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文档简介
1、会计学1黏性末端、平末端。第1页/共48页第2页/共48页1.常用的运载体: .质粒; .噬菌体的衍生物; .某些动植物病毒。2.作为基因工程使用的载体必需满足以下条件:.载体DNA必须具备自我复制能力,或整合到受体染色体DNA上,随染色体DNA的复制而复制。.载体DNA最好有多种限制酶的切割位点(最好每种酶的切点只有一个),以便目的基因可以插入到载体上。.载体DNA必须有标记基因,以便重组后进行筛选。.载体DNA必须是安全的,不会对受体细胞有害,或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。.载体DNA分子大小应合适,以便提取和体外操作。第3页/共48页第4页/共48页二.目的基因的获取.从基
2、因文库中获取目的基因.利用PCR技术扩增目的基因1.PCR原理 :DNA的半保留复制模板、引物、dNTP、Taq酶2.条件:3.基本步骤变性(90-95)复性(退火)(55-60) 延伸(70-75)4.经PCR,目的基因呈指数形式扩增(2n).人工合成目的基因1.逆转录法:2.根据蛋白质的氨基酸序列mRNA的序列DNA的序列进行化学合成基因文库基因组文库部分基因文库第5页/共48页第6页/共48页第7页/共48页四.目的基因的检测与鉴定.检测1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因。 检测方法:DNA分子杂交技术(DNA与DNA杂交)2.检测目的基因是否转录出了mRNA。 检测方
3、法:分子杂交技术(DNA与RNA杂交)3.检测目的基因是否翻译成蛋白质。 检测方法:抗原抗体杂交。.鉴定: 个体生物学水平的鉴定,如:抗病鉴定等。第8页/共48页第9页/共48页第10页/共48页第11页/共48页第12页/共48页二.植物组织培养过程:离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织脱分化再分化胚状体植物体外植体植物组织培养条件:1.植物激素: 细胞分裂素、生长素。GO2.其它条件: 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的pH、适时适宜的光照等。高度液泡化、无定形状态的薄壁细胞组成的、排列疏松无规则的组织第13页/共48页植物激素的影响: 植物中 生长素和细胞分裂素
4、是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 植物激素的浓度、使用的先后顺序 以及 用量的比例 等,都会影响实验结果,现小结如下:使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素,后使用细胞分裂先使用生长素,后使用细胞分裂素素先使用细胞分裂素后使用生长素先使用细胞分裂素后使用生长素同时使用同时使用激素用量比值(生长素激素用量比值(生长素/ /细胞分裂素)细胞分裂素)实验结果实验结果此比值高时此比值高时此比值低时此比值低时比值适中时比值适中时有利于细胞分裂,但不利分化细胞既分裂也分化分化频率高有利于根的分化,抑制芽的形成有利于芽的分化,抑制根的形
5、成促进愈伤组织生长第14页/共48页去壁去壁纤维素酶果胶酶原生质体植物细胞原生质体融合离心、振动、电激、再生细胞壁杂交细胞去分化愈伤组织杂种植株筛选再分化聚乙二醇第15页/共48页第16页/共48页第17页/共48页第18页/共48页第19页/共48页第20页/共48页第21页/共48页第22页/共48页第23页/共48页第24页/共48页第25页/共48页第26页/共48页第27页/共48页第28页/共48页第一极体卵丘细胞核透明带卵黄膜黄体退化黄体第29页/共48页第30页/共48页第31页/共48页第32页/共48页第33页/共48页第34页/共48页第35页/共48页第36页/共48页供体母牛受体母牛超数排卵供体公牛配种质量检查、培养胚胎移植妊娠检查分娩(胚胎移植的犊牛)胚胎送入前,受体牛需经过孕激素处理第37页/共48页第38页/共48页三.胚胎干细胞.概念: 简称ES或EK细胞,是由或中分离出来的一类细胞。.特点:1.形态特点: 2.功能特点: 具有,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞,体外培养可。对它可以进行冷冻保存,也可以进行遗传改造。体积小、细胞核大、核仁明显。早期胚胎原始性腺发育的全
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