选修DNA和蛋白质技术教材专题PPT学习教案

1、会计学1选修1高考成功方案 第1步高考成功方案 第2步高考成功方案 第3步第五讲第1页/共65页第2页/共65页一、一、DNA的粗提取和鉴定的粗提取和鉴定1DNA的粗提取原理的粗提取原理(1)根据根据DNA的溶解性，的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同和蛋白质等其他成分在不同浓度的浓度的NaCl溶液中溶解度不同。如图表示溶液中溶解度不同。如图表示DNA在在NaCl溶液中的溶解度随着溶液中的溶解度随着NaCl溶液浓度变化而变化的曲线溶液浓度变化而变化的曲线。(2)根据根据DNA ，可用，可用95%的冷酒精析出的冷酒精析出DNA。(3)根据根据DNA对对 的耐受性。的耐受性。不溶于酒精溶液不溶

2、于酒精溶液酶、高温和洗涤剂酶、高温和洗涤剂第3页/共65页2DNA的提纯的提纯(1)方案一：利用方案一：利用DNA在在 不不同的原理，通过控制同的原理，通过控制NaCl溶液的浓度除去杂质。溶液的浓度除去杂质。(2)方案二：直接在方案二：直接在DNA滤液中加入滤液中加入 ，其中的，其中的 能够分解蛋白质。能够分解蛋白质。(3)方案三：将方案三：将DNA滤液放在滤液放在 的恒温水浴箱中的恒温水浴箱中保温保温1015 min。木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶嫩肉粉嫩肉粉不同浓度的不同浓度的NaCl溶液中溶解度溶液中溶解度6075第4页/共65页3DNA的鉴定的鉴定(1)所用试剂：所用试剂： 。(2)处理方法：将

3、试剂与处理方法：将试剂与DNA溶液混合后溶液混合后 5 min。(3)现象：溶液颜色变现象：溶液颜色变 。二苯胺试剂二苯胺试剂沸水加热沸水加热蓝蓝第5页/共65页二、多聚酶链式反应扩增二、多聚酶链式反应扩增DNA片段片段(1)PCR原理：原理： 。DNA的热变性的热变性DNA缓慢缓慢 ，分离的，分离的DNA链又重新结合成双链又重新结合成双链链DNA冷却冷却第6页/共65页(2)PCR的反应过程：的反应过程：变性：当温度上升到变性：当温度上升到 以上时，双链以上时，双链DNA解聚解聚为为 。复性：温度下降到复性：温度下降到50左右时，两种左右时，两种 通过碱通过碱基互补配对与两条单链基互补配对与

4、两条单链DNA结合。结合。延伸：温度上升到延伸：温度上升到 左右时，溶液中的左右时，溶液中的4种脱氧种脱氧核苷酸核苷酸(A，T，C，G)在在 的作用下，根据的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的碱基互补配对原则合成新的DNA链。链。90单链单链引物引物72DNA聚合酶聚合酶第7页/共65页PCR反应的结果：反应的结果：DNA聚合酶只能特异地复制聚合酶只能特异地复制 的的DNA序列，使这段固定长度的序列呈序列，使这段固定长度的序列呈 扩增。扩增。处于两个引物之间处于两个引物之间指数指数第8页/共65页三、血红蛋白的提取和分离实验三、血红蛋白的提取和分离实验1凝胶色谱法的原理凝胶色谱法的原理凝胶色

5、谱法凝胶色谱法(也称分配色谱法也称分配色谱法)是根据是根据将不同分子分离开来，即：将不同分子分离开来，即： 的蛋的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度 ；而；而 蛋白质不能进入凝胶内部，则移动速度蛋白质不能进入凝胶内部，则移动速度 ，从而使相对分子质量不同的蛋白质得以分离。，从而使相对分子质量不同的蛋白质得以分离。相对分子质量大小相对分子质量大小大分子大分子较慢较慢相对分子质量较小相对分子质量较小较快较快第9页/共65页2血红蛋白分离实验操作血红蛋白分离实验操作第10页/共65页第11页/共65页考点一考点一DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴

