专题一微生物的培养与应用讲义

1、专业文档珍贵文档专题一微生物的培养与应用垮纲咚求1.微生物的分离和培养(n)。2. 某种微生物数量的测定(I)。3. 培养基对微生物的选择作用(n)。4. 利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用(n)。专题知识检测I 培养基(1)培养基一般含有水、碳源、氮源和无机 _ 培养基按物理状态分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基；按功能分为选择培养基和鉴别培养基。2 常见的两种接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。3.三种常用的灭菌方法(1) 灼烧灭菌，如接种环、接种针。(2) 干热灭菌，如玻璃器皿和金属用具等。(3) 高压蒸汽灭菌，如培养基等。4 土壤中分解尿素的细菌的分离与计

2、数过程土壤取样T样品稀释T将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上T筛选能生长的微生物菌落。5 分解纤维素的微生物分离的实验原理纤维索分解菌6. 微生物计数的“ 2”种方法(1) 直接计数法：需用血细胞计数板借助显微镜观察，实验结果偏大。(2) 间接计数法：稀释涂布平板法，计数结果偏小。7. 菌种的保存方法(1) 对于频繁使用的菌种，可以采用临时保存的方法。(2) 对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。刚果红纤维素红色复合物纤维素酶红色消汕出现透明圈专业文档珍贵文档核心考点突破考点微生物的培养、分离与计数直点解读。1 消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围煮沸消毒法日常用品较为

3、温和仅杀死物体表面或内部巴氏 消毒法不耐高温的液体消毒的 物 理 或化学方法的部分对人体有害的微生物化学药剂 消毒法用酒精擦试 双手,用氯气 对水源进行 消毒等杀死物体内外所有的微生物， 包括 芽抱和抱子灼烧灭菌法接种工具灭菌强 烈 的 理化因素干热灭菌法玻璃器皿、金属工具等咼压蒸汽 灭菌法培养基及容 器的灭菌2 平板划线法每次灼烧的目的专业文档珍贵文档第一次操作每次划线之前、划线结束口的杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种 环上残留的菌种使 下次划线的菌种直接 来源于上次划线的末 端懐使每次划线菌种 数目减少杀死接种环上 残留的菌种佯 避免细菌污染 环境和感染操作者3纯化微生物的接种方

4、法项目平板划线法稀释涂布平板法原理通过接种环在琼脂固 体培养基表面连续划 线的操作，将聚集的菌 种逐步稀释分散到培 养基的表面。在数次 划线后培养，可以分离 到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细 胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯 度稀释，然后将不同稀 释度的菌液分别涂布到 琼脂固体培养基的表 面，进行培养。在稀释 度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被 分散成单个细胞从而 能在培养基表面形成单 个的菌落:项目平板划线法稀释涂布平板法”优点可以观察菌落特征，对 混合菌进行分离可以计数，可以观察菌 落特征缺点1不能计数吸收量较少，较麻烦，平 板不干燥效果不好，容 易蔓延4 选择培养基与鉴别培养

5、基的比较专业文档珍贵文档类种厂一mE.理原一例举选择培养基中些质基某物养入学培加化厶微分的多中需物众物所生从生离微霉得菌青离母菌入分酵霉加素到和鉴别培养基-产谢基剂反的计物代养试品显設生种培定药明皿微某与特学呛剜据的物的化/底依生产中或应特蓝可大美基别菌纹养鉴杆伊培以肠為频题酣题型一微生物的实验室培养及无菌操作技术1 在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。请回答下列相关问题：(1) 培养基能为培养的微生物提供营养。各种培养基的具体配方不同，但一般都含有_、_、_ 、_;另外，培养基还需要满足微生物生长对、_的要求。(

6、2) 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，需进行清洁和_(填“消毒”和“灭菌”);对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等需进行 _ (填“消毒”和“灭菌”)。(3) 微生物接种的方法很多，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。微生物接种最常用的方法是_和_ 。(4) 对分离的微生物作进一步的鉴定，常需要借助生物化学的方法。如在以_ 为唯一氮源的培养基中加入 _，可用来鉴定分解尿素的细菌；在以 _ 为唯一碳源的培养基中加入_ ，可用来鉴定纤维素分解菌。答案(1)水碳源氮源无机盐 pH 特殊营养物质 氧气专业文档珍贵文档(2)消毒 灭菌(3)平

