷的生物合成，又可合成ATP，对血液的体外保管有重要意义。 最常见的酶的缺乏为：G-6-PD红细胞葡萄糖红细胞葡萄糖-6-6-磷酸磷酸脱氢酶缺陷症脱氢酶缺陷症glucose-6-phosphate glucose-6-phosphate dehydrogenasedehydrogenaseG-6-PDG-6-

6、PD缺乏症是遗传性红细胞酶缺陷病中最缺乏症是遗传性红细胞酶缺陷病中最为常见的一种。为常见的一种。患者普及世界各大洲，估计总数在患者普及世界各大洲，估计总数在2 2亿人以亿人以上，国内近年调查发现以广西、海南、云南上，国内近年调查发现以广西、海南、云南的部分地域最为多见，其次为广东、福建、的部分地域最为多见，其次为广东、福建、浙江及长江流域各地，淮河流域以北较为少浙江及长江流域各地，淮河流域以北较为少见。见。一、疾一、疾 病病 概概 述述 该病患者绝大多数平常没有贫血和临床病症，但在一定条件下，如运用该病患者绝大多数平常没有贫血和临床病症，但在一定条件下，如运用氧化剂药物，运用蚕豆或感染时，可以

7、发生明显的溶贫。氧化剂药物，运用蚕豆或感染时，可以发生明显的溶贫。 本病为本病为X X伴性不完全显性遗传，即突变基伴性不完全显性遗传，即突变基因在因在X X染色体上，具有不同的表现度。染色体上，具有不同的表现度。 男性缺乏者为半合子，女性缺乏者多为男性缺乏者为半合子，女性缺乏者多为杂合子，女性纯合子必需父母均有缺陷才表杂合子，女性纯合子必需父母均有缺陷才表现。女性可有中间型，表现为红细胞缺陷但现。女性可有中间型，表现为红细胞缺陷但临床并无溶血反响。临床并无溶血反响。 控制控制G-6-PDG-6-PD的基因可有多种突变型。的基因可有多种突变型。 目前知的变异性在目前知的变异性在190190种以上

8、。种以上。 约半数其酶活力与正常无异且无临床表约半数其酶活力与正常无异且无临床表现。现。分分 型型 先天性非球形红细胞性溶血先天性非球形红细胞性溶血性贫血性贫血 蚕豆病蚕豆病 药物诱发溶血药物诱发溶血 感染诱发溶血感染诱发溶血 新生儿高胆红素血症新生儿高胆红素血症蚕豆病蚕豆病 favism favism 蚕豆病有明显的季节性，好蚕豆病有明显的季节性，好发于儿童，溶血发作多为急发于儿童，溶血发作多为急重。重。 是由于食用蚕豆或接触蚕豆是由于食用蚕豆或接触蚕豆花粉后而发生的急性溶血性花粉后而发生的急性溶血性贫血。贫血。 原原 因因 蚕豆中含有蚕豆嘧啶、蚕豆嘧啶核苷、多巴、多巴核苷等具蚕豆中含有蚕豆

9、嘧啶、蚕豆嘧啶核苷、多巴、多巴核苷等具有氧化作用物质，可使有氧化作用物质，可使G-6-PDG-6-PD缺陷患者中的红细胞复原型谷缺陷患者中的红细胞复原型谷胱苷肽胱苷肽GSHGSH降低引发溶血。降低引发溶血。临临 床床 表表 现现 进食蚕豆或接触蚕豆花粉进食蚕豆或接触蚕豆花粉后普通后普通1-2天内急骤发生溶血。天内急骤发生溶血。 全身不适，疲倦、乏力、发全身不适，疲倦、乏力、发热、头晕、厌食、恶心、呕吐、热、头晕、厌食、恶心、呕吐、腹痛等。腹痛等。 贫血、黄疸、尿色增深或血贫血、黄疸、尿色增深或血红蛋白尿。红蛋白尿。 严重者可有面色惨白、全身严重者可有面色惨白、全身衰竭、血压下降、神志愚钝、衰竭

