COX2与Ecad在子宫内膜腺癌组织表达及其意义

1、COX2与Ecad在子宫内膜腺癌组织表达及其意义【摘要】 目的 探讨环氧合酶2（COX2）与上皮型钙黏素（Ecad）在子宫内膜腺癌组织表达及其临床意义。方法 应用免疫组化EnviSion法检测20例正常子宫内膜和70例子宫内膜腺癌中COX2、Ecad表达情况。结果子宫内膜腺癌组织中COX2表达阳性率则明显高于正常子宫内膜组织（P=0.000 0），而Ecad表达阳性率则明显低于正常子宫内膜组织（2=18.79,P<0.001）；COX2表达阳性率与病人年龄、病理分级及手术病理分期均无关（Hc=1.050、5.566、5.358，P>0.05），而与子宫肌层浸润深度及

2、淋巴结转移有关（uc=3.015、5.237，P<0.01）；Ecad 表达阳性率与病理分级、手术病理分期、子宫肌层浸润深度及淋巴结转移均有关（2=4.389，P<0.05、0.01）；子宫内膜腺癌组织COX2的表达与Ecad呈负相关（r=-0.264，P<0.05）。结论 在子宫内膜腺癌的发生发展中COX2和Ecad可能起重要作用；COX2表达与子宫内膜腺癌侵袭和转移关系密切，Ecad可能是COX2表达调控的重要因子之一。 【关键词】 环氧合酶2 上皮型钙黏素 子宫内膜肿瘤 免疫组织化学 ABSTRACTObjectiveTo study the e

3、xpression of Cyclooxygenase2 (COX2) and Ecadherin (Ecad) in endometrial adenocarcinoma and its clinical significance. MethodsThe expression of COX2 / 232 and Ecad in normal endometrium (n=20) and endometrial adenocarcinoma (n=70) was measured by EnviSion immunohistochemistry. ResultsThe positive exp

4、ression rate of COX2 in the endometrial adenocarcinoma was significantly higher than that in the normal endometrium (62.86% vs 0), while that of the Ecad in the adenocarcinoma was significantly lower than that in the normal endometrium (45.71% vs 100.00%, 2=18.79, P<0.001). The expression of

5、COX2 was not correlated with the patients age，pathological grade and clinical stage （Hc=1.050，5.566，5.358;P>0.05 ）, but correlated with the myometrial invasion and lymph node metastasis （uc=3.015,5.237；P<0.01）. Inverse correlation was observed between the expressions of COX2 and Ecad i

6、n the malignancy （r=-0.264，P<0.05）. ConclusionCOX2 and Ecad may play an important role in the pathogenesis of endometrial adenocarcinoma；COX2 expression is closely related to the infiltration and metastasis of this disease，and Ecad may be one of major regulators in the COX2 expression. KEY WO

7、RDScyclooxygenase2; Ecadherin; endometrial neoplasms; immunohistochemistry 子宫内膜癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20%30%1。据统计，近年来子宫内膜癌的发病率有明显上升的趋势，严重影响妇女的生命健康。子宫内膜腺癌的发病机制复杂，与雌激素有直接的关系，并常涉及一系列复杂的基因事件。近年来，大量研究发现，环氧合酶2（COX2）在人体多种肿瘤组织中高表达并与肿瘤的进展密切相关2，3。上皮型钙黏素（Eiad）是钙黏附蛋白分子家族中跨膜蛋白亚型的一种，广泛分布于各种上皮细胞中，

8、对维护上皮细胞的形态和结构完整性起着重要作用。本研究旨在通过免疫组化方法检测COX2及Ecad在子宫内膜腺癌组织中的表达情况，探讨其临床意义，为临床诊断、治疗提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料及来源 收集青岛大学医学院附属医院病理科1996年5月2001年12月的子宫内膜癌手术标本70例，均为子宫内膜腺癌，按WHO标准进行病理组织学分级，高分化癌23例，中分化癌32例，低分化癌15例；按国际妇产科联盟（FIGO，1988）手术病理分期，期38例，期17例，期15例；1/2肌层浸润者30例，1/2肌层浸润者40例；无淋巴结转移者42例，有淋巴结转移者28例。70例病人，年龄3571岁，