7、板划线法稀释涂布平板法专业文档珍贵文档（4）尿素酚红指示剂纤维素刚果红解析（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH 特殊营养物质以及氧气的要求。（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，对实验操作的空间、操作者的衣着和手，需进行清洁 和消毒，对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等需进行灭菌。（3）常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。（4）微生物的鉴定常用鉴别培养基，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，观察是否变红，可 用来鉴定分解尿素的细菌； 在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红， 观察是否有透明圈产生， 可用 来鉴定纤维素分

8、解菌。2. 2016 年 7 月郑州市卫生计生委发布的第3 期卫生监测信息显示有 15 家美容美发场所的毛巾、理发（美容）用具大肠杆菌严重超标。如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。回答下列相关问题：（1）图甲中滤膜的孔径应 _（填“大于”或“小于”）大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？ _ 。配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_（一种营养成分），以及_。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是 _和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具倒平板时要待平板冷凝后， 将平板倒置，其主要目的是 _。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能

9、上划分，该培养基属于_培养基。（3）用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是 _。要检测样液中的大肠杆菌含量，取 25 cm2毛巾样本，加 5 mL 蒸馏水，浸润半小时，然后在3 个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL 样液；在 37C的培养箱中放置 48 小时，3 个平板上的黑色菌落数分别为49、48 和 47。据此可得出 25cmf 毛巾样液中的活菌数为 _ 。答案（1）小于用滤膜过滤除菌（2）氮源琼脂调整 pH 高压蒸汽灭菌锅防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染鉴别（3）将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个

10、菌落2.4X103个解析（1）图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂除菌时无 法用高压蒸汽灭菌法，可以用滤膜过滤达到除菌目的。滤膜n r滤液!将滤膜转移至伊红美蓝培养基上基础培养基IE mL 20%乳糖溶液2 mL 2%伊红水溶液2mL0.5%美蓝水溶液1 mL专业文档珍贵文档配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源以及琼脂。配制的培养基在溶化 后和分装前需要先进行调pH 和灭菌。高压蒸汽灭菌法常用高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌。倒平板后将平板倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。从功能上划分，伊红美蓝培养 基属于鉴

11、别培养基。(3)接种环灼烧灭菌后，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是将聚集的菌体逐 步稀释以便获得单个菌落。在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈黑色，据题意可知，25 cm2 3毛巾样本3中的活菌数为(49 + 48 + 47) - 3-0.1X5= 2.4X10 个。技法提升1. 快速确认两类培养基(1) 鉴别培养基：加入的物质起“鉴别”作用(该物质可能与被鉴别菌种发生特殊颜色反应)，该物质加入后并未杀死其他微生物，其培养基中可生存多种微生物。(2) 选择培养基：加入的物质起“筛选”作用，该物质可抑制或杀死其他微生物，只有被选择的“目的菌 种”才能生存下来。2. 微生物

12、实验室培养的注意事项(1) 平板划线法只适用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。(2) 倒平板的温度一般在 50C左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。(3) 平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养 基污染。题型二微生物的分离与计数3 土壤中微生物种类繁多，功能强大，比如：最显著的作用是分解有机质；把植物的残枝败叶和施入土壤中的有机肥料分解，改善土壤的结构和供给植物吸收。若利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化。以下示意图是从土壤中分离出分解尿素的微生物的流程图。请分析相关问题：2从用途上来

13、说，1 号培养基属于 _ 培养基，制备该培养基的步骤是：计算T称量T溶化T_ 倒平板。3该实验中“酶活性鉴定”鉴定的是 _的活性，可以加入 _ 指示剂，如果指示剂变为_色，说明该酶的检测为阳性。答案(1)稀释涂布平板法 30300 少有的菌落会重叠被计数为一个菌落(2)选择灭菌(3)脲专业文档珍贵文档_。用该接种方法对微生物进行计数时，通常选用菌落数在_个的平板进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目_ ，原因是土壤样液31-J -/挑岀菌落、1廿培养基 2乃培养基酶活性鉴定(1)过程所使用的接种方法是专业文档珍贵文档酶酚红红解析(1)在分离微生物时，是将土壤样液连续稀释，是采用稀释涂布平板