10、、血压下降、神志愚钝、焦躁不安，甚至发生急性循环焦躁不安，甚至发生急性循环和肾功能衰竭。和肾功能衰竭。实实 验验 室室 检检 查查血象血象 血红蛋白中度至重度减低，血红蛋白中度至重度减低，红细胞呈正细胞正色素性。红细胞呈正细胞正色素性。 可见有核红细胞，白细胞可可见有核红细胞，白细胞可增高，网织红细胞明显增高，变增高，网织红细胞明显增高，变性珠蛋白小体性珠蛋白小体Heinz小体小体)明显明显添加。添加。骨骨 髓髓 象象有核细胞增生旺盛，幼红细胞百分比显著增高。有核细胞增生旺盛，幼红细胞百分比显著增高。G6PDG6PD挑选实验挑选实验 ： 高铁血红蛋白复原实验高铁血红蛋白复原实验 G-6-PD

11、G-6-PD缺陷变性珠蛋白小体实验缺陷变性珠蛋白小体实验 G-6-PD G-6-PD荧光斑点法荧光斑点法 硝基四氮唑蓝实验纸片法硝基四氮唑蓝实验纸片法 G-6-PD G-6-PD定量测定定量测定1.1.高铁血红蛋白复原实验高铁血红蛋白复原实验methemoglobin reduction methemoglobin reduction test MHb-RTtest MHb-RT原理原理在血液中参与亚硝酸盐使红细胞在血液中参与亚硝酸盐使红细胞中的亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白，中的亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白，正常红细胞的正常红细胞的G-6-PD催化戊糖旁路使催化戊糖旁路使NADP氧化型辅酶氧化

12、型辅酶 变成变成NADPH复原型辅酶复原型辅酶 ，其脱的氢经过亚，其脱的氢经过亚甲蓝试剂的递氢作用而使高铁血红蛋白甲蓝试剂的递氢作用而使高铁血红蛋白Fe3+复原成亚铁血红蛋白复原成亚铁血红蛋白Fe2+,经过比色可察看复原的多少。当经过比色可察看复原的多少。当G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白复原率下缺乏时，高铁血红蛋白复原率下降。降。 参考值参考值 正常人高铁血红蛋白复原率正常人高铁血红蛋白复原率75%75%脐带血脐带血77%77%，高铁血红，高铁血红蛋白蛋白0.3 1.3g/L0.3 1.3g/L。 临床意义临床意义 1.1.减低：蚕豆病和伯氨喹啉药物溶血减低：蚕豆病和伯氨喹啉药物溶血性贫血。

13、纯合子性贫血。纯合子G6PDG6PD缺乏时，高铁血缺乏时，高铁血红蛋白复原率红蛋白复原率30%30%，脐血，脐血40%40%，杂，杂合子合子G6PDG6PD缺乏，高铁血红蛋白为缺乏，高铁血红蛋白为31%74%,31%74%,脐血为脐血为41% 77%41% 77%2.2.血红蛋白血红蛋白H H病、不稳定血红蛋白病、病、不稳定血红蛋白病、高脂蛋白血症和巨球蛋白血症等有假高脂蛋白血症和巨球蛋白血症等有假阳性。阳性。 评价评价 该实验是国内运用较多的方法，其该实验是国内运用较多的方法，其简便易行，敏感性高，但特异性稍简便易行，敏感性高，但特异性稍差，是差，是G6PDG6PD缺乏症的挑选实验。缺乏症的

