加压毛细管电色谱体系的优化及其在食品添加剂中的应用

1、加压毛细管电色谱体系的优化及其在食品添加剂中的应用力口压毛纽席电色谱（pressurized cap订lary electrochromatography, pCEC） 是近年來快速发展起來的一种高效微分离技术，它将离效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography» HPLC）和毛细管电泳（Cap订la" Electrophoresic, CE）的优势集为一体，具有"一机三用"（在一台仪器上可实 现毛细管电色谱、毛细管电泳、微径液相三种分离手段）、“三高一快”（高柱效， 高分离度，高选择性，快速分离）、微流化、经

2、济实惠并且环境友好（它消耗溶 剂和样品量仅仅为常规液相色谱的万分之一）等优点。由于兼具色谱和电泳的双 重分离机理，加压毛细管电色谱对被分离样品的选择性和分辨率得到了很大的提 高，在复杂化学及生物样品的分离领域具有很好的应用前景。然而，pCEC的工程化方面仍然存在着一些的缺欠和不足，急待完善和优化。 本论文主要由以下四部分组成：第一部分介绍了该课题的背景和意义，包括电泳、 高效液相色谱法以及pCEC的原理和应用，pCEC体系的优化及其意义，食品添加 剂中维生素类分析方法研究的进展。第二部分的工作主要是对现有pCEC体系进行优化，从而提高它的准确度和 精密度，并实现自动进样。由于目前的pCEC采用

3、的是手动进样，在一定程度上 会对实验的稳定性造成影响，同时也限制了 pCEC的使用。通过将Arcus5自动进样器与pCEC体系进行连用，从微径液相和电色谱模式 下对其进行考察，得出的一系列参数证明该口动进样器适用于pCEC体系。由于 目前的pCEC连接体系采用的是先进样后分流的方式，因分流比无法准确控制而 无法实现准确定量，也在一定程度上影响了实验的精密度，该部分首先通过对ASI分流阀（分流比：50： 1）进行评估：接着采用10nL的微最进样阀，通过改 变分流方式，即先分流后进样，仅仅对流动相进行分流，阀中样品完全进入毛细 管色谱柱來实现准确定量，通过对连接管路、连接部件、加电方式等进行研究,

4、 最终实现了 pCEC的准确定星，并且在一定程度上提高了分析的精密度。第三部分的工作主要建立了 pCEC-UV同时分离检测脂溶性维生素的方法及 其在复合维生素片检测中的应用，该方法同时检测了复合维生素片中4种脂溶性 维生素（VA、VD3、VE、VK3）o脂溶性维生素经甲醇超声提取后，以3 口 m C18 反相毛细管色谱柱为分离柱，含0. 05%TFA（三氟乙酸）的95%（v/v）甲醇（pH3.3） 为漩动相进行等度洗脱，泵总流速为0. 2mL/min,分离电压为-15kV,并针对脂 溶性维生素样品个体间紫外吸收波长差别较大的问题，在波长时间程序下进行分 析，4种脂溶性维生素可在5min内实现快

5、速分离。各组分的最低检出限（S/N=3）分别为1.5U g/mL, 3. 0 U g/mL, 15 u g/mL, 1.5ug/mL,线性关系良好，样品加标回收率在90.0%110.0%之间，RSD在 0.53%、5.46%之间。该方法被应用于维生素片样品的分析，収得了满意的分析结 果。该方法操作简单，分离分析时间短，有较好的重现性，结果准确可靠。第四 部分的工作主要是建立了 pCEC-UV体系同时检测运动型饮料中六种水溶性维生 素（烟酸、VB1. VB4、VB5、VB6、VB12）的方法。采用超声过滤净化样品，以3 口 m C18亲水反相毛细管色谱柱作为分离柱, 以乙膳-水（含20mM磷酸盐

6、缓冲溶液）为流动相进行梯度洗脱，泵总流速为 0. 15mL/min,分离电床为5kV,八种水溶性维生素可在7min内实现快速分离。 各组分的最低检出限（S/N=3）分别为 0. 5n g/mL, 1. 0 u g/mL, 0. 5 u g/mL, 1.5P g/mL» 0. 5 u g/mL» 1. 0 P g/mL,线性关系良好，样品加标回收率在90.0% 110.0%之间，RSD 在 0. 49%"4. 21%之间。将所建立方法应用于运动型饮料样品的分离分析，取得了良好的分析结果。 该方法简单方便，灵敏度高，准确可靠，且首次采用纳升级进样阀，在先分流后 进样的模式下实现了样品的分离分析，一定程度上提高了结果的重复性，具有实 用推广价值。本文在原pCEC体系的基础上，引入了自动进样器和纳升级（10nL）进样阀。 前者在一定程度