琼脂糖凝胶电泳原理ppt课件

1、1琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用口腔14022琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同，电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。3琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用胶床准备静置铺胶凝胶准备胶床置于电泳槽中加电泳缓冲液拔梳子上样

2、电泳取出凝胶拍照4琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用5结果初步分析结果初步分析数量分析：条带的宽度， 荧光的亮度。质量分析：纯度 分子量琼脂糖凝胶电泳结果分析琼脂糖凝胶电泳结果分析影响因素：DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比；琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂凝胶中，电泳迁移率不相同；DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大6凝胶电泳结果分析凝胶电泳结果分析常见问题 原因对策DNA条带模糊DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲能

3、力减弱，从而影响电泳效果。TBE建议使用10就更换。7所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm，温度30，巨大DNA链电泳，温度15，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。8有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。出现片状拖带或涂抹带PCR扩增时出现涂抹带、片状带或地毯样带，往往由于酶量多或者酶的质量差，dNTP浓度高，Mg2+浓度高，退火温度过低，循环次数多。减少酶量或更换酶，减少dNTP浓度，适当降低Mg2

4、+浓度，增加模板量，减少循环次数。9不规则DNA带迁移电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度30，巨大DNA链电泳，温度15，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。带弱或无DNA带DNA上样量不够增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降低。10DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。EB染色的DNA所用光源不合适应用短波长（254nm）的紫外光源。DNA带缺尖DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。分子大小相近的DNA带不

5、易分辨增加电泳时间，核准正确凝胶浓度11DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适。在脉冲凝胶电泳上个分析。电泳时ladder扭曲配胶的缓冲液与电泳的缓冲液不是同时配制。同时配制，电泳缓冲液高出胶的1-2mm即可。电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。12琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用1、DNA的制备. 适合分离大片段DNA.琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达107bp的DNA片段. 可提取大分子DNA利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大的DNA片段，可以完全符合构建粘粒基