野生桂花的遗传多样性和遗传结构研究

1、http: / www. ahs. ac. cn E-mail: yuanyixuebao园 艺学报 2014, 41 （7） : 1427T435Acta Horticulturae Sinica野生桂花的遗传多样性和遗传结构研究胡 菀1,2，罗意 2，阳亿 2，张志勇2，范邓妹2,*（ 1江西农业大学林学院，南昌330045； 2江西农业大学，亚热带生物多样性实验室，南昌330045）摘 要：利用细胞核微卫星（nuclear microsatellite, nSSR）标记又t中国4个省的7个野生桂旭smanthus fragrans （Thunb.） Lour.群体139个个体的遗传多样性

2、和遗传结构进行了研究。11个微卫星位点揭示了野生桂花等位基因多样性（A）平均为6.039,有效等位基因数（Ne）3.769，平均预期杂合度（He）为0.673。所有群体均显著偏离口温平衡，近交系数FIS介于0.313 0.580间。群体间遗传分化系数FST =0.143， AMOVA 分析表明群体间遗传分化占总遗传变异的12.69%，群体内的遗传变异为87.31%。 Mantel检验表明野生桂花群体间遗传距离与地理距离不存在相关性（r = -0.277, P = 0.214）。STRUCTURE聚类分析显示，所有个体被划分为3个理论群体，庐山群体和浏阳群体中谱系较为单纯，而其他群体则存在一定程

3、度的遗传混杂。瓶颈效应分析显示，除浏阳群体外所有群体经历了种群衰退。关键词：野生桂花；微卫星标记；遗传多样性；遗传结构中图分类号：S 685.13 文献标志码：A文章编号：0513-353X（ 2014） 07-1427-09Genetic Diversity and Population Genetic Structure of Wild Sweet Osmanthus Revealed by Microsatellite MarkersHU Wan1,2， LUO Yi2 ， YANG Yi2 ， ZHANG Zhi-yong2 ， and FAN Deng-mei2,* （ 1Colle

4、ge of Forestry， Jiangxi Agricultural University ， Nanchang 330045， China； L2aboratory of Subtropical Biodiversity， Jiangxi Agricultural University ， Nanchang 330045， China）Abstract： Genetic diversity and genetic structure of 139 individuals from seven wild populations of Osmanthus fragransin four pr

5、ovinces of China were studied with nuclear microsatellite（ nSSR） markers. A relatively high level of genetic diversity was detected in O. fragrans with 11 polymorphic microsatellite loci. Average Allelic diversity （ A） ， effective number of alleles（ Ne） and mean expected heterozygosity （ He） were 6.

6、039， 3.769 and 0.673， respectively. All populations deviated from Hardy-Weinberg equilibrium significantly ， with inbreeding coefficient（FIS） ranging from 0.313 to 0.580. Geneticdifferentiation among population was moderately low（F ST = 0.143） . Mantel test showed no significantcorrelation between g

7、enetic and geographic distances among populationsr =-0.277, P = 0.214）.Bayesian STRUCTURE clustering analysis suggested that there were three logic populations for all individuals. Bottleneck analysis revealed that all populations except for LY had experienced recent decline in population sizes.Key

8、words： Osmanthus fragrans； nuclear microsatellite（ nSSR） markers； genetic diversity； genetic收稿日期：2014 £3-04;修回日期：2014 S5T6基金项目：国家自然科学基金项目（31160082 ， 31160043）；国家科技支撑计划项目（2012BAC11B02 ）；江西省教育厅科技计划项目（ GJJ2241 ）* 通信作者Author for correspondence （ E-mail ： dmf.625 ）7期胡 菀等：野生桂花的遗传多样性和遗传结构研究1439structu

9、re植物种质资源（即遗传资源）是栽培植物遗传改良的物质基础。然而由于引种驯化过程中的瓶颈效应II （bottleneck effect）和人工选择，栽培植物的遗传多样性往往比较低，遗传背景相对单一（ Tanksley & McCouch， 1997； Olsen & Schaal， 1999； Doebley et al.， 2006； Zeder et al.， 2006）。例如栽培水稻（Oryza sativa L.）的遗传多样性只有野生水稻（Oryza rufipogon Griff.和Oryza nivara Sharma et Shastry的10% 20% （Zhu