6、定考情考情解读解读 本部分在高考中所占的分值不大，近三年来的本部分在高考中所占的分值不大，近三年来的考查有下降的趋势。命题以简答题的形式为主，考考查有下降的趋势。命题以简答题的形式为主，考查点着重于查点着重于DNA粗提取的原理及操作步骤，关于粗提取的原理及操作步骤，关于DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中的溶解与析出，溶液中的溶解与析出，DNA的的鉴定，还将是今后高考的热点之一。鉴定，还将是今后高考的热点之一。第12页/共65页做一题做一题例例1回答下列有关回答下列有关“DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”实验的问题实验的问题。(1)下列有关下列有关“DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”实

7、验原理的叙述正确实验原理的叙述正确的的是是()ADNA在在NaCl溶液中的溶解度，随溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降溶液浓度的降低而减小低而减小B利用利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的精的物质而得到较纯的DNACDNA是大分子有机物，不溶于水而易溶于有机溶剂是大分子有机物，不溶于水而易溶于有机溶剂D在沸水中，在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应遇二苯胺会出现紫色反应第13页/共65页(2)由于鸡血较难找到，某学生试图用人血代替，结果由于鸡血较难找到，某学生试图用人血代替，结果没没有成功，其原因最可能是有成功，其原因最可

8、能是()A操作方法不对操作方法不对 B人血含人血含DNA太少太少CNaCl溶液浓度太高溶液浓度太高 D加二苯加二苯胺太少胺太少第14页/共65页(3)下图为该实验过程中的一些重要操作示意图：下图为该实验过程中的一些重要操作示意图：第15页/共65页正确的操作顺序是正确的操作顺序是_。上图上图C、E步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别是是_和和_。上图上图A步骤中所用酒精必须是经过步骤中所用酒精必须是经过_才能使用才能使用，该步骤的目的是，该步骤的目的是_。为鉴定为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为中所得到的丝状物的主要成分为DNA，可滴，可滴加加_试剂，沸水

9、浴，如果出现试剂，沸水浴，如果出现_则该丝状则该丝状物的主要成分为物的主要成分为DNA。第16页/共65页解析解析 (1)DNA在在NaCl溶液中的溶溶液中的溶解规律如右图所示。解规律如右图所示。DNA不溶于酒不溶于酒精等有机溶剂，在沸水浴条件下，精等有机溶剂，在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺后呈现蓝色。遇二苯胺后呈现蓝色。(2)由于人属于哺乳动物，成熟的红细胞中不含细胞核、线由于人属于哺乳动物，成熟的红细胞中不含细胞核、线粒体，所以几乎不含粒体，所以几乎不含DNA，很难提取到，很难提取到DNA。第17页/共65页(3)DNA粗提取的过程为：红细胞加蒸馏水，涨破后过滤粗提取的过程为：红细胞加蒸馏

10、水，涨破后过滤用用2 mol/L NaCl溶解溶解过滤除去不溶杂质过滤除去不溶杂质加蒸馏水，析加蒸馏水，析出含出含DNA的黏稠物的黏稠物过滤过滤黏稠物溶解在黏稠物溶解在2 mol/L NaCl中中过滤过滤溶于溶于95%酒精进一步提纯，所以根据图示及以上酒精进一步提纯，所以根据图示及以上分析，正确操作顺序为分析，正确操作顺序为CBEDA。第18页/共65页答案答案 (1)B(2)B(3)CBEDA加速血细胞的破裂降低加速血细胞的破裂降低NaCl溶液的浓度，使溶液的浓度，使DNA析出析出充分预冷提取含杂质较少充分预冷提取含杂质较少(或较纯净或较纯净)的的DNA(4)二苯胺二苯胺(或甲基绿或甲基绿)

11、蓝色蓝色(绿色绿色)第19页/共65页链一串链一串1DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较试剂试剂浓度浓度用途用途原理原理NaCl溶液溶液2 mol/L溶解溶解DNADNA在在NaCl溶液中的溶液中的溶解度随溶液浓度的变溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在化而改变，溶解度在2 mol/L时最大、在时最大、在0.14 mol/L时最小时最小0.14mol/L析出析出DNA2 mol/L鉴定时的溶剂鉴定时的溶剂第20页/共65页试剂试剂浓度浓度用途用途原理原理酒精酒精95%(体积体积分数分数)除去杂除去杂质以提质以提纯纯DNADNA不溶于酒精，但是不溶

