《蛋白质性质试验》ppt课件

1、实验实验 蛋白质的部分性质蛋白质的部分性质一、实验原理一、实验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全一样，生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全一样，颜色反响亦不完全一样。颜色反响不是蛋白质的专注颜色反响亦不完全一样。颜色反响不是蛋白质的专注反响，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反响，因反响，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反响，因此不能根据颜色反响的结果来决议被测物能否为蛋白此不能根据颜色反响的结果来决议被测物能否为蛋白质。另外，颜色反响也可作为一些常用蛋白质定量测质。另外，颜色反响也可作为

2、一些常用蛋白质定量测定的根据。定的根据。第一部分、蛋白质的颜色反响二、实验仪器二、实验仪器1、吸管、吸管 2、滴管、滴管 3、试管、试管 4、电炉、电炉 5、pH试纸试纸 6、水浴锅、水浴锅三、实验试剂三、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，倍，3-4层纱布过层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。2、 0.5%苯酚：苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至苯酚加蒸馏水稀释至200ml。3、Millons试剂：试剂：40g汞溶于汞溶于60ml浓硝酸水浴加温助溶浓硝酸水浴加温助溶溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备溶解

3、后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保管。用。此试剂可长期保管。4、尿素晶体、尿素晶体5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10g NaOH溶于蒸馏水，稀释至溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至的乙醇并稀释至100ml.9、 冰醋酸冰醋酸10、浓硫酸、浓硫酸四、实验步骤四、实验步骤一一 米伦米伦Millons反响反响原理：米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝原理：米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的

4、混合物。他能与苯酚及某些二羟基苯衍酸汞的混合物。他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反响。组成蛋白质的氨基酸中只需生物起颜色反响。组成蛋白质的氨基酸中只需酪氨酸含苯酚基团，因此该反响为蛋白质中酪酪氨酸含苯酚基团，因此该反响为蛋白质中酪氨酸存在的根据。氨酸存在的根据。操作：操作：1、苯酚实验：、苯酚实验：取取0.5%苯酚溶液苯酚溶液1ml于试管中，加于试管中，加Millons试剂试剂0.5ml，于电炉上小心加热，溶，于电炉上小心加热，溶液即出现玫瑰红色。液即出现玫瑰红色。2、蛋白质实验：、蛋白质实验：取取2ml蛋白液，加蛋白液，加Millons试剂试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，

5、凝固的蛋出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，凝固的蛋白质出现红色。白质出现红色。二二 双缩脲反响双缩脲反响原理：尿素被加热，那么两分子的尿素放出一分子氨而构原理：尿素被加热，那么两分子的尿素放出一分子氨而构成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中含色的化合物，此反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中含有肽键与缩脲构造类似，故也能进展此反响。双缩脲反有肽键与缩脲构造类似，故也能进展此反响。双缩脲反响可作为蛋白质定量测定的根据。响可作为蛋白质定量测定的根据。 操作：操作：1、取少量尿素晶体放在枯燥的试管中，

6、微火加热使其熔、取少量尿素晶体放在枯燥的试管中，微火加热使其熔化成液体，化成液体， 此时有氨气放出，可用潮湿的试纸检验，此时有氨气放出，可用潮湿的试纸检验，至液体重新结晶出现白色固体时，至液体重新结晶出现白色固体时， 停顿加热，冷却。然停顿加热，冷却。然后加后加10%NaOH溶液溶液1ml，摇匀，再加，摇匀，再加2-4滴滴1% CuSO4溶液，混匀，察看有无紫色出现。溶液，混匀，察看有无紫色出现。 2、取蛋白液、取蛋白液1ml，加，加10%NaOH溶液溶液1ml，摇匀，再加，摇匀，再加2-4滴滴1% CuSO4溶液，混匀，察看有无紫色出现。溶液，混匀，察看有无紫色出现。三三 黄色反响黄色反响原

7、理：蛋白质分子中含有苯环构造的氨基酸如酪氨酸、色氨酸等，于浓原理：蛋白质分子中含有苯环构造的氨基酸如酪氨酸、色氨酸等，于浓硝酸可反响并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯硝酸可反响并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。衍生物硝醌酸等。操作：取一支试管，参与操作：取一支试管，参与1ml蛋白液及浓硝酸蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后留意颜色滴。加热，冷却后留意颜色变化。然后再参与变化。然后再参与10%NaOH溶液溶液1ml，颜色有什么变化？，颜色有什么变化？四四 茚三酮反响茚三酮反响原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的复原茚三酮、茚原理：蛋白质与茚三酮

8、共热，产生兰紫色的复原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反响为一切蛋白质及三酮和氨的缩合物。此反响为一切蛋白质及a-氨基酸所共氨基酸所共有。亚氨基酸脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响呈黄色，有。亚氨基酸脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反响。含有氨基的其他物质亦呈此反响。操作：取蛋白液操作：取蛋白液1ml于试管中，加于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。沸，即有蓝紫色出现。第二部分、蛋白质的沉淀反响第二部分、蛋白质的沉淀反响一、实验原理一、实验原理蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、

9、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。假设条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，对的。假设条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。蛋白质就会从溶液中沉淀出来。蛋白质胶体溶液的稳定要素：水化膜、带电荷。当破坏这两个要素时，蛋白蛋白质胶体溶液的稳定要素：水化膜、带电荷。当破坏这两个要素时，蛋白质中从溶液中析出而产生沉淀。质中从溶液中析出而产生沉淀。二、实验仪器二、实验仪器1、移液管、移液管 2、吸管、吸管 3、试管、试管 4、电炉、电炉三、实验试剂三、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释、卵清蛋白液：鸡蛋清