9、平均55.8岁。未接受化学药物、放射治疗及性激素治疗。 另选择正常子宫内膜20例（其中分泌期10例，月经期10例）作为对照。所有标本均用40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，所有内膜组织均经病理学检查证实。 1.2 检测方法 免疫组织化学染色采用EnviSion法，COX2（COX229）鼠抗人单克隆抗体，Ecad（4A2C7）鼠抗人单克隆抗体及PV9000免疫组化试剂盒均购自北京中山生物试剂有限公司。阳性对照用已知阳性片；阴性对照省略抗，以PBS代替。 1.3 结果判断 COX2免疫组化染色以细胞质内出现棕黄色颗粒者为阳性染色。结果评分参照文献4，5方法，用双盲法，根据COX2阳性细胞百分比及染色

10、强弱评分计算COX2免疫组化染色评分。阳性细胞百分比评分（a）:0分,无阳性细胞；1分,阳性细胞占1%10%；2分,阳性细胞占11%50%；3分,阳性细胞占51%80%；4分,阳性细胞占81%100%。阳性细胞染色强度评分（b）:0分,阴性；1分,弱阳性；2分,中度阳性；3分,强阳性。a、b两项乘积即为COX2免疫组化评分。按其评分,04分为（+），58分为（），912分为（），其中（）（）视为高表达。 Ecad为细胞膜表达蛋白，在正常组织中均匀一致地表达于上皮细胞膜，呈线性棕黄色着色，染色良好。按照SCHIPPER等6介绍的方法，以正常组织作阳性对照进行定性分类。阳性:组织细胞Ecad染色均

11、匀一致类似于正常组织;异质性:细胞染色强度不一致，阳性和阴性反应细胞混杂存在或细胞浆着色;阴性:细胞均呈阴性反应。其中阳性为正常表达，异质性及阴性为异常表达。 1.4 统计学处理 采用SPSS统计软件包进行数据处理，数据间比较采用2检验及秩和检验。相关性检验采用Spearman等级相关性分析。 2 结 果 2.1 COX2及Ecad在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达 子宫内膜腺癌组织中COX2的表达阳性率明显高于正常子宫内膜组织(P=0.000 0);而Ecad表达阳性率则明显低于正常子宫内膜，差异有显著意义（2=18.79，P<0.001）。见表1。多数癌组织中Ecad表

12、达见于细胞浆，胞膜染色减少甚至消失。2.2 COX2及Ecad表达与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系 COX2表达与病人年龄、病理分级、手术病理分期均无关（Hc=1.050、5.566、5.358，P>0.05），而与肿瘤子宫肌层浸润深度、淋巴结转移有关（uc=3.015、5.237，P<0.01）。Ecad表达与年龄无关（2=1.051，P>0.05），而与病理分级、手术病理分期、子宫肌层浸润深度及淋巴结转移均有关（2=4.38910.480，P<0.05、0.01）。见表2。 2.3 子宫内膜腺癌中COX2与Ecad的关系 相关分析表明

13、，COX2的表达与Ecad呈负相关（r=-0.264，P<0.05）。见表3。表1 COX2及Ecad在子宫内膜腺癌和正常子宫内膜组织中的表达2 COX2及Ecad表达与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系表3子宫内膜腺癌中COX2与Ecad表达的关系 3 讨 论 近年来，大量的研究显示，COX2在人体多种肿 瘤组织中高表达，并与肿瘤的进展密切相关2，3。国内外部分作者报道了COX2在子宫内膜癌中的表达情况，认为与正常子宫内膜组织相比，子宫内膜癌组织中COX2的表达显著增高7。但对COX2表达与子宫内膜癌的临床病理参数关系研究所得的结论不一致甚至截然相反。OREJUELA等8的研究认为

14、，COX2与子宫内膜癌的临床病理参数均无关。而KILIC等9和TOYOKI等10研究结果表明，COX2在高分化子宫内膜癌组织中表达阳性率显著高于低、中分化子宫内膜癌组织，而与手术临床分期无关，认为COX2在子宫内膜癌癌变的早期而非进展期中发挥作用。LAMBROPOULOU等11研究显示，COX2在高分化子宫内膜癌组织中呈弱阳性表达，而在低、中分化子宫内膜癌组织中呈强阳性表达，COX2与手术临床分期和肌层浸润程度相关，提示COX2在子宫内膜癌的进展期而非启动或形成时发挥作用。各研究对COX2在子宫内膜癌中的作用所得出结论不一致的原因还不清楚，但可能是由于技术上的差异引起的，如所选择的抗体不同或对