14、法进行分离，实际操作时 通常选用菌落数在 30300 之间适于计数的平板。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只 是一个菌落，因此统计的菌落数往往偏低。(2) 此图用于分离分解尿素的微生物，因此1 号培养基属于选择培养基，制备的步骤是计算T称量T溶化T灭菌T倒平板。(3) 分解尿素的细菌可以合成脲酶分解尿素生成氨，加入酚红指示剂后变红色。4. 2017 贵阳一检某研究小组的同学用所学的微生物的实验室培养的方法进行“变质牛奶中金黄色葡 萄球菌的分离和计数实验”，部分实验处理和结果如图所示。(注：培养皿旁的数字代表菌落数目；实验条件适宜；实验操作规范等)请回答相关问题：(1) 在实验室培

15、养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的_和_条件；另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。(2) 据图，研究小组采用的是 _ 法分离和计数金黄色葡萄球菌。由样品到4 号试管的操作中，第一步，将分别盛有 9mL 生理盐水的 4 支试管_ ，并编号 14 号；第二步，用移液管从样品中吸取 1 mL 牛奶，注入 1 号试管中，充分摇匀；第三步，重复第二步骤操作，以此类推。4 号试管的稀释倍数是_。资料显示，金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%15%NaCI 肉汤中生长。本实验可配制含10%氯化钠的培养基，使之成为 _ 培养基，以利于金黄色葡萄球菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。(4

16、)在统计菌落数目时，需按照菌落计数的要求计数，以保证计数结果准确。据图可得出1 mL 牛奶样品中金黄色葡萄球菌的活菌数为 _个。答案营养 环境(2)稀释涂布平板灭菌 104(3)选择(4)3.6X105解析(1)实验室培养微生物，既要为微生物提供营养和适宜温度等环境条件，还要防止被其他微生物污 染。1 rnL I nil. 1 ml专业文档珍贵文档(2)图示所用的分离方法是稀释涂布平板法；图示中每一次稀释都稀释了10 倍，因此 4 号试管的稀释倍数为 104倍。(3) 含有较高浓度 NaCl 的培养基属于选择培养基。(4) 图示中 2 号试管和 4 号试管稀释度下各有 2 个和 1 个培养皿，

17、偶然性较大，应以 3 号试管稀释度的数 据进行计算，即(32 + 39 + 37) - 3-0.1X103= 3.6X105个。技法提升统计菌落数目方法的比较(1) 显微镜直接计数法1原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。2方法：用计数板计数。3缺点：不能区分死菌与活菌。(2) 间接计数法 ( 活菌计数法 )1原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过 统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。2计算公式：每克样品中的菌株数=(C + V)XM 其中，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌

18、落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL), M 代表稀释倍数。3操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。专业文档珍贵文档高考真题再现1.2017 全国卷I某些土壤细菌可将尿素分解成CO 和 NH,供植物吸收和利用。回答下列问题：(1) 有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的 分 解 产 物 CO2作 为 碳 源 ， 原 因是_但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 _( 答出两点即可 )。为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_ (填“尿素”“ N

19、H4NO”或“尿素+NH4NO3” )作为氮源，不选择其他两组的原因是 _ 。(3)用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有 KH2PO4和 Na2HPO4， 其 作 用 有( 答出两点即可 ) 。 答案(1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物，不能利用 CO 来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料尿素 其他两组都含有 NHNO,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NHNO,不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH 稳定解析(1)有些细菌能分解尿素是因为这些细菌能产生脲酶，将尿素分解成CO 和 NH。能分解

20、尿素的细菌是异养生物，不能利用CO 作为碳源合成有机物，但这些细菌可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是作为能源物质氧化分解为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料。(2) 为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择尿素作为唯一氮源，这样只有能分解尿素的细菌才能在培养基上生存。若选择“ NH4NO”或“尿素+ NHNO”作为氮源，能分解尿素的细菌和不能分解尿 素的细菌都能利用 NHNG,不能起到筛选作用。用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KHPC4和 NHPQ,它们可以为细菌生长提供无机营养；同时，KHPQ和 NazHPQ 还可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH 稳