10、 et al, 2007）。因此，野生原始种和近缘种是栽培植物遗传 改良的丰富源泉（李德铢等，2012）。桂花（Osmanthus fragrans Lour.）栽培历史悠久，观赏价值高，现各地广泛栽培（张美珍和邱莲卿，1992；向其柏和刘玉莲，2008；阳韶昆等，2012；朱倩等，2012）。从历史记载中可以看出，长江中下游一带是桂花最重要的原产地。近年来，长江流域的亚热带山地不断有野生桂花的报道，如江西庐山山南（汪德娥和王宗海，1997）、福建长汀（董建文等，2002）、湖南浏阳（郝日明 等，2005）、浙江千岛湖（王贤荣等，2007）等。鉴于桂花的重要经济价值和不断增加的野生桂花报道，作

11、者从2007年开始对长江中下游各省区的野生桂花群体进行了调查和采集，除了已报道的野生群体外，新发现两个野生桂花群体（分别位于江西修水和铅山）和一个野生移栽群体（位于江西星子）。在此基础上，利用先期研究开发出来的微卫星标记对野生桂花遗传多样性进行研究，以期全面揭示天然桂花群体的遗传多样性及群体间的遗传分化程度；了解不同群体之间的亲缘关系；分析地理隔离、人为因素等对遗传结构的影响，为野生桂花种质资源的保护和合理利用提供科学依据。1 材料与方法1.1 采样地概况与采样方法于 2008年 10月开始对野生桂花进行资源调查及样品采集，共收集到7个野生群体（表1）。其中星子群体采自一个偏僻的不通公路的村落

12、（高家岭）附近，通过走访确认此群体为野生移栽群体。表 1 野生桂花群体采样信息Table 1 Sampling information for each population of Osmanthus fragrans群体样品植株数产地地理位置海拔 /m生境PopulationNumberLocalityGeographical locationAltitudeHabitat千岛湖24 浙江省淳安县千岛湖29.531 N° ，119.139 E° 105 山坡林中QDHChunan， ZhejiangHillside ， under forests长汀24 福建省长汀县石峰

13、寨25.543 N° ，116.534 E° 450 沟谷石壁，灌木丛中灌木丛中CTChangting， FujianValley cliff ， in shrubs浏阳21 湖南省浏阳市周洛村28.429 N° ，113.670 E° 360 沟谷石壁，灌木丛中灌木丛中LYLiuyang ， HunanValley cliff ， in shrubs庐山19 江西省庐山29.469 N° ，115.952 E° 490 山坡林中LSLushan Mountain ， JiangxiHillside ， under forests修水

14、17 江西省修水县乐家山29.019 N° ，114.553 E° 360 沟谷石壁，灌木丛中灌木丛中XSXiushui ， JiangxiValley cliff ， in shrubs星子13 江西省星子县秀峰29.502 N° ，115.993 E° 220 移栽XZXingzi ， JiangxiTransplant铅山21 江西省铅山县车盘镇28.009 N° ，117.876 E° 310 沟谷石壁，灌木丛中灌木丛中YSYanshan， JiangxiValley cliff ， in shrubs每个群体采集13 24#

15、共13价个体的嫩叶样品。利用硅胶迅速脱水干燥后，W0 C冰箱保存。群体内个体间相隔不少于20 m;对于规模较小的群体(如修水)，对所发现的个体全部采集。 凭证标本存于江西农业大学植物标本馆(JXAU )。1.2 DNA的提取与PCRT增采用改良的CTAB法(Doyle & Doyle, 1987)提取桂花叶片基因组的DNA ,置于W0 C冰箱 保存备用。PCR反应体系为 20 区 L 主要包括 10 w L 2 >Taq PCR MasterMix (Tiangen;成分：0.1 U TtL 聚合酶，0.5 mmol L-1 dNTP, 20 mmol L-1 Tris-HCl

16、(pH 8.3) , 100 mmol L-1 KCl 以及3 mmol L-1 MgCl2) , 0.5 mol -1 L物，20 50 ng总.DNA o PC即增程序为：94 C预变性 3 min； 94 C变性 45 s, 58 66 C退火45 s, 72 C延伸45 s, 33个循环；72 C延伸5 min, 4 C保存。PCRT增反应 产物采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并拍照。本课题组前期报道了29对桂花微卫星引物(Zhang et al.， 2011)，由生工生物工程(上海)服务有限公司合成，每个群体选取3个植株的DNA模板进行PCRT增。根据预试验结果筛选出11 个扩增