15、染色的解释不同，也可能是由于所研究人群的种族或地域上的差异引起的。 本研究中，COX2表达在子宫内膜腺癌病理学分级及手术病理分期之间，差异均无显著意义，但均有上升趋势。表明COX2表达不但参与子宫内膜腺癌早期发生，而且还在其进展过程中发挥作用。这与有关文献认为COX2表达只在子宫内膜腺癌发生早期或只在其进展中发挥作用不同911。目前认为，COX2促进肿瘤发生发展的可能机制主要是：COX2通过诱导细胞增殖、抑制细胞凋亡、活化致癌物质和抑制机体抗肿瘤的免疫应答，同时促进肿瘤新生血管生成等而参与肿瘤的发生和发展。其确切机制尚需进一步的研究与探讨。 本研究结果表明，COX2蛋白主要在子宫内膜腺癌细胞质

16、中表达，阳性率为62.82%，正常子宫内膜组织表达弱而少，提示COX2的高表达在维持子宫内膜肿瘤细胞生存活动中可能具有重要作用。同时，COX2在有淋巴结转移和浸润深肌层的子宫内膜腺癌组织中的表达明显高于无淋巴结转移和仅浸润浅肌层者，提示COX2表达与子宫内膜腺癌的生物学行为相关，其机制可能是通过介导浸润转移而参与子宫内膜腺癌的发展。COX2参与肿瘤侵袭和转移的具体机制尚不明了，可能是COX2降低了介导凋亡的转化生长因子受体和细胞间黏附的Ecad活性12，并且提高细胞与细胞外基质蛋白黏附能力，同时COX2的过度表达能激活细胞外基质金属蛋白酶，促进细胞外基质的分解13；而且表达COX2的癌细胞可产

17、生旁分泌区域效应，使邻近上皮细胞表达COX2，继而恶变，促进肿瘤的扩散4。 本研究显示，子宫内膜腺癌组织中存在Ecad表达降低的现象，Ecad作为参与细胞间黏附作用的重要黏附分子，其表达下降与子宫内膜腺癌细胞间的黏附力下降密切相关，导致子宫内膜腺癌细胞易于脱落，从而使子宫内膜腺癌细胞具有向肌层浸润性生长的条件。VLEMINCKX等14报道，小鼠乳腺细胞在用Ecad转染后浸润能力丧失，经Ecad反义RNA下降Ecad的表达后，重新具有了浸润能力，这进一步说明Ecad的表达与肿瘤细胞的浸润能力密切相关。另有研究表明，具有侵袭性组织学特征的肿瘤细胞常有Ecad表达下调或缺失，浸润性生长的肿瘤其Eca

18、d表达异常的发生率显著高于膨胀性生长的肿瘤15。本研究结果显示，随着肌层浸润深度的增加、FIGO分期的进展以及淋巴结转移的发生，Ecad的阳性表达率降低，与文献16报道相一致。提示Ecad的表达异常可直接引起肿瘤细胞趋向离散，易于从原发灶脱落，侵犯邻近组织与血管，继而出现远处转移。Ecad表达降低与临床病理结果提示的肿瘤的侵袭转移特性明显相关，当肿瘤细胞缺失其表面的Ecad时，肿瘤易于侵入肌层，Ecad表达越低，肌层浸润越深，提示Ecad表达降低可能是子宫内膜腺癌深肌层浸润的一个重要危险信号。 BALARAM等17研究表明，Ecad表达明显异常或缺失与肿瘤细胞高侵袭力密切相关，可导致肿瘤细胞黏

19、附性下降并促进其浸润、局部复发、淋巴结转移和远处播散。本研究显示，COX2表达与Ecad阳性表达呈显著负相关，而且COX2高表达与Ecad阳性表达降低均与子宫内膜腺癌的淋巴结转移、肌层浸润深度密切相关。COX2可增加肿瘤细胞侵袭、转移的潜能，但这种潜能是否与Ecad异常表达之间有关联呢？为此，本研究探讨了COX2和Ecad之间在子宫内膜腺癌中表达的可能关系。结果显示，随着病变的恶性进展，Ecad阳性表达水平降低而COX2表达阳性率却相应增高，且两者呈明显的负相关。这提示COX2蛋白的表达对Ecad有一定的影响，两者之间可能互相拮抗，共同参与子宫内膜腺癌的发生和发展过程。在体内外实验中已经发现C