21、定。2. 2016 全国卷I空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集 教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：1配制培养基 (成分：牛肉膏、蛋白胨、 NaCl、X、H2O)；2制作无菌平板；3设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；4将各组平板置于 37C恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)_ 该培养基中微生物所需的氮来源于。若要完成步骤，该培养基中的成分_ X 通常是专业文档珍贵文档(2) 步骤中，实验组的操作是 _ 。(3) 若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/ 平

22、板，而空白对照组的一个平板上出现了 6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了 _ 现象。若将 30( 即 366) 个/ 平板作为本组菌落数的平均值，该做法 _(填“正确”或“不正确”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2) 将实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3) 污染不正确解析(1)牛肉膏、蛋白胨都含有 N,可为微生物的生长提供氮源。制作无菌平板所用培养基为固体培养基,所以 X 应为琼脂。(2) 根据实验目的可知，本实验的自变量为教室的不同高度，因变量为微生物的分布情况，故实验组的操 作应为将实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间。(3) 空白培

23、养基上出现菌落，说明培养基被污染了，即调查中出现了污染现象。实验过程中若培养基被污 染，必须将其抛弃，重新制作新的培养基进行实验。3.2016 全国卷川某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中 因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_ 和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。乳酸菌在20C长期保存时，菌液中常需要加入一定量的 _ (填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。答案(1)无菌水 泡菜滤液中菌的

24、浓度高，直接培养很难分离得到单菌落鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈甘油解析(1)由于泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落，故分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释。(2) 由于乳酸菌代谢产生的乳酸可以溶解培养基中的碳酸钙，形成透明圈，故培养基中加入碳酸钙可用于 鉴另惧酸菌，同时碳酸钙也可以中和乳酸菌产生的乳酸。(3) 乳酸菌在-20C长期保存时，菌液中需要加入一定量的甘油，加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤 细胞。4.2015 全国卷I已知微生物 A 可以产生油脂，微生物B 可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：(1) 显微观察

25、时，微生物 A 菌体中的油脂通常可用 _染色。微生物 A 产生的油脂不易挥发，可选用_(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。专业文档珍贵文档(2) 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B 的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 _ 为碳源的固体培养基进行培养。(3) 若要测定培养液中微生物B 的菌体数，可在显微镜下用 _ 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用_法进行计数。专业文档珍贵文档为了确定微生物 B 产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35C、40C、45C温度下降解 10 g 油脂所需酶量依次为 4 mg、1 mg、6 mg,则上述三个温度

26、中， _C条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_C设计后续实验。答案(1)苏丹川(或苏丹W)萃取法(2)油脂(3)血细胞计数板稀释涂布平板(4)45 40解析(1)观察脂肪时可用苏丹川或苏丹W染色，苏丹川使脂肪呈橘黄色，苏丹W使脂肪呈红色。对于不 易挥发的物质可用萃取法提取。(2) 为从自然界获得能产生脂肪酶的微生物B 的单菌落，应以油脂为唯一碳源进行选择培养。(3) 若要测定微生物菌体数，可在显微镜下利用血细胞计数板直接计数，该方法不能区分细菌的死活；若要测定其活菌数量，可用稀释涂布平板法获得单菌落，选择菌落数在30300 的平板进行计数。相同时间降解相等质量油脂所需酶量

27、越多的温度条件下酶的活力越小，即45C条件下酶的活力最小。而 40C条件下酶的活力相对最大，故应围绕此温度设计后续实验，以进一步确定该酶的最适温度。5.2017 江苏高考苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下 图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、_&HPQMgSO 苯酚和水，其中可作为碳源的有。将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐 _，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_,以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还