17、带型清晰且重复性好的微卫星位点(表 2),然后对所有个体进行PCR扩增和检测。1.3 数据处理与分析以DNA marker为对照，根据Zhan萨(2011)报道的目的片段分子量在电泳图谱上确定等位 基因数及大小。采用POPGENE V. 1.32软件(Yeh et al.， 1999)计算等位基因多样性(Allelic diversity ，A)、有效等位基因数(Effective number of alleles, &)、特有等位基因数(private ane*APriV、表观杂合度(Observed heterozygosity H。) 、预期杂合度(Expected heter

18、ozygosity,He)和多态位点比率(Proportion of polymorphic loci, P)。每个位点的 Hardy-Weinberg平衡采用 GENEPOP V. 3.儆 件(Raymond & Rousset, 1995)中的 Fisher 's exact tests。根据各位点等位基因频率，用BOTTLENECK V.1.2.02 软件( Cornuet & Luikart， 1996)对野生桂花群体进行瓶颈效应分析。由于 SMM模型(stepwise mutation model)适用于较大群体的长期动 态分析，而本研究选用的微卫星位点用于分

19、析群体近期发展趋势，因此采用IAM ( infinite allelemodel)及TPM模型(two phase model 更加合适(Cornuet & Luikart, 1996)。基于 IAM 及TPM 模型，重复1 00欧，采用Wilcoxon符号秩次检验(Wilcoxon sign-rank test)分析每个群体的表观 杂合度(Ho)是否高于突变一漂变平衡(mutation刁rift equilibrium )下的预期杂合度(Heep。采用GenALEx 6软件(Peakall & Smouse, 2005)估算近交系数F$和F统计量中的遗传分化系 数 FST,前

20、者用来衡量近交的程度，后者用来衡量各群体之间的遗传分化程度。用 Nei遗传距离(D)来衡量各群体之间的遗传分化大小。通过 Mantel检验(Smouse & Peak 1986)来分析群体间遗传 距离和地理距离的相关性。利用Arlequin 3.1 软件(Excoffier et al.， 2005)对群体遗传分化进行AMOVA 方差分析。利用 STRUCTURE V. 2.2软件(PHtchard et al., 2000)基于混合模型(admixture model)和居 群间相关等位基因频率模型(correlated alleles frequencies model对野生桂花所

21、有个体进行聚类分析。 聚类组值(K)范围设置为2 7。程序运行参数一Length of burnin-period为10 000, Number of MCMC Reps after Burnin为10|000。在给定 K值的条件下，数据后验概率(posterior probability)似然率的 自然对数ln Pr (X/K)作为评判最优聚类的标准，最大ln Pr (X/K)所对应的 K值为最佳组数。退火温度/Na 等位基Ne 有效等位A 等位基因HoHeoC因数基因数多样性表观杂合度预期杂合度AnnealingN imhpr cf umeroEffectiveAllelic ecObse

22、rvedExpectedtemperaturenumber ofheterozygosityheterozygosityAllelesallelesdiversity63 17 4.952 7.857 0.385 0.78560 26 4.702 7.429 0.206 0.71262 14 4.372 6.714 0.566 0.7596115 5.720 8.000 0.603 0.81260 7 2.048 3.857 0.132 0.46258 14 2.551 4.143 0.185 0.56760 14 3.774 5.714 0.440 0.7235815 3.525 5.571

23、 0.224 0.65962 15 4.661 7.286 0.671 0.77666 8 2.354 4.429 0.492 0.56162 8 2.801 5.429 0.198 0.5852 结果与分析2.1 微卫星位点的多态性及群体的遗传多样性分别采用11对微卫星引物对桂花7个野生群体139个个体样品进行扩增，共检测到153个等位基因（表2）,每个位点的等位基因数（%介于7 26个之间，有效等位基因数（Ne）介于2.048 5.720之间，等位基因多样性（ A 介于3.857 8.00位间，表观杂合度（ 儿）0.132 0.603之间，预期杂合度 （He）介于0.462 0.812之间

24、。图1为位点OSM037在桂花各群体代表性个体中扩 增情况。7个桂花野生群体的遗传多样性如表3所示，基因组DNA多态性均较高，多态位点百分比都为 100%。等位基因多样性（A） 、有效等位基因数（Ne）和预期杂合度（He）的变动范围分别为4.545 8.091、 3.013 4.932、 0.614 0.746，平均值分别为6.039、 3.769、 0.673，均是以千岛湖群体为最高，庐山群体为最低。每个群体特有等位基因数为0 9，其中千岛湖、长汀和铅山群体的特有等位基因数较高，分别为9、 7和 6，庐山和修水群体的特有等位基因数分别为3和 1，而浏阳和星子群体无特有等位基因。7个群体的表观

