抗生素产生菌的分离与筛选

1、题目：抗生素产生菌的分离与筛选(地衣孢杆菌产生菌的分离与筛选)地衣类 产生的物质被总称为地衣成分(德 Fie chtenstoff), 但其中多为地衣所特有的有机酸类的成分特称为地衣酸。大 致分为高级脂肪酸和芳香族酸。前者属于在冰岛衣中发现的 原地衣甾酸(d protolichesteric acid ),约有数十种，后者是在石茸属(Gyrophora)、蓝藻衣属(CyanoPhila )等中的石茸酸，已知约有30种缩酚酸类，在睫毛苔中发现了水杨嗪 酸(salazinic acid )并记载了包括水杨嗪酸在内共有12 13种缩酚酸环醚类(depsidones)。除扁枝衣 属外，还广泛分布 在如

2、粉衣科(Calliciaceae )、粉果衣科(Crpheliaceae)、茶渍 科(Lecanoraceae)、猿麻桛科等中已知有数种枕酸类。其他 各种石蕊属(Cladonia、的红色子器的色素红石蕊酸(rhodocladonic acid、属于蒽醌类的约有 10种。地衣是藻类 和菌的共生体。一般认为是以藻类的同化产物为原料由菌类 制造出地衣成分。在地衣的分类中，非常重视地衣成分，通 过提取出来的成分即地衣酸对各种试剂的呈色反应的有无10#屋權古举ASCM皿COOCKsVOL二J 二严仝 QCO来鉴定其类属。种类:地衣酸有多种类型。从1944年开始研究地衣抗菌物质，迄今已知的地衣酸有 300

3、多种。据估计50%以上地衣种类都 具这类抗菌物质。如松萝酸(usnic acid)、地衣硬酸(liches terinic acid)、去甲环萝酸 (evernic acid)、袋衣酸 (physodic acid)、小红石蕊酸(didymicacid)、绵腹衣酸(anziaicacid)、柔 扁枝衣酸(divaicatic acid)、石花酸(sekikaic acid)等。这些抗菌 物质对革兰阳性细菌多具抗菌活性，对于抗结核杆菌有高度 活性。地衣抗菌素在德国以 “EVsin I”包括松萝酸及去甲环萝酸),“ Evosin II ”包括松萝酸、袋衣酸及袋衣甾酸(physodalic acid

4、)两种产品在医疗使用；在瑞士、奥地利、芬兰、前苏联等国则以松萝酸的多种剂型作为治疗新鲜创伤以 及表面化脓性伤口的有效外用抗菌素。实验目的:1. 明确培养基的配制原理2. 熟悉配制培养基的一般步骤和方法。3. 掌握抗生素产生素的分离和筛选的原理方法。实验原理：芽孢杆菌能产生丁质醇，葡聚糖醇等蛋白，抗菌肽一些次级 代谢产物。其产生的肽类抗生phimuniuns(Sal)、大肠杆菌Escherichiacoli(E . coli)、女口 IturinA、bacillomycin 、bacitracin、 gramicidin、Kanosamine、GramicidinS(GS)等在些肽类抗生素 主要

5、抑制革兰氏阳性菌，有些还能抑制革兰氏阴性菌和酵 母。其中有一些抗菌肽与被用于生物表面活性剂，食品防腐 剂。我们利用一株对食品腐败微生物有拮抗作用的菌株进行 分离鉴定抑菌效果评价及活性物质的初步提取。实验仪器.试剂：土样.有机质样品.各种泡菜及传统型食 品.大型真菌.各种酶产品.植物样品。NA+青霉素纳盐； LB培养基51 ; King ' B 琼脂培养基嘲；BCP培养基61 ; MRS培养基。TYG培养基(蛋白胨l %、酵母浸粉0.5%、葡萄糖 1%、MnSO0. 02%、琼脂 20g、pH7. 0)。主要仪器设备：UNIC0UV2000 可见紫外分光.光度计;EPPENDORF541

6、4离心机；DKS 24恒温水 浴锅实验步骤：1指示茵合茵平板的制备 将培养24h的指示菌制成菌悬 液，在600nm波长下测定0D值，将适量指示菌加入到冷却 至55 C的无菌TYG培养基中，混匀，以每皿 25mL倒平皿。各指示菌加样量用加样体积mLxOD值表示（100mL培养基）：枯草芽孢杆菌为 0.499;蜡状芽孢杆菌为 0. 52;大肠杆菌为 1. 56; 酵母为0. 96; 鼠伤寒沙门氏菌 1. 62 :金黄色葡 萄球菌0 . 76。2具有抑茵活性的细菌菌株的分离用菌种分离的材料进行分离.挑取单菌落以点样法点在含指示菌的培养基上，30 C培养箱中培养24h,挑选有抑菌活性的单菌落，接种于L

7、B斜面培养基上培养24h后于4 C冰箱中保存.备用。4菌株抑茵活性代谢曲线的制作 以Be为指示菌制成含菌平 板。将菌株接种于含 lOOmLTYG发酵液的500mL三角瓶中， 30C, 200rm in发酵24h得种子液，以5%的量再次接种 于含100mL TYG发酵液的500mL三角瓶中进行二级发 酵，相同条件发酵72h。每隔6h取样，600nm波长测其OD值。经离心后取上清液做抑菌活性测定， 以每个牛津杯加200 L上清液做抑菌试验。以二级发酵起始为原点，时间（h）为横坐标，抑菌圈大小（mm）及OD值大小为纵坐标，制作活 性时程曲线。1801菌株的初步鉴定1801菌株在生长过程中产生芽孢，可判定为芽 孢杆菌。该菌革兰氏染色为阳性.菌体为杆状。培养36h产生芽孢，孢子萌发时.在营养细胞的顶端到赤道都