常规组织病理技术2012

1、南开大学医学院 李玉皓常规组织病理技术常规组织病理技术v组织的取材和固定方法组织的取材和固定方法v组织切片技术组织切片技术v苏木素苏木素- -伊红染色伊红染色第一章第一章 组织的取材和固定方法组织的取材和固定方法 用不同的方法，如手术、钳取、针刺抽用不同的方法，如手术、钳取、针刺抽吸和刮取，从患者身体病变部位获取小块病吸和刮取，从患者身体病变部位获取小块病同变组织作病理检查，以协助临床确定疾病同变组织作病理检查，以协助临床确定疾病诊断，由于检查的组织取自活体，故称为活诊断，由于检查的组织取自活体，故称为活体组织检查，又简称为活检体组织检查，又简称为活检( (biopsy)biopsy)。 一、

2、明确活检的目的1. 为疾病诊断提供重要的线索为疾病诊断提供重要的线索2. 了解病变范围，估计结局及预后了解病变范围，估计结局及预后3. 制定治疗方案，验证治疗效果制定治疗方案，验证治疗效果二、可供做活检的标本1. 手术切除的部分器官和组织，例如胃、乳手术切除的部分器官和组织，例如胃、乳腺、淋巴结等切除标本。腺、淋巴结等切除标本。2. 切取的小块病变组织，如皮下小结节，内切取的小块病变组织，如皮下小结节，内窥镜下钳取的肿块组织。随着内窥镜在临窥镜下钳取的肿块组织。随着内窥镜在临床上的广泛应用，钳取的小块组织已成为床上的广泛应用，钳取的小块组织已成为活检组织的主要标本。活检组织的主要标本。二、可供

3、做活检的标本3. 刮取的破碎组织，如子宫内膜、骨刮取的破碎组织，如子宫内膜、骨组织等。组织等。4. 粗针或细针穿刺抽吸的组织，如肝、粗针或细针穿刺抽吸的组织，如肝、肾、甲状腺穿刺组织等。肾、甲状腺穿刺组织等。三、活检组织取材注意事项 1. 选择恰当的取材部位。力求切取明显病选择恰当的取材部位。力求切取明显病变的组织，如为肿瘤组织，一定要带有变的组织，如为肿瘤组织，一定要带有其周围的正常组织。不要只选坏死组织，其周围的正常组织。不要只选坏死组织，而取周围没有坏死的病变组织如为溃疡而取周围没有坏死的病变组织如为溃疡要取溃疡的周围及底部组织送检。要取溃疡的周围及底部组织送检。2. 采取标本时切忌挤压

4、，取材刀要锋利，操采取标本时切忌挤压，取材刀要锋利，操作要正确，以免组织过度受挤压，而导致作要正确，以免组织过度受挤压，而导致细胞结构、形态严重变形而影响诊断，甚细胞结构、形态严重变形而影响诊断，甚至造成不必要的重新取材，给病人造成不至造成不必要的重新取材，给病人造成不必要的痛苦，并且延长诊断时间。必要的痛苦，并且延长诊断时间。三、活检组织取材注意事项 3. 手术切除的内脏器官或较大肿瘤，最好将手术切除的内脏器官或较大肿瘤，最好将标本全部送检，并保持原病变的完整性，标本全部送检，并保持原病变的完整性，如要切开，应根据不同器官病变按一定的如要切开，应根据不同器官病变按一定的方法切开。方法切开。

5、三、活检组织取材注意事项 四、活检组织的固定 送做病理检查的标本必须新鲜，不能自送做病理检查的标本必须新鲜，不能自溶腐败，离体的标本应立即预以固定。固定溶腐败，离体的标本应立即预以固定。固定液的量要充足，至少液的量要充足，至少5 5倍于标本体积，以使倍于标本体积，以使固定液全部淹埋组织为宜。放标本的容器大固定液全部淹埋组织为宜。放标本的容器大小要适当，口径要大，以便于标本保持原样小要适当，口径要大，以便于标本保持原样固定和便于取出。容器要密封，以免固定液固定和便于取出。容器要密封，以免固定液挥发浓度不足而影响固定效果。挥发浓度不足而影响固定效果。 第一节 取材v取材时对送检组织的要求取材时对送

6、检组织的要求v取材取材v取材时的注意事项取材时的注意事项v冰冻切片取材冰冻切片取材v不同组织的取材方法不同组织的取材方法取材的注意事项（一）取材的注意事项（一）v 防止人为因素的影响防止人为因素的影响v 标本大小标本大小v 取材时间取材时间v 注意包埋方向注意包埋方向v 边缘标记边缘标记v 小标本的处理方法小标本的处理方法取材的注意事项（二）取材的注意事项（二）v 注意特殊情况注意特殊情况v 取材数量取材数量v 清除多余成分清除多余成分v 重复取材重复取材v 核对核对v 组织存放组织存放v固定的意义固定的意义 v固定时的注意事项固定时的注意事项 v固定液固定液v组织固定后的洗涤组织固定后的洗涤