25、杂合度（Ho）介于0.320 0.451之间，平均为0.373,以修水群体最高，千岛湖群体最低。所有群体的表观杂合度均低于预期杂合度，每个群体内近交系数FIS均显著大于零（0.313 0.580）,表明所有群体均显著偏离哈德 一温伯格平衡（HWE）。用GENEPO瞰件对所有群体进行 了 HWE检测，结果发现在物种水平上极显著地表现出杂合子不足的现象。表2 11个SSR位点信息及野生桂花群体每个位点的遗传多样性参数Table 2 Primers used for SSR amplification and genetic parameters for each loci inOsmanthus

26、fragrans wild populations引物序列Primer SequenceOSM005 F： CCTGAACCCATACAAAGAGAR ： CTAAGCAACAGTACCCAGGAOSM009 F： GCATCTTCATTTTACACACGR ： GTTGAGATTCCTGAATATGGOSM010 F： GTATTCCAGGCTGATGGGTTR ： AAAGCCCAAAGTATGTTCCCOSM017 F： CCTTAGACAATTATTCCGACR ： CAGGTCAAATAAGTTATGCCOSM036 F： CGCTTTAGAATGAACAAGTCR ： CTTCTC

27、TATTTCCACGCAACOSM037 F： CTTGAATCACCATACCTCCTR ： AGAGGAATGAGAAATAGCACOSM038 F： AAGTATTGGGACCATTGGGAR ： TCCACCACTAGAAAGGTATTOSM040 F： GGCTTCCATCTCTACATAAAR ： AACCATGAATTGGTAAACAGOSM041 F： CTCGTCCAATAATGTGTAGCR ： ATGTCCATAGTGAATGCCAAOSM048 F： CGATTGCTGGTGAAGCCCTTR ： TCGTAGGGTGAGCCATCGTTOSM052 F： GTGGTG

28、CTGGGAAGATTATCR ： CCATTAGGTTTCTTTGTGCC平均值 Mean 13.9 3.769 6.039 0.373 0.673总和 Total 153Miirk XS03 XS04 YS02 YS05 YS06 YS13 LS05 LSI 4 CT01 CT03 CT13 CT17150 bp100 bpMarker LY07 LY14 QDH05 QDH06 QDHO7 QDH11 QDH18 QDH19 QDII21 XZOK XZ09 XS01150 bp100 bp图1位点OSM037在桂花各群体代表性个体中扩增情况Fig. 1 Amplification re

29、sult of locus OSM037群体PopulationTable 3Population genetic parameters of seven wildOsmanthus fragransbased on 11 microsatellite lociANeHoHeAPrivF isP等位基因多样性有效等位基因数表观杂合度预期杂合度特有等位近交系数多态位点比率/%AllelicEffective numberObservedExpected基因数InbreedingProportion ofdiversityof allelesHeterozygosityheterozygosity

30、Private allelescoefficientLoci polymorphic表3 基于11个微卫星位点的野生桂花群体遗传参数千岛湖 QDH 8.091 4.932 0.320 0.746 9 0.580* 100长汀 CT 7.364 4.361 0.407 0.713 7 0.354* 100浏阳 LY 5.727 3.271 0.328 0.658 0 0.429* 100庐山 LS 4.545 3.013 0.445 0.614 3 0.313* 100修水 XS 5.000 3.407 0.451 0.643 1 0.329* 100星子 XZ 5.182 3.880 0.33

31、6 0.700 0 0.509* 100铅山 YS 6.364 3.519 0.323 0.659 6 0.432* 100平均值 Mean 6.039 3.769 0.373 0.673 3.714 0.446* 1002.2 瓶颈效应分析经历了遗传瓶颈的群体的表观杂合度通常高于处于突变一漂变平衡群体的预期杂合度（Maruyama & Fuerst, 1985） 。 Wilcoxon符号秩次检验结果显示，IAM模型下只有浏阳群体表观杂 合度不足，其余群体均表现出显著（P < 0.05）或极显著（P < 0.01）冗余（结果未展示）；基于TPM 模型，修水和星子群体显示出极