14、挑选实验。2.2.变性珠蛋白小体生成实验变性珠蛋白小体生成实验 原理原理 取取G-6-PDG-6-PD缺乏的病人血样缺乏的病人血样参与乙酰苯肼于参与乙酰苯肼于3737孵育孵育2 42 4小时，用煌焦油蓝染色察看红细小时，用煌焦油蓝染色察看红细胞中珠蛋白小体的生成情况，计胞中珠蛋白小体的生成情况，计算含算含5 5个及以上珠蛋白小体的红个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率。细胞的百分率。 参考值参考值 正常人含正常人含5 5个及以上珠蛋白小体的个及以上珠蛋白小体的红细胞普通红细胞普通30%30%。 临床意义临床意义 1.G6PD1.G6PD缺乏症阳性细胞常高于缺乏症阳性细胞常高于45%45%v3.3

15、.接触硝基苯、苯肼、苯胺等化学接触硝基苯、苯肼、苯胺等化学物质时也增高。物质时也增高。 v2.2.不稳定不稳定HbHb，HbHHbH病等也常病等也常45%45%，复原型谷胱甘肽缺乏症也增高。复原型谷胱甘肽缺乏症也增高。3.3.葡萄糖葡萄糖6-6-磷酸脱氢酶荧光斑点实磷酸脱氢酶荧光斑点实验和活性测定验和活性测定 原理原理 在在G-6-PDG-6-PD和和NADP+NADP+存在下，存在下，G-6-PDG-6-PD能使能使NADP +NADP +复原成复原成NADPHNADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。后者在紫外线照射下会发出荧光。NADPHNADPH的吸收峰在波长的吸收峰在波长340nm3

16、40nm处，可处，可经过单位时间生成的经过单位时间生成的NADPHNADPH的量来的量来测定测定G-6-PDG-6-PD活性。活性。 参考值参考值 正常人有很强荧光正常人有很强荧光10min10min内出现荧内出现荧光光 正常人酶活性定量：正常人酶活性定量：WHOWHO引荐的引荐的ZinkhamZinkham法参考值为法参考值为12.112.12.092.09U/gHb;ICSHU/gHb;ICSH引荐的引荐的Glock & McleanGlock & Mclean法的参考值为法的参考值为8.34 8.34 1.59 U/gHb 1.59 U/gHbv 临床意义临床意义 vG-

17、6-PDG-6-PD缺乏者荧光很弱或无荧光缺乏者荧光很弱或无荧光，出现荧光点的时间，出现荧光点的时间 30 30分钟分钟v在在G6PDG6PD缺乏症高发人群中，对阵缺乏症高发人群中，对阵发性溶血而抗球蛋白实验和酸溶血发性溶血而抗球蛋白实验和酸溶血实验阴性者，应思索有本病的能够实验阴性者，应思索有本病的能够。网织红细胞添加可致假性。网织红细胞添加可致假性G6PDG6PD活活性添加。性添加。评价评价本方法直接测定本方法直接测定NADPH的量，的量，有较强的特异性和敏感性，但仍需有较强的特异性和敏感性，但仍需20%-30%的的G6PD缺乏红细胞才干得出异常缺乏红细胞才干得出异常结果。结果。实验方法要

18、求严厉，试剂昂贵，需恒实验方法要求严厉，试剂昂贵，需恒温分光光度计。温分光光度计。网织红细胞含有高浓度的网织红细胞含有高浓度的G6PD G6PD ，如，如患者最近发作过溶血，应将标本离心后患者最近发作过溶血，应将标本离心后取底层红细胞检测。取底层红细胞检测。血红蛋白对荧光有淬灭作用，血红蛋白对荧光有淬灭作用，HCT50%HCT50%时，应取标本的半量检测，时，应取标本的半量检测，20%20%时，取标本的两倍量做检测。时，取标本的两倍量做检测。丙酮酸激酶缺陷症丙酮酸激酶缺陷症 一、疾病概述一、疾病概述v红细胞丙酮酸激酶红细胞丙酮酸激酶(pyruvate kinase, pk)缺缺乏症是一种常染色