28、必须添加 _ 。(3)_下图为连续划线法示意图，在图中(填图中序号)区域更易获得单菌落。专业文档珍贵文档(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中 15 号比色管的苯酚浓度应分别为 _专业文档珍贵文档AvV口吕号123456苯酚浓度（mg/L）1如果废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21%勺苯酚残留，则需将残留液稀释_（填序号：51020）倍后，再进行比色。答案（1）蛋白胨、苯酚（2）增加 稀释涂布 凝固剂（3）（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8解析（1）分析富集培养基的成分可知，培养基中蛋白胨、苯酚中含C,可

29、作为碳源。（2）转接的目的之一是富集降解苯酚能力强的酚降解菌，随转接次数增多，培养基中的苯酚含量应逐渐增加。若接种培养后平板中菌落过于密集，应继续稀释涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离。稀释涂布时所用的培养基为固体培养基，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加琼脂等 物质作为凝固剂。利用连续划线法接种时，越在最后划线区域，菌落的密度越小，越容易获得单菌落，所以，图中区 域更易获得单菌落。根据表中6号比色管中苯酚浓度为 1 mg/L可以推知， 15号比色管的苯酚浓度应分别为 0 mg/L、 0.2 mg/L、 0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。根据题意

30、，废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21%的苯酚残 留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L 之间，需将残留液稀释 20 倍左右，再进行比色。专题强化训练1. 2017 甘肃兰州模拟微生物分离技术在研究环境保护、水质净化、粮食储存和生物制药等方面都有重 要作用，回答下列相关问题：（1）_用纤维素粉作为唯一碳源制作培养基， 可以分离能分泌 _的微生物。灭菌的培养基在接种前，随机取空白平板于适宜温度下放置24 小时，目的是 _ 。（3）_划线用的接种环、 涂布用的涂布器在接种之前都需要用 _法进行灭菌。能分离出单个菌落，并能够用来统计样品中微生物活菌数目的接种方法是 _ 。（4

31、）_ 需要振荡培养的微生物，要为培养的空间环境提供 ，振荡培养能提高培养液中 _的含量，还可以使菌体与培养液中的 _充分接触，由此推测该种微生物的异化作用是 _ 。答案（1）纤维素酶（2）检测培养基的灭菌效果（3）灼烧灭菌稀释涂布平板法（4）无菌空气氧气营养物质需氧型解析（1）用纤维素粉作为唯一碳源制作培养基可以分离能分泌纤维素酶的微生物。（2）将灭菌后未接种的空白平板于适宜温度下放置24 小时，观察是否会有菌落产生，从而检测培养基的灭菌效果。专业文档珍贵文档（3）划线用的接种环、涂布用的涂布器在接种之前都需要用灼烧灭菌法进行灭菌。平板划线法和稀释涂布 平板法都能分离出单个菌落，但只有稀释涂布

32、平板法能够用来统计样品中微生物活菌数目。（4）需要振荡培养的微生物，要为培养的空间环境提供无菌空气，振荡培养能提高培养液中氧气的含量， 还可以使菌体与培养液中的营养物质充分接触，由此推测该种微生物的异化作用是需氧型。2.2017 囊阳四中质检某实验小组为了研究不同的碳源对纤维素分解菌分解纤维素能力的影响，以稻草粉、纤维素粉和滤纸浆为纤维素来源，研究了A、B、C D 四种纤维素分解菌，实验结果如下。请回答下列问题：菌株1CMC 酶活性(mg mL/30 min)稻草粉纤维素粉滤纸浆A0. 270. 240. 56I B0. 680. 340+63C830. 330. 78DLCL 180. 30

33、0. 53/实验室培养基的营养成分除了碳源外还有_，培养基灭菌的常用方法为_。接种微生物的常用方法有 _ 。(2) 实验室分离纤维素分解菌的培养基一般要加入 _ ，该物质能和纤维素形成红色复合物，当纤维素分解菌将纤维素分解后，红色复合物消失，形成的_的大小可作为判断纤维素酶活性大小的依据。(3) 分析表格可知，该实验的自变量是 _，若要分解稻草粉中的纤维素，则最好选择_菌株。(4) 通过实验数据可以得出的实验结论是 _ 。答案(1)氮源、水和无机盐高压蒸汽灭菌法平板划线法和稀释涂布平板法(2)刚果红 透明圈(3)纤维素的来源 C (4)不同菌株对同一碳源作用产生的酶活性不同，同一菌株对不同纤维

