表观遗传调控对腹主动脉瘤患者单个核细胞影响实用教案

1、研究研究(ynji)背景背景 AAA的发病率逐年上升。破裂性AAA死亡率高。 病因复杂：氧化损伤、炎症、血管退行性变、中膜平滑肌的减少、自身免疫性疾病的特征等。 前期研究(ynji)已证实AAA患者外周血存在Fas系统缺陷和Treg数量和功能的缺陷。 Jian Zhang, et al. Impaired Fas-induced apoptosis of T lymphocytes in patients with abdominal aortic aneurysms J VAS SURG 2007 May;45(5):1039-46 Yin M, et al. Deficient CD4+C

2、D25+ T regulatory cell function in patients with abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010; 30: 1825-31第1页/共18页第一页，共19页。 表观遗传学：不改变DNADNA序列的情况下改变基因的功能(gngnng)(gngnng)。 研究内容：DNADNA甲基化、组蛋白乙酰化等。 表观遗传学调控具有可逆性。研究研究(ynji)背景背景第2页/共18页第二页，共19页。Krishna et al. Genetic and epigenetic mecha

3、nisms and their possible role in AAA Atherosclerosis 2010.第3页/共18页第三页，共19页。研究研究(ynji)目标目标 1.研究AAA患者外周血单个核细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化水平的改变。的直径大小是否与DNA甲基化和组蛋白乙酰化的变化(binhu)存在相关性 3.与表观遗传学改变密切相关的酶类的改变第4页/共18页第四页，共19页。实验设计流程图 正常(zhngchng)对照组提取(tq)DNA提取(tq)组蛋白提取RNADNA浓度测定BCA蛋白测定RNA浓度测定DNA甲基化测定组蛋白乙酰化测定Real-time PCRAAA组

4、Ficoll分离PBMCs统计学分析： t检验、 2检验、相关性分析第5页/共18页第五页，共19页。实验实验(shyn)(shyn)方法方法1.一般(ybn)资料 AAA组组(22 例例)对照组对照组(20 例例)P 值值性别（男）17(77%)17(85%)0.524年龄（岁）65.778.5263.39.940.391吸烟史7(32%)8(40%)0.58高血压病史13(59%)9(45%)0.361糖尿病病史3(14%)4(20%)0.58冠心病病史4(18%)3(15%)0.782WBC（*109/L）7.832.566.591.730.102LB（*109/L）1.850.392.

5、170.620.11第6页/共18页第六页，共19页。实验实验(shyn)(shyn)方法方法2.腹主动脉瘤直径(zhjng)序号序号性别性别/年龄年龄AAA直径直径序号序号性别性别/年龄年龄AAA直径直径1M/725.012M/623.82F/745.013M/703.23M/626.014M/645.54M/556.215M/583.75M/785.416M/616.76M/725.017F/595.87F/605.818F/693.48F/655.019M/715.29M/477.020M/814.810M/594.921M/766.111M/744.922M/585.5第7页/共18页

6、第七页，共19页。实验实验(shyn)(shyn)方法方法 3.引物设计(shj)基因名称基因名称上游引物（上游引物（5-3）下游引物（下游引物（5-3）DNMT1CTTCGGCAACATAATGGACACTTTGGCCAACATACAAAGCTTGADNMT3ACCGGAACATTGAGGACATCTCAGCAGATGGTGCAGTAGGADNMT3BCCCATTCGAGTCCTGTCATTGGTTCCAACAGCAATGGACTMBD1CACCCTCTTCGACTTCAAACAAGCAACCTGACGTTTCCGAGTCTTMBD2AACCCTGCTGTTTGGCTTAACCGTACTTG

7、CTGTACTCGCTCTTCMBD3CCGCTCTCCTTCAGTAAATGTAACGGCTGGAGTTTGGTTTTCAGAAMBD4TGGTGGTGCATGCCTGTAATTGAGACAGGGTCTCTCTCTGTCATHDAC1AGACAGCTGTGGCCCTGGATAGGAGCTTGAAATCTGGTCCAAAGTAHDAC2AGTCAAGGAGGCGGCAAAATGCGGATTCTATGAGGCTTCAHDAC4AAGGAGTGGACATTGCTGATTCAGCAGCTCCACTHDAC5TCACTGTCACCAACTCACCAGGAATAGAGGATGTGCHDAC7CTTCTC

8、CACAAGGACAAGCTCCAGGGTTCTGTAGGGAPDHCCACCCATGGCAAATTCCCATGGCATCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC第8页/共18页第八页，共19页。实验实验(shyn)结果结果第9页/共18页第九页，共19页。DNA甲基转移酶实验甲基转移酶实验(shyn)结果结果第10页/共18页第十页，共19页。甲基结合蛋白实验甲基结合蛋白实验(shyn)结果结果第11页/共18页第十一页，共19页。组蛋白乙酰化实验组蛋白乙酰化实验(shyn)结果结果*第12页/共18页第十二页，共19页。组蛋白去乙酰酶实验组蛋白去乙酰酶实验(shyn)结果结果第13页/

9、共18页第十三页，共19页。H3DNMT1、MBD2HDAC1、HDAC7PBMCs proliferation 第14页/共18页第十四页，共19页。第15页/共18页第十五页，共19页。结论结论(jiln)(jiln)1. 表观遗传学的调控参与了腹主动脉瘤发病过程。2.单个核细胞增殖是腹主动脉瘤具有免疫学特征的改变。3.通过(tnggu)干预与表观遗传学相关的酶类为非手术治疗腹主动脉瘤提供新的理论依据。第16页/共18页第十六页，共19页。谢谢(xi xie)各位嘉宾！第17页/共18页第十七页，共19页。感谢您的观看(gunkn)！第18页/共18页第十八页，共19页。NoImage内容(nirng)总结研究背景。病因复杂：氧化损伤、炎症(ynzhng)、血管退行性变、中膜平滑肌的减少、自身免疫性疾病的特征等。前期研究已证实AAA患者外周血存在Fas