19、体隐性遗传性溶血性疾病。乏症是一种常染色体隐性遗传性溶血性疾病。v发病率仅次于发病率仅次于G6PD缺陷症，但在我国少见。缺陷症，但在我国少见。v患者红细胞的丙酮酸激酶患者红细胞的丙酮酸激酶(PK)缺乏使缺乏使ATP生生成缺乏，导致细胞能量代谢妨碍。成缺乏，导致细胞能量代谢妨碍。v最明显的是红细胞膜的离子通透性添加，细最明显的是红细胞膜的离子通透性添加，细胞体积变小，成为伸展、僵化红细胞，易于胞体积变小，成为伸展、僵化红细胞，易于被脾或肝内巨噬细胞破坏而发生溶血。被脾或肝内巨噬细胞破坏而发生溶血。二、临床表现二、临床表现v丙酮酸激酶缺乏症严重者可在婴儿早期即出丙酮酸激酶缺乏症严重者可在婴儿早期即

20、出现病症，为中度以上的贫血、黄疸，需反复现病症，为中度以上的贫血、黄疸，需反复多次输血才干存活。多次输血才干存活。v多数患者表现终身存在的慢性溶血性贫血，多数患者表现终身存在的慢性溶血性贫血，伴黄疸，部分患者会发生胆石症。伴黄疸，部分患者会发生胆石症。v极少数患者由于溶血被代偿而不表现贫血。极少数患者由于溶血被代偿而不表现贫血。v新生儿的新生儿的PKD经常发生高胆红素血症经常发生高胆红素血症三、诊断方法三、诊断方法 v病史病史 v自幼发病，终身存在慢性溶血表现。自幼发病，终身存在慢性溶血表现。 v体格检查体格检查 v贫血、黄疸的轻重常与病情的严重程度贫血、黄疸的轻重常与病情的严重程度有关。可有

21、关。可v 有脾肿大。有脾肿大。诊断评析诊断评析 v1丙酮酸激酶缺乏症分为遗传性和继发性两丙酮酸激酶缺乏症分为遗传性和继发性两种，本诊断规范主要用于遗传性丙酮酸激酶种，本诊断规范主要用于遗传性丙酮酸激酶缺乏症。缺乏症。 v2在临床如只需在临床如只需PK酶活性改动，无溶血表酶活性改动，无溶血表现者，那么为红细胞现者，那么为红细胞PK缺乏。缺乏。 v3. 临床高度疑心临床高度疑心PK缺乏，而缺乏，而PK活性测定正活性测定正常时，应进展底物系统的常时，应进展底物系统的 PK活性定量测定活性定量测定v4继发性的丙酮酸激酶缺乏症见于白血病、继发性的丙酮酸激酶缺乏症见于白血病、红白血病、再生妨碍性贫血、难治

22、性贫血及红白血病、再生妨碍性贫血、难治性贫血及化疗后，常应有这些疾病的临床表现。化疗后，常应有这些疾病的临床表现。实验室检查实验室检查v血常规检查血常规检查 血红蛋白接近或低于正常值；网血红蛋白接近或低于正常值；网织红细胞计数增高；外周血涂片镜检可见大织红细胞计数增高；外周血涂片镜检可见大红细胞、伸展红细胞或棘状红细胞。红细胞、伸展红细胞或棘状红细胞。 v红细胞红细胞PK活性测定显示活性测定显示PK活性的降低荧光活性的降低荧光斑点法斑点法PK活性挑选实验呈中间缺乏或严重缺活性挑选实验呈中间缺乏或严重缺乏值。乏值。 vPK活性定量测定：正常值活性定量测定：正常值150土土199ug Hb(37)。中间代谢产物。中间代谢产物(ATP、2，3 DPG、PEP等等)测定。测定。二、丙酮酸激酶缺乏的检验方法二、丙酮酸激酶缺乏的检验方法丙酮酸激酶荧光斑点实验丙酮酸激酶荧光斑点实验丙酮酸激酶活性检测丙酮酸激酶活性检测 原理原理 在二磷酸腺苷在二磷酸腺苷ADPADP存在的条件下丙存在的条件下丙酮酸激酶酮酸激酶pyruvate