12、于酒精，但是细胞中的某些物质则可细胞中的某些物质则可以溶于酒精以溶于酒精二苯二苯胺胺/鉴定剂鉴定剂DNA遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)会变蓝色会变蓝色柠檬柠檬酸钠酸钠0.03g/mL抗凝剂抗凝剂除去血液中的钙离子，除去血液中的钙离子，防止血液凝固防止血液凝固第21页/共65页2实验步骤中实验步骤中2次加入蒸馏水的目的次加入蒸馏水的目的第一次加入是使鸡血细胞吸水涨破，第二次是稀释第一次加入是使鸡血细胞吸水涨破，第二次是稀释NaCl溶液至溶液至0.14 mol/L，从而析出，从而析出DNA。第22页/共65页3实验中实验中4次过滤的比较次过滤的比较第一次过第一次过滤滤第二次过滤第二次过滤第三次过

13、滤第三次过滤 第四次过滤第四次过滤滤液滤液中中含含DNA的的核物质核物质DNA溶于溶于0.14 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质DNA 纱布纱布上上细胞膜、细胞膜、核膜等残核膜等残片片不溶于不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质DNA不溶于不溶于2 mol/LNaCl溶液的杂质溶液的杂质第23页/共65页第一次第一次过滤过滤第二次过滤第二次过滤第三次过滤第三次过滤第四次过滤第四次过滤过滤前过滤前加入的加入的物质物质蒸馏水蒸馏水NaCl溶液溶液蒸馏水蒸馏水NaCl溶液溶液过滤的过滤的目的目的去除细去除细胞膜、胞膜、核膜等核膜等杂质杂质去除不溶于去除不溶于2mol/L NaCl

14、的杂质的杂质去除溶于去除溶于0.14 mol/L NaCl溶液溶液的杂质的杂质去除不溶于去除不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质第24页/共65页关键一点关键一点(1)鸡血经济且易制得，鸡血中的红细胞、白细胞都具有鸡血经济且易制得，鸡血中的红细胞、白细胞都具有细胞核，含大量细胞核，含大量DNA。(2)甲基绿可将甲基绿可将DNA染成绿色且不需水浴加热，二苯胺鉴染成绿色且不需水浴加热，二苯胺鉴定定DNA属于颜色反应，需要沸水浴加热属于颜色反应，需要沸水浴加热5 min，可使，可使DNA呈蓝色。呈蓝色。(3)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺

15、会变成浅蓝色，影响鉴定效果。影响鉴定效果。第25页/共65页通一类通一类1DNA粗提取的实验材料中有三次过滤：粗提取的实验材料中有三次过滤：(1)过滤用蒸过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液；馏水稀释过的鸡血细胞液；(2)过滤含黏稠物的过滤含黏稠物的0.14 mol/L NaCl溶液；溶液；(3)过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2 mol/L NaCl溶液。以上三次过滤分别为了获得溶液。以上三次过滤分别为了获得()A含核物质的滤液、纱布上的黏稠物、含含核物质的滤液、纱布上的黏稠物、含DNA的的滤滤 液液B含核物质的滤液、滤液中含核物质的滤液、滤液中DNA黏稠物、含黏稠物、含DNA的的 滤液滤液第26页

16、/共65页C含核物质的滤液、滤液中含核物质的滤液、滤液中DNA黏稠物、纱布上黏稠物、纱布上的的 DNAD含较纯的含较纯的DNA滤液、纱布上的黏稠物、含滤液、纱布上的黏稠物、含DNA的的 滤液滤液第27页/共65页解析：解析：用蒸馏水稀释鸡血细胞液，使血细胞的细胞膜、核用蒸馏水稀释鸡血细胞液，使血细胞的细胞膜、核膜破裂，释放出核物质，此时过滤只能得到含膜破裂，释放出核物质，此时过滤只能得到含DNA和其和其他物质如蛋白质的滤液，这种滤液必须经过实验中其他步他物质如蛋白质的滤液，这种滤液必须经过实验中其他步骤相继处理，方能得到较纯的骤相继处理，方能得到较纯的DNA。DNA在在0.14 mol/L N