20、OX2抑制剂可以减少细胞移动、细胞黏附和肿瘤侵袭18。这种作用至少部分是由于对COX2的抑制所引起。另有研究表明，Ecad在COX2高表达细胞中缺失19。这些结果提示，COX2在肿瘤组织侵袭转移中的作用至少部分原因是由于降低了Ecad受体的表达水平，从而导致Ecad功能异常，一方面促使细胞的分裂加快，分化降低；另一方面又可以使癌细胞更易脱离原发灶，促使肿瘤组织向深部浸润和转移。COX2过表达导致Ecad的异常表达可能仅是COX2具备肿瘤细胞侵袭转移潜能的因素之一。但本研究结果提示，在子宫内膜腺癌组织中，COX2至少部分是通过引起Ecad异常表达而增加肿瘤细胞侵袭转移的潜能来促进肿瘤的恶性进展的

21、。 【参考文献】 1乐杰. 妇产科学M. 第6版. 北京:人民卫生出版社， 2004：298303. 2 GUROCAK S, SOZEN S, ERDEM O, et al. Relation between cyclooxygenase2 expression and clinicopathologic parameters with patient prognosis in transitional cell carcinoma of the bladderJ. Urol Int， 2006，76(1):5156. 3JUUTI A, LOUHIMO J, NORDLING S, et

22、al. Cyclooxygenase2 expression correlates with poor prognosis in pancreatic cancerJ. J Clin Pathol， 2006，59(4):382386. 4 SOSLOW R A， DANNENBERG A J， RUSH D， et al. COX2 is expressed in human pulmonary，colonic，and mammary tumorsJ. Cancer， 2000，89（12）：26372645. 5 牛兆山，张昭成，邹伟. 增生结节、肝硬化及肝癌组织中原癌基因CerbB2蛋白

23、产物的表达J. 青岛医学院学报， 1997,33（1）：3032. 6 SCHIPPER J H， FRIXEN U H， BEHRENS J， et al. Ecadherin expression in squamous cell carcinomas of head and neck: inverse correlation with tumor differentiation and lymph node metastasisJ. Cancer Res， 1994，51（23）:63286337. 7UOTILA P J, ERKKOLA R U, KLEMI P J. The exp

24、ression of cyclooxygenase1 and 2 in proliferative endometrium and endometrial adenocarcinomaJ. Ann Med， 2002，34(6):428433. 8 OREJUELA F J, RAMONDETTA L M, SMITH J, et al. Estrogen and progesterone receptors and cyclooxygenase2 expression in endometrial cancer, endometrial hyperplasia, and normal end

25、ometriumJ. Gynecol Oncol， 2005，97(2):483488. 9KILIC G, GURATES B, GARON J, et al. Expression of cyclooxygenase2 in endometrial adenocarcinomaJ. Eur J Gynaecol Oncol， 2005，26(3):271273. 10TOYOKI H, FUJIMOTO J, SATO E, et al. Clinical implications of expression of cyclooxygenase2 related to angiogenes

26、is in uterine endometrial cancersJ. Ann Oncol， 2005，16(1):5155. 11LAMBROPOULOU M, ALEXIADIS G, LIMBERIS V, et al. Clinicopathologic and prognostic significance of cyclooxygenase2 expression in endometrial carcinomaJ. Histol Histopathol， 2005，20(3):753759. 12ZHANG Z, DUBOIS R N. Detection of differen

27、tially expressed genes in human colon carcinoma cells treated with a selective COX2 inhibitorJ. Oncogene， 2001，20(33):44504456. 13 CHEN W S, WEI S J, LIU J M, et al. Tumor invasiveness and liver metastasis of colon cancer cells correlated with cyclooxygenase2 (COX2) expression and inhibited by a COX2selective inhibitor, etodolacJ. Int J Cancer， 2001，91(6):894899. 14 VLEMINCKX K， VAKAET I J， MAREEL M， et al. Genetic manipulation of Ecadherin expression by epithelial tumor cells reveals an invasive suppressor roleJ. Cell， 1991，66（1）:107119. 15CALDEIRA J R, PRANDO E C, QUEVED