贲门腺癌P170蛋白表达的研究

1、贲门腺癌P170蛋白表达的研究 作者：彭学宏，陈暖，许建衡，林静华，焦晓阳 【关键词】 贲门肿瘤 摘要 目的:研究并探讨P170蛋白在贲门腺癌组织中的表达及其意义。方法：用流式细胞术检测55例贲门腺癌患者癌组织和距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织P170。结果：55例贲门腺癌组织P170阳性表达率为50.9%,癌旁正常组织未见P170表达，两者差别有统计意义。结论：贲门腺癌组织中具有多药耐药性,检测癌组织P170表达水平对化疗效果有一定意义。关键词 贲门肿瘤；药物耐受性；基因表达；流动血细胞计数Study on P170 Protein Expression in Cardiac Adenoca

2、rc InomaAbstract:Objective To study the expression and signicance of P170 protein in cardiac adenocarcinoma.Methods The expression of P170 protein in 55 cases of cardiac adenocarcinoma was detected by flow cytometry.Results The positive expression rate of P170 protein was 50.9% in 55 cases of cardia

3、c cancer tissue.Normaltissue near cancer has no positive expression of P170 protein.There was an obvious difference between normal and cancer tissue.Conclusion There was multiple drug tolerlance in cardiac adenocarcinoma,detection of P170 protein expression in cancer tissue had significance in evalu

4、ation of chemotherapy.2 / 9Key words：Cardiac neoplasms；Drug tolerlance；Gene expression；Flow cytometry耐药现象是肿瘤化疗所面临的最常见和最棘手的问题，其结果是肿瘤病人对化疗无效，降低病人的生存期。多药耐药性（MDR）是指抗某种细胞毒药的耐药细胞对许多结构上无关和作用机制上不同的其他细胞毒药物产生交叉耐药。产生MDR的分子基础是人的mdr1基因高表达引起P170蛋白表达增强，本文应用流式细胞术检测P170蛋白，研究并探讨mdr1基因编码的蛋白P170在贲门腺癌组织中的表达及其意义。1材料与方法1.

5、1临床资料 我院近2年住院手术的贲门腺癌患者55例，男47例，女8例。年龄47岁76岁。入选标准：术前经胃镜病理活检确诊为贲门腺癌，术前未接受化疗，肿瘤病灶起源于贲门，性别、年龄不限。术中取贲门癌组织及距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织各一块，采用流式细胞术，检测P170蛋白。1.2试剂 鼠抗人MDR产物，（P170）单克隆抗体（Immunotech公司，法国），FITC标记兔抗鼠Ig（Dako公司，丹麦）。1.3流式细胞仪检测方法1.3.1实体瘤组织单细胞悬液制备 术中取新鲜贲门癌及距离肿瘤5 cm以上正常癌旁组织0.2 g1.0 g，以生理盐水洗去血迹，至于重叠的100目铜网和260目尼龙网

6、上，以眼科剪剪成1 mm3碎块，在以眼科镊夹持组织在铜网上轻搓，边挫边以磷酸盐缓冲液（PBS）将搓下的细胞洗入网下的平皿内，直至组织搓完。将收集的细胞悬液以260尼龙网过滤一次去除组织碎块，收入10 ml试管内离心（1 500 r/min，10 min），弃去上清再以PBS漂洗，同前述方法离心2次，均弃上清，备用。1.3.2免疫标记 标记前用PBS漂洗离心1次（1 500 r/min，10 min）以去除固定剂，再将每分悬液分两管，其一加20 l P170工作液（一抗），其二加20 l羊抗鼠IgG（一抗）工作液，室温下20 min，离心（2 000 r/min，5 min），除上清后加1 ml

7、 PBS漂洗离心2次，再向上两管中各加20 l羊抗鼠IgGFITC、室温避光30 min，离心后去除上清以除去未结合的荧光抗体，以PBS漂洗离心2次，均弃上清，最后加500 l PBS待检。取少许细胞液图片，在荧光镜下可见P170阳性细胞光点位于细胞膜上。1.3.3流式细胞仪检测 上机前以标准荧光微球调整仪器使变异系数在2.0以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试后在计算机上用Cell Quest Plot软件分析数据，由打印机打印结果，包括点图和组方图。MDR1表达产物P170膜糖蛋白含量以P170阳性细胞百分率表示（细胞膜含P170糖蛋白的细胞称为P170阳

8、性细胞），其计算方法：P170阳性细胞P170阳性细胞数/（P170阴性P170阳性细胞数）×100非特异结合细胞数/所收集细胞数×100。阳性表达程度：低表达P170值<10%,中度表达P170值为1030，高表达P170值>30%。1.4统计2检验。2结果P170蛋白在贲门腺癌组织中的具体表达情况如表1。表1 P170在贲门腺癌组织的表达（略）距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织，55例标本均未见P170表达。3讨论耐药现象是化疗所面临的最常见和最棘手的问题，其结果是化疗对肿瘤病人无效或疗效降低。MDR即肿瘤细胞对许多常见化疗药物产生抗药性和交叉

9、抗药的能力。产生MDR的分子基础是人的mdr1基因引起P170蛋白表达增强1。P170是一种分子量为170KD的糖蛋白，已证实其表达与肿瘤细胞的耐药程度正相关1，2。这种蛋白嵌插在细胞的浆膜上，作为一种能量依赖的药物流出泵，通过ATP提供能量，与化疗药物结合，将进入细胞内的药物泵出细胞外，从而使药物在细胞内浓度不断下降，导致细胞毒性作用减弱或丧失而产生耐药现象。与MDR相关的药物称之为MDR药物，一般包括植物碱类、抗生素类、烷化剂类、激素类等一些分子量较大的亲脂类化合物。对P170高表达者应避开MDR药物。有研究表明，P170蛋白在肾、肾上腺、肝、胃、结肠的上皮细胞表面有不同程度表达，来源于上

10、述器官的恶性肿瘤P170蛋白表达均有增高35，提示组织器官发生肿瘤后，肿瘤细胞所具有的内在抗药性与P170蛋白表达有关。本文研究发现贲门腺癌组织有P170蛋白表达，阳性表达率50.9%，癌旁正常组织未见P170表达，两者差别有统计意义（P<0.05）。提示贲门腺癌总体化疗效果不令人满意的原因之一与贲门腺癌所具有的内在抗药性有关。本组资料显示P170蛋白与贲门腺癌患者的性别、年龄、临床分期、淋巴结转移无关（P>0.05），提示P170蛋白作为一种多药耐药基因与贲门癌生物学行为无关。参考文献：1Fuji H,Tanjgawa N,Muraoda R,et al.Dete

11、ction of Pglycoprotein by flow cytometry.Anticancer Res,1993,13:2171.2Sukbitz KM.Pglycoprotein and multidrug resistance.Am J Clin Pathol,1990,93:156.3Pavelic ZP,Reising J,Pavelic,et al.Detection of Pglycoprotein with four monoclonal antibodies in normal and tumor or tissues.ArchOtolaryngol Head Neck Surg,1993,119:753.4Goldstein LJ,Galski H,Fojo AT,et al.Expression of a multiddrug resistance gene in hum