17、aCl溶液中溶解度最低，成丝状黏稠物，可经过滤留在溶液中溶解度最低，成丝状黏稠物，可经过滤留在纱布上。纱布上。答案：答案： A第28页/共65页考点二考点二用用PCR技术扩增技术扩增DNA片段片段考情考情解读解读 本部分内容在近几年高中命题中极少出现，本部分内容在近几年高中命题中极少出现，但是但是PCR技术作为前沿科技可能为今后高考提技术作为前沿科技可能为今后高考提供命题的材料和情景出现，预计供命题的材料和情景出现，预计2013年高考可年高考可能与基因工程联系考查其原理及主要的操作要能与基因工程联系考查其原理及主要的操作要领。领。第29页/共65页做一题做一题例例2PCR(多聚酶链式反应多聚酶

18、链式反应)技术是一项在生物体外复制技术是一项在生物体外复制特定的特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答：请据图分析回答：第30页/共65页(1)A过程高温使过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是的是_。A该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键B该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键C该过程不需要解旋酶的作用该过程不需要解旋酶的作用D该过程与人体细胞的过程完全相同该过程与人体细胞的过程完全相同第31页/共65页(2)C过程要用到的酶是耐高温

19、的过程要用到的酶是耐高温的_。这种酶在高温。这种酶在高温下仍保持活性，因此在下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以扩增时可以_加入加入，_(需要需要/不需要不需要)再添加。再添加。PCR反应反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有：除提供酶外，还需要满足的基本条件有：_。(3)如果把模板如果把模板DNA的两条链用的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制酸不做标记，控制“945572”温度循环温度循环3次次，则在形成的子代，则在形成的子代DNA中含有中含有15N标记的标记的DNA占占_。第32页/共65页解析解析 (1)高温所起的作用类似于解旋酶，使双链高温所起的作用

20、类似于解旋酶，使双链DNA变变为单链。为单链。(2)C过程是过程是PCR技术的延伸阶段，当系统温度上技术的延伸阶段，当系统温度上升到升到72左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的聚合酶的作用下合成新的DNA链。这种链。这种DNA聚合酶在高温聚合酶在高温下不变性，所以一次性加入即可。下不变性，所以一次性加入即可。(3)PCR技术遵循半保留技术遵循半保留复制的特点。经过三次循环，共产生复制的特点。经过三次循环，共产生23个个DNA分子，其中分子，其中有有2个个DNA分子含有分子含有15N标记。标记。第33页/共65页答案答案 (1)

21、C(2)DNA聚合酶一次不需要聚合酶一次不需要DNA模板模板、两种引物、四种脱氧核苷酸，通过控制温度使、两种引物、四种脱氧核苷酸，通过控制温度使DNA复制复制在体外反复进行在体外反复进行(3)25%第34页/共65页链一串链一串1PCR过程过程(1)变性：变性：当温度上升到当温度上升到90以上时，双链以上时，双链DNA解聚为单链。解聚为单链。第35页/共65页(2)复性：复性：温度下降到温度下降到50左右，两种引物通过碱基互补配对与两左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链条单链DNA结合。结合。第36页/共65页(3)延伸：延伸：温度上升到温度上升到72左右，溶液中的四种脱氧核苷酸左右，溶液

22、中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的补配对原则合成新的DNA链。链。第37页/共65页2PCR扩增技术和扩增技术和DNA复制的比较复制的比较细胞内细胞内DNA复制复制PCR不不同同点点解旋解旋解旋酶，边解旋边解旋酶，边解旋边复制复制80100高温解旋，高温解旋，双链完全分开双链完全分开酶酶解旋酶，解旋酶，DNA聚合聚合酶，酶，DNA连接酶连接酶Taq DNA聚合酶聚合酶引物引物RNADNA或或RNA能量能量ATP不加不加温度温度体内温和条件体内温和条件高温高温第38页/共65页细胞内细胞内DNA复制复制PCR不不同