32、显著的表观杂合度冗余，说明除浏阳群体外，其它群体都经历了近 期瓶颈效应，其中修水和星子群体最为强烈。2.3 群体间遗传分化及遗传距离分析基于Nei遗传距离和F统计量的分析（表4）表明，群体间的遗传距离（DA） 和遗传分化系数（FST）分别介于0.3590.787和0.0520.142之间。群体间遗传分化系数（FST）平均值为0.143。千岛湖群体与长汀群体间的遗传分化最小，而浏阳群体与庐山群体间的遗传分化最大。AMOVA分析表明，12.69%遗传变异来自群体间遗传分化，87.31%遗传变异来自群体内。Mantel检验表明群体 间的遗传距离与地理距离并无明显的正相关性（r = -0.277, P

33、 = 0.214）。表4野生桂花群体间Nei '遗传距离（da,对角线以下）及F统计值（Fst, 对角线以上）Table 4 Nei's genetic distanceDa, below diagonal) andF -statistic(FsT, above diagonainOsmanthus fragranspopulations群体千岛湖长汀浏阳庐山修水星子铅山PopulationQDHCTLYLSXSXZYS千岛湖 QDH 0.052 0.071 0.094 0.068 0.049 0.088长汀 CT 0.3590.072 0.108 0.071 0.074 0.

34、090浏阳 LY 0.419 0.3860.142 0.115 0.092 0.121庐山 LS 0.535 0.562 0.7870.100 0.094 0.128修水 XS 0.389 0.374 0.567 0.4330.070 0.086星子 XZ 0.335 0.490 0.525 0.495 0.3890.095铅山 YS 0.599 0.556 0.674 0.687 0.478 0.6012.4 STRUCTURE聚类分析在STRUCTURE聚类分析中，将 K值设置为2 7,设10次重复，根据K值对应参数ln Pr（X/K） 的趋势分析发现，K = 3时出现明显折点，推断本研究

35、中所有参试个体最佳分组为3个理论群体。图2给出了最佳假设K= 3的所有个体聚类图。由图2可知，江西庐山（LS）、铅山（YS）和修水（XS）群体聚为一组，江西星子（XZ）、湖南浏阳（LY）和福建长汀（CT）群体聚为第2组，浙江千岛湖（QDH）群体聚为第3组。STRUCTURE的分组与群体间的地理距离没有关联，与 Mantel检验的 结果一致。另外，庐山群体与浏阳群体的谱系（或血统，ancestry）比较单纯，而其他群体均存在一定程度的遗传混杂现象（即谱系混杂，admixture）,说明大部分群体间有基因交流。1,000.800.600.400.200庐山LS 的山Y8 修水X8 星子XZ浏阳LY

36、长汀CT 千岛湖QDH图2 基于贝叶斯法聚类分析得到的桂花群体当K = 3时的聚类图图中3种颜色表示3个不同的组群，每条彩色竖线代表各群体的每个个体，不同颜色在各群体所占比例越大，则该群体 被划分到相应组群的可能性越大。Fig. 2 Bayesian STRUCTURE clustering results ( K = 3)based on microsatellite genotype among seven wild populations of Osmanthus fragransEach individual is represented by a single colour line

37、 , there are 3 population groups , the more proportion of the colour, the more possibility of the represented population divided into the corresponding group.3讨论3.1 野生桂花的遗传多样性11个微卫星位点对7个野生桂花群体进行的遗传多样性研究结果（表 3）表明，野生桂花在物种水平预期杂合度（He）0.673，高于Nybom（ 2004）基于微卫星分析得到的植物预期杂合度平均值（ 0.61 ± 0.22），与其它多年生长寿命植

38、物的平均值（He = 0.68）相当，表明野生桂花群体保存着丰富的遗传多样性。研究者普遍认为，异交、多年生、广布植物通常保持较高的遗传多样性（Hamrick， 1990）。桂花的繁育系统属于功能性的雄全异株（郝日明等，2011），另外，在野外很少见到桂花的果实，推断其交配系统以异交为主的可能性较大。桂花为多年生长命木本植物，多生长在有土壤的岩石缝隙中，适应能力极强。另外，中国桂花分布范围广泛，除了经课题组调查确定7个野生群体外，广东、广西、贵州、云南和湖北各省也有野生桂花的标本记录。因此，野生桂花的交配系统、生态习性及分布范围等因素是野生桂花遗传多样性较高的主要原因。然而值得注意的是，野生桂花