10、用蒸馏水稀释10-20倍，倍，3-4层纱布层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。2、饱和硫酸铵溶液：、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。蒸馏水中加硫酸铵至饱和。3、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。4、95%乙醇。乙醇。5、醋酸铅溶液：、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml6、硫酸铜溶液：、硫酸铜溶液：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml7、氯化钠晶体、氯化钠晶体8、10%三氯乙酸溶液：三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀

11、释至至100ml9、饱和苦味酸溶液：、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。蒸馏水中加苦味酸至饱和。10、1%醋酸溶液。醋酸溶液。四、实验步骤四、实验步骤一蛋白质的盐析作用一蛋白质的盐析作用原理：向蛋白质中参与大量的中性盐硫原理：向蛋白质中参与大量的中性盐硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等，使蛋白质酸铵、硫酸钠或氯化钠等，使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。于是稳定要素被破电荷的离子所中和。于是稳定要素被破坏，蛋白质聚集沉淀。盐析作用普通不坏，蛋白质聚集沉淀。盐析作用

12、普通不使蛋白量变性。使蛋白量变性。 操作：操作：1、取试管、取试管1支，加蛋白液支，加蛋白液2ml，然，然后加固体硫酸铵后加固体硫酸铵(加的过程要缓慢，加的加的过程要缓慢，加的量要少随时摇匀，直至其饱和大约量要少随时摇匀，直至其饱和大约为为50%。摇匀静置数分钟，那么有球。摇匀静置数分钟，那么有球蛋白析出。蛋白析出。 2、将上述混合液过滤。向滤液中、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐参与少量固体硫酸铵每次参与量逐渐参与少量固体硫酸铵每次参与量约为米粒大小，边加边摇，直至饱和约为米粒大小，边加边摇，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再参与少量为止，此时析出为清蛋白。再参与少量蒸馏水，察看沉淀能否溶解。

13、蒸馏水，察看沉淀能否溶解。二有机溶剂沉淀蛋白质二有机溶剂沉淀蛋白质原理：某些有机溶剂如乙醇、甲醇、丙原理：某些有机溶剂如乙醇、甲醇、丙醇等，因引起蛋白质脱去水化层以及醇等，因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而添加带电质点间的相互降低介电常数而添加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。操作：取一试管加蛋白液操作：取一试管加蛋白液1ml，参与晶体，参与晶体氯化钠少许，待溶解后再加氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇乙醇3ml,摇匀，察看景象。摇匀，察看景象。三重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质三重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质原理：重金属离子如原理：重

14、金属离子如Pb2+、Cu2+等等与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。某些有机酸的酸根那么与蛋白质的自在某些有机酸的酸根那么与蛋白质的自在氨基结合而沉淀。氨基结合而沉淀。 操作：操作：1、取试管、取试管2支，各加蛋白液支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管醋酸铅溶液，另一支管中滴加中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。硫酸铜溶液，至有沉淀产生。四生物碱试剂沉淀蛋白质四生物碱试剂沉淀蛋白质原理：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化原理：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性

15、化合物成为生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜合物成为生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反响的物质称为生物碱试剂，如鞣酸等。当色反响的物质称为生物碱试剂，如鞣酸等。当溶液溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易与生物碱试剂的负离子发生反响而沉淀。容易与生物碱试剂的负离子发生反响而沉淀。操作：取操作：取2支试管，分别参与蛋白液支试管，分别参与蛋白液2ml及醋酸及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，察看景象。滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，察看景象。蛋白质的颜色反响蛋白质的颜色反响蛋白质的沉淀蛋白质的沉淀经过生物化学实验应该做到：v 学习设计一个实验的根本思绪

16、，掌握各个实验的根本原理，学会严密地组织本人的实验，合理地安排实验步骤和时间。v 训练实验的动手才干，学会熟练地运用各种生物化学实验仪器。v 学会准确翔实地记录实验景象和数据的技艺，提高实验报告的写作才干，可以整齐清洁地进展一切的实验，培育严谨细致的科学作风。v 掌握生物化学的各种根本实验方法和实验技术，为今后参与科研任务打下坚实的根底。实验室规那么实验室规那么v 实验前必需仔细预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理。v 实验时自觉遵守实验室纪律，坚持室内安静，不大声说笑和喧哗。v 实验过程中要听从教师指点，仔细按照实验步骤和操作规程进展实验。假想象改良和设计新的实验方法，必需获

17、得教师的赞同。实验时仔细进展实验记录，实验终了及时整理数据，按时上交实验报告。v 实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必需坚持清洁整齐，药品称完后立刻盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品尤其是NaOH洒落在天平和实验台面上，毛刷用后必需立刻挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。v 配制试剂按实验实践运用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进展回收；昂贵试剂需求回收，不得丢弃。v 配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保管在冰箱和冷室中的样品，必需贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必需严密封口。v 强酸强碱以及其他实验废液必需倒入废液桶。电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒入废物桶。v 运用贵重精细仪器应严厉遵守操作规程。运用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。仪器发生缺点应立刻报告教师，未经答应不得本人随意检修。v 实验室内严禁吸烟、饮水和进食， 严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进展。 实验终了必需及时洗净并放好各种玻璃仪器，插好自动部