23、同点点子链子链合成合成一条链连续一条链连续(先导链先导链)，另一条链，另一条链不连续，先合成片段，再由不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连接连接酶连接(滞后链滞后链)两条子两条子链均连链均连续合成续合成相同点相同点提供提供DNA模板；模板；四种脱氧核苷酸做原料；四种脱氧核苷酸做原料；子链延伸的方向都是从子链延伸的方向都是从5端到端到3端端第39页/共65页关键一点关键一点若没有若没有PCR仪，可进行水浴扩增仪，可进行水浴扩增DNA，设置，设置3个恒温水浴锅，温度分别为个恒温水浴锅，温度分别为94、55和和72，在，在3个水个水浴锅中依据浴锅中依据PCR仪的处理时间来回转移仪的处理时间来回转移

24、PCR反应的微量离反应的微量离心管即可。心管即可。第40页/共65页通一类通一类2标准的标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是这三大步需要的温度依次是 ()A92、50、72B72、50、92C50、92、72 D80、50、72第41页/共65页解析：解析：当温度上升到当温度上升到90(9096)以上时，双链以上时，双链DNA解解聚为单链，称之为变性；当温度下降到聚为单链，称之为变性；当温度下降到50(4060)左左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合结合；当温度上升到

25、；当温度上升到72(7075)左右时，溶液中的四种脱左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸氧核苷酸(A、T、C、G)在在TaqDNA聚合酶的作用下，根聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。链，称为延伸。答案：答案： A第42页/共65页3下图是哪次循环的产物下图是哪次循环的产物 ()A第一次循环第一次循环 B第三次循环第三次循环C第二次循环第二次循环 D第四次循环第四次循环第43页/共65页解析：解析：在在PCR反应中，以引物为标记，第一次循环时，反应中，以引物为标记，第一次循环时，以加入的以加入的DNA为模板，两条为模板，两条DNA链可分别由引物链

26、可分别由引物和引和引物物与其结合并在与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸，所以形成聚合酶的作用下延伸，所以形成的每个子的每个子DNA中只有一种引物；从第二次循环开始，上中只有一种引物；从第二次循环开始，上次产生的次产生的DNA分子又可作为模板参与反应，所以会形成分子又可作为模板参与反应，所以会形成DNA分子两端均含引物的情况。分子两端均含引物的情况。答案：答案：A第44页/共65页考点三考点三血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离考情考情解读解读 本考点内容属本考点内容属生物技术实践生物技术实践中难点之一，中难点之一，近年高考多有涉及，考查点多围绕血红蛋白提取过近年高考多有涉及，考查点多围绕

27、血红蛋白提取过程及分离原理、凝胶色谱法、透析原理及电泳法纯程及分离原理、凝胶色谱法、透析原理及电泳法纯化蛋白质等，题目难度相对较大，但一般不涉及凝化蛋白质等，题目难度相对较大，但一般不涉及凝胶柱制作及装填过程操作，胶柱制作及装填过程操作，2013年备考应格外关注。年备考应格外关注。第45页/共65页做一题做一题 例例3红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O2或或CO2。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行

28、实验，来提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题：验，来提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题：(1)实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是柠檬酸钠的目的是_。第46页/共65页(2)在对样品进行处理时，主要包括在对样品进行处理时，主要包括_、血红蛋白的、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技术的原理是术的原理是_。(3)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行

29、分同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速率的因素包括离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的蛋白质分子的_、_以及分子的形状等以及分子的形状等。(4)同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离(如图一如图一)，他在操作中加样的正确顺序是他在操作中加样的正确顺序是_，在执行图一，在执行图一中中所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该_(打开或关闭打开或关闭)。第47页/共65页(5)图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种