39、所有群体的表观杂合度（Ho）均明显低于其预期杂合度（He）,各群体近交系数显著大于0（FIS > 0）,说明野生桂花群体存在严重的近亲繁殖（即近交），这与目前野生桂花群体遭受严重人为破坏，经历了种群衰退（瓶颈效应）是一致的。群体遗传学理论表明，近交不仅降低群体内遗传多样性，而且使得有害基因纯合的几率显著增加，从而造成近交衰退，是野生群体长期生存的重要威胁之一（ Frankham et al.， 2010）。因此，在保存野生桂花种质资源的工作中，应充分考虑到近交对物种生存的影响。通过等位基因多样性、有效等位基因数、特有等位基因数和预期杂合度的检测（表3），发现千岛湖群体和长汀群体的遗传多样

40、性较高，而庐山群体、浏阳群体的遗传多样性相对比较低。在调查中发现，庐山和浏阳两地都有大量桂花苗圃，这些苗圃中很多苗木（尤其是大树）都是从野生群体中直接挖过来的。因此，庐山和浏阳群体较低的遗传多样性可能是人为破坏的结果。相反，千岛湖的桂花群落位于风景名胜区，而长汀的桂花群落已被当地林业部门规划为自然保护小区，人为干扰对这两个桂花群体群落的影响相对较小，从而保留了较高的遗传多样性。另外，修水群体的遗传多样性也比较低，采集中发现该群体生长在河谷两边陡峭的石壁上，生境非常恶劣，许多个体为克隆繁殖的后代（主要表现为根蘖）。在具有克隆生长的群体中，有效群体大小（effective population s

41、ize）远小于非克隆生长群体，从而导致遗传多样性较低。但是，由于该群体非常小，采样时不得不密集采样。由此可见，减少人为干扰，提高生境质量将有利于保存野生桂花遗传多样性。3.2 野生桂花群体间的遗传分化通常情况下，FST值高于0.15的物种被认为是群体间具有显著的遗传分化（ Frankham et al.,2010）。野生桂花群体的FST的值为0.143,表明群体间的遗传分化趋于显著水平，这与AMOVA分析结论一致。AMOVA 分子变异分析显示，仅12.69%的遗传变异存在于群体间，遗传多样性或遗传变异主要分布于群体内，与其它木本植物分析结果相似（Turpein et al.， 2001； Be

42、laj et al.， 2007）。桂花香气可招引昆虫传粉，花粉的远距离传播成为可能；另外，桂花野生群体的天然更新除萌蘖繁殖外，种子繁殖也是一个重要的方式（季荣和季晓波，2005）。桂花的果实为核果，具有一枚种子和丰富的果肉，推测其种子传播方式为鸟类取食后随粪便排出，即动物体内传播（seed dispersal viaingestion或endozoochory）,这种传播方式通常可以将种子带到远处，促进群体间的基因流（ Petit et al.， 2003）。然而，野生桂花多数群体间有大的山脉阻挡，加上人为破坏导致种群衰退（除浏阳外其它群体均检测到瓶颈效应），小群体内随机遗传漂变使得群体间具

43、有接近显著水平的遗传分化。另外，这种随机因素可能也是野生桂花群体的地理距离与遗传距离没有相关性（r =0277, P = 0.214）以及STRUCTURE聚类（图2）没有空间相关性（即地理上相近的群体不聚在一起）的主要原因（ Hutchison & Templeton， 1999）。综上所述，野生桂花群体具有丰富的遗传多样性，是栽培桂花品种选育和品种改良的基因库。但是，由于生境破坏、人为采挖等人类活动的影响，野生桂花生境质量不断降低，种群数量急剧下降，导致所有群体均表现出严重的近交，加大了群体间的遗传分化，严重影响野生桂花的长期生存。因此，建立野生桂花保护小区，通过人工栽培和抚育扩大

44、种群数量，加强群体间的基因交流，将有利于保持野生桂花的遗传多样性和防止近交衰退，为野生桂花种质资源的长期保存和永续利用奠定坚实基础。ReferencesBelaj A , Mu? oz-Diez C , Baldoni L , Proced A , Barranco D , Satovic 乙 2007. Genetic diversity and populations structure of wild olives from the north-western Mediterranean assessed by SSR markers. Annals of Botany , 100： 4

45、49 W58.Cornuet J M ， Luikart G. 1996. Description and power analysis of two tests for detecting recent population bottlenecks from allele frequency data.Genetics, 144: 2001 2014.Doebley J F, Gaut B S , Smith B D. 2006. The molecular genetics of crop domestication. Cell , 127： 1309 T321.Dong Jian-wen

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