季的花药培养

1、课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养知识回顾 单倍体育种的过程？单倍体育种的过程？花药离体培养（花药离体培养（N）单倍体植株（单倍体植株（N）秋水仙素处理，秋水仙素处理，使染色体翻倍使染色体翻倍植株（植株（2N）特点：特点：1 明显缩短育种年限明显缩短育种年限2 后代植株都为纯合子。后代植株都为纯合子。正常植株（正常植株（2N）花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉囊状结构，内有很多花粉雄蕊雄蕊一、被子植物的花粉发育一、被子植物的花粉发育 花粉母花粉母细胞细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）4 4个小孢子个小孢子减数分裂减数分裂小孢子四分体小孢子四分体1 1个小个小孢子孢子（单细胞

2、花粉粒）（单细胞花粉粒） 花粉粒花粉粒（双核）（双核）有丝分裂有丝分裂单核单核双核双核 花粉母花粉母细胞细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）4 4个小孢子个小孢子减数分裂减数分裂小孢子四分体小孢子四分体1 1个小个小孢子孢子 花粉粒花粉粒（双核）（双核）有丝分裂有丝分裂单核单核双核双核花粉管细胞核花粉管细胞核营养细胞营养细胞生殖细胞核生殖细胞核2个精子个精子花粉是花粉是单倍体单倍体的生殖细胞的生殖细胞小孢子母细胞小孢子母细胞（ ）时期）时期单核（单核（ ）期）期双核期双核期（ ）细胞核）细胞核 （ ）细胞核）细胞核（ ）细胞）细胞（ ）细胞）细胞（ ）个精子）个精子（ ）分裂）分裂（ ）分裂）

3、分裂单核（单核（ ）期）期（ ）分裂）分裂减数减数小孢子四分体小孢子四分体中中边边有丝有丝生殖生殖生殖生殖花粉管花粉管营养营养有丝有丝22NNNNNNNNN小孢子母细胞小孢子母细胞小孢子小孢子花粉囊花粉囊花药花药 花粉粒花粉粒（双核期）（双核期）成熟成熟花粉花粉8个精子个精子控制花粉萌发并提供营养控制花粉萌发并提供营养取决：培养基中的取决：培养基中的激素种类激素种类及及浓度浓度配比配比 在组织培养过程中，某些细胞在形态上转在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与变为与合子发育成的胚合子发育成的胚非常相似的结构非常相似的结构，发育，发育过过程程亦与合子胚类似；亦与合子胚类似；神奇的人工种子神奇

4、的人工种子: :通过通过胚状体胚状体途径形成小植株途径形成小植株烟草花药培养烟草花药培养胚状体发育途径胚状体发育途径愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养水稻花药培养愈伤组织发育途径愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药接种在平板上的水稻花药1、材料的选择、材料的选择 花期早期时的花药比后期的更容易花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的间选在五月初到五月中旬，即月季的。 选择合适的花粉发育时

5、期也是提高选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在诱导成功率的重要因素。一般来说，在，细胞核由中央移向细胞一侧的，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选为了挑选到单核期的花药，通常选择择完全未开放完全未开放的花蕾的花蕾。为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药， 给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。2、培养基的组成、培养基的组成月季花的培养基配方月季花的培养基配方 在在1000mlMS

6、培养基配方中添加培养基配方中添加 2，4D 0.4mg KT 0.2mg IAA 4mg调节调节PH为为5.83、植株生长条件、材料低温预处理、植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等接种密度等（一）材料选取（一）材料选取 2、通过、通过镜检镜检来确定是否处于适宜的发育期来确定是否处于适宜的发育期。 方法：方法：醋酸洋红法醋酸洋红法(将染色体染成红色将染色体染成红色) 焙花青焙花青-铬矾法铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看从花药看：月季的初花期：月季的初花期 从花粉看：从花粉看：单核期单核期 从花蕾看从花蕾看：完全未开放的：完全未开放的 花药（载玻片上）花药（载玻

7、片上）1%的醋酸洋红的醋酸洋红1滴滴用镊柄将花药捣碎，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于载玻片上取出，置于载玻片上焙花青铬矾溶液染色焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）被染成蓝黑色）（二）材料的消毒（二）材料的消毒5 5、无菌水冲洗、无菌水冲洗3 35 5次次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用、花蕾用体积分数为体积分数为70%的酒精

8、的酒精浸泡浸泡30秒秒2、无菌水清洗、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分钟分钟 （质量分数为质量分数为1%的的次氯酸钙溶液次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液或饱和漂白粉溶液）【思考【思考8】月季花蕾的消毒与菊外植体】月季花蕾的消毒与菊外植体的消毒相比较，二者有何不同的消毒相比较，二者有何不同在酒精消毒前，花药不需要预先用流水在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。思考思考10植物组织培养技术与花药培养技术有何区别？植物组织培养技术与花药培养技术有何区别？比较项目比较项目菊花的组织培养菊花的组织培养月季的花药培养月季的花药培养是否添加植物激是否添加植物激素素是否进行染色体是否进行染色