30、样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是对应的是_。第48页/共65页解析解析 (1)加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。(2)对样对样品的处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红品的处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析的原理是小分子可以自蛋白溶液、透析等步骤。其中透析的原理是小分子可以自由进出透析袋由进出透析袋(半透膜半透膜)，而大分子不能通过。，而大分子不能通过。(3)电泳时，电泳时，影响蛋白质迁移速率的因素有蛋白质分子大小、带电性质影响蛋白质迁移速率的因素有蛋白质分子大

31、小、带电性质及分子的形状等。及分子的形状等。(4)正确的加样顺序可依据样品在色谱柱正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是；同；同时进行时进行所示环绕加样时，应打开下出口。所示环绕加样时，应打开下出口。(5)SDS凝胶电凝胶电第49页/共65页泳装置是垂直的装置，此种电泳方法主要取决于蛋白质分泳装置是垂直的装置，此种电泳方法主要取决于蛋白质分子量的大小，与电荷无关，同时加样在子量的大小，与电荷无关，同时加样在“”极，通电后，极，通电后，样品蛋白质向样品蛋白质向“”极移动，分子量相对小的，移动距离大极移动，分子量相对小的，移动距

32、离大，因此从图二的电泳结果分析，因此从图二的电泳结果分析，P比比N、M移向移向“”距离大距离大，说明，说明P的分子量相对比较小，因此洗脱出来的时间比较的分子量相对比较小，因此洗脱出来的时间比较长，符合图三中的丙。长，符合图三中的丙。第50页/共65页答案答案 (1)防止血液凝固防止血液凝固(2)红细胞的洗涤小分红细胞的洗涤小分子可以自由进出透析袋子可以自由进出透析袋(半透膜半透膜)，而大分子不能通过，而大分子不能通过(3)大小带电性质大小带电性质(4)打开打开(5)丙丙第51页/共65页链一串链一串1DNA与蛋白质提取的比较与蛋白质提取的比较提取提取物质物质提取提取方法方法提取原理提取原理步骤

33、步骤DNA盐析盐析法法在不同浓度的在不同浓度的NaCl溶液中溶解溶液中溶解度不同；度不同；不溶于酒精，不溶于酒精，但某些化合物溶但某些化合物溶于酒精于酒精溶解在溶解在2 mol/L的的NaCl的溶液中；的溶液中；NaCl溶液加水稀释溶液加水稀释0.14 mol/L，使，使DNA 析出、过析出、过滤；滤；加入冷酒精析出加入冷酒精析出第52页/共65页提取提取物质物质提取方法提取方法提取原理提取原理步骤步骤血红血红蛋白蛋白凝胶色谱凝胶色谱法、电泳法、电泳法法根据相对分子量的大小；根据相对分子量的大小；各种分子带电性质的差各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、性异以及分子本身大小、性状的不同状的不

34、同样品处理；样品处理；粗提取；粗提取；纯化；纯化；纯度鉴定纯度鉴定第53页/共65页2实验结果的分析与评价实验结果的分析与评价第54页/共65页项目项目分析分析凝胶色谱凝胶色谱柱的装填柱的装填放一支与凝胶柱垂直的日光灯放一支与凝胶柱垂直的日光灯直接检查直接检查加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖2 000或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整平整装填成功装填成功血红蛋血红蛋白的分离白的分离血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出随洗脱液缓慢流出分离成功分离成功第55页/共65页关键一点关键一点

35、 (1)调节缓冲剂的使用比例可以制得不同调节缓冲剂的使用比例可以制得不同pH范围的缓冲液。范围的缓冲液。 它是模拟生物体内各种生化反应的一个基本保障。它是模拟生物体内各种生化反应的一个基本保障。(2)与与DNA提取不同，哺乳动物的红细胞无核，为提取血红提取不同，哺乳动物的红细胞无核，为提取血红 蛋白提供了方便。蛋白提供了方便。(3)血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过 观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋 白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。第56页/共65页通一类通一类4(双选）下列关于血红蛋白提取和分离实验中双选）下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是样品处理步骤的描述，正确的是()A红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短短时间离心时间离心B血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁磁力搅拌器上充分搅拌力搅拌器上充分搅拌第57页/共65页C分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离用分液漏斗分离D透析：将血红蛋白溶液