34、素碳源的分解能 力也不同解析(1)培养基的营养成分包括碳源、氮源、水和无机盐四种营养物质，培养基灭菌的常用方法为高压蒸汽灭菌法。平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的常用方法。(2) 在含有纤维素的培养基中加入刚果红后，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红一纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。透明圈越大，说明纤维素酶活性越大。(3) 该实验研究不同的碳源对纤维素分解菌分解纤维素能力的影响，因此自变量为纤维素的来源。由表格可知，以稻草粉为碳源时，C 菌株的 CMC!活性最

35、高，因此要分解稻草粉中的纤维素，最好选择C 菌株。专业文档珍贵文档(4) 实验数据显示，不同菌株对同一碳源作用产生的酶活性不同，同一菌株对不同纤维素碳源的分解能力 也不同。3 纤维素酶在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。目前，利用微生物提高纤维素酶产量是主要发展 方向。如图甲，用紫外线照射含有纤维素分解菌的土样，分离、培养，再检测各菌株的纤维素酶的产生量。请回答下列相关问题：专业文档珍贵文档(1)_ 紫外线照射的目的是, Ao组未经紫外线处理，其作用是作为经高压灭菌锅灭菌的培养基，需要冷却后才能用来倒平板。常用于估计培养基已冷却到50C左右的简便方法为_ 。(3)上述培养皿中的培养基除含有水

36、和无机盐、酵母膏、水解酪素、琼脂等外，还应有_，目的是选择纤维素分解菌。上述检测结果如图乙所示。由图可知，_ 组酶含量与 Ao组相同，最可能的原因是。AnA|A4乙A 5 A 石答案(1)诱发基因突变，提高突变频率,获得高产的纤维素分解菌对照(2)用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手(3)纤维素(4)A5没有发生基因突变解析(1)紫外线属于诱发基因突变的物理因素，通过紫外线照射后细菌突变频率大大提高，从而可能筛 选出人类需要的高产菌株；Ao组未经紫外线处理，为对照组。(2) 用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手时的温度是50C左右。(3) 以纤维素作为唯一碳源的培养基上，只有产纤维素酶的细菌才

37、能存活。据图乙可知 A5组纤维素酶的含量与对照组相同，由于基因突变具有低频性的特点，该组可能没有发生 基因突变。纤维素酶提取纤维索酶专业文档珍贵文档4.普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的 到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。甲乙（1）图甲中，过程需要的酶有 _ 。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以 _ 作为唯一碳源。、过程需重复几次，目的是（2）某同学尝试过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是_（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种_菌的发酵罐需

38、要先排气，其原因是 _ 。答案（1）限制性核酸内切酶、DNA 连接酶淀粉进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌（2）稀释涂布平板法涂布不均匀（3）工程酵母工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生 CO 的速率更快解析（1）图甲过程表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因 的外源 DNA分子和质粒，再用 DNA 连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒，普通酵母菌直接利用 淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程 酵母菌。、过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌。（2）微生物接种最常

39、用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，根据图乙菌落分布情况可确定该同学的接 种方法是后者；由图乙中菌落分布不均匀可推测该同学接种时可能的操作失误是涂布不均匀。（3）在以淀粉为原料的培养液中，普通酵母菌繁殖慢，产生气体少；工程酵母菌繁殖快，产生气体多。5.2017 荆门调研研究人员用有机化合物 X、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功地从土壤中 筛选出能高效降解有机化合物 X 的细菌（目的菌）。如图是从土壤中筛选出该细菌的过程示意图，下表是分 离纯化的结果。请回答下列问题：a-淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得专业文档珍贵文档记录项目：透明圈直径/菌落直径(1) 培养基中的有机化合物 X 主要为目的菌提供_ 等营养要素。从土壤中富集能有效降解有机化合物 X 的细菌时，应选用 _ (填“固体”或“液体”)培养基。(2) 配制成 10 倍稀释液时，用无菌移液管从富集液中吸取1 mL，移入盛有 _ mL 无菌水的试管中，2 10并依次配制 1010 的梯度稀释液。(3) 在分离、纯化过程中，图中过