7、第二节 固定固定的意义固定的意义v将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态结构和位置。尽量保持其生活状态时的形态结构和位置。v作用：（作用：（1）保持组织的结构和形态）保持组织的结构和形态 （2）保持细胞内特殊的成分）保持细胞内特殊的成分 （3）便于区别不同组织成分）便于区别不同组织成分 （4）有利于切片）有利于切片 （5）保存抗原及）保存抗原及DNA、RNA固定剂的不良影响固定剂的不良影响v影响常规染色影响常规染色v固定造成物质损失固定造成物质损失v组织皱缩组织皱缩固定的注意事项（一）固定的注意事项（一）v根据研究目的选择合适

8、的固定剂根据研究目的选择合适的固定剂v固定液的量固定液的量v固定液的穿透性固定液的穿透性v组织块的大小组织块的大小固定的注意事项（二）固定的注意事项（二）v固定时间固定时间v固定温度固定温度v加热加热v特殊固定特殊固定单纯固定液单纯固定液v甲醛（甲醛（formaldehyde）v中性甲醛液中性甲醛液v丙酮丙酮v酒精酒精混合固定液混合固定液v乙醇乙醇-甲醛液（甲醛液（A-F液）液）vBouin液液vZenker液液vCarnoy液液v4%多聚甲醛多聚甲醛-磷酸缓冲液磷酸缓冲液第二章第二章 组织切片技术组织切片技术第一节 组织的脱水、透明和浸腊v脱水脱水v透明透明v浸腊（浸透）浸腊（浸透）v骨和含

9、钙组织脱钙法骨和含钙组织脱钙法脱水脱水v借某些溶媒置换组织内水分的过程。借某些溶媒置换组织内水分的过程。v最常用脱水剂：酒精最常用脱水剂：酒精透明透明v通过某种溶剂的媒介作用，使石蜡通过某种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。因组织块中的水分被浸入组织块。因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，称溶剂所取代，组织块变得透亮，称之为透明。之为透明。v最常用脱水剂：二甲苯最常用脱水剂：二甲苯浸蜡浸蜡v组织经透明后，在溶化的石蜡内浸组织经透明后，在溶化的石蜡内浸渍的过程称为浸蜡。渍的过程称为浸蜡。v用于浸蜡的石蜡熔点为用于浸蜡的石蜡熔点为52-56第二节 组织的包埋和包埋方法v组织块经过浸蜡，用

10、包埋剂包起组织块经过浸蜡，用包埋剂包起的过程称包埋。的过程称包埋。v经包埋后，可使组织达到一定的经包埋后，可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。硬度和韧度，有利于切成薄片。包埋方法v石蜡包埋法石蜡包埋法常规石蜡包埋法常规石蜡包埋法快速石蜡包埋法快速石蜡包埋法v火棉胶包埋法火棉胶包埋法v石蜡半薄切片包埋法石蜡半薄切片包埋法v树脂包埋法树脂包埋法v塑料包埋法塑料包埋法常规石蜡包埋法v有无特殊包埋面（如分层组织、皮肤、有无特殊包埋面（如分层组织、皮肤、内镜标本等）内镜标本等）v包埋蜡的温度与组织块的温度接近包埋蜡的温度与组织块的温度接近v包埋完毕，蜡块稍凝后，移入冷台加速包埋完毕，蜡块稍凝后

11、，移入冷台加速凝固凝固第三节 组织切片法v石蜡切片法石蜡切片法v冰冻切片法冰冻切片法v组织切片机和切片机的维护组织切片机和切片机的维护石蜡切片法v组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。机制成切片的过程称为石蜡切片法。v组织块可长期保存。组织块可长期保存。v最常用，最普遍的方法。最常用，最普遍的方法。切片前准备v高质量的蜡块和锋利的切片刀高质量的蜡块和锋利的切片刀v清洁载玻片清洁载玻片v恒温烤片装置恒温烤片装置v铅笔、毛笔、镊子等铅笔、毛笔、镊子等切片制作过程v固定蜡块，调整蜡块与刀至合适位置固定蜡块，调整蜡块与刀至合适位置v切片、展

12、片，冰块的应用切片、展片，冰块的应用v轮转式切片机由下至上切，将脆硬难切的轮转式切片机由下至上切，将脆硬难切的部分放在上面部分放在上面v捞片，注意位置，编号捞片，注意位置，编号v恒温烤片恒温烤片切片的注意事项v组织的取材与固定组织的取材与固定v组织的脱水、透明和浸蜡组织的脱水、透明和浸蜡v切片切片v切片机和切片刀切片机和切片刀v特殊要求切片的制作特殊要求切片的制作冰冻切片法v应用广泛应用广泛v对临床手术病人的术中快速诊断具有重对临床手术病人的术中快速诊断具有重要意义要意义v科研应用科研应用恒冷箱切片v温度的调节温度的调节v包埋机包埋机OCT或羧甲基纤维素或羧甲基纤维素v切片切片v吹干或固定吹干

13、或固定载玻片的处理方法v载玻片载玻片v盖玻片盖玻片第三章第三章 苏木素苏木素- -伊红染色方法伊红染色方法苏木素-伊红染色（HE）简介vHE染色是生物学和医学的细胞和组染色是生物学和医学的细胞和组织学最广泛应用的染色方法，在病理织学最广泛应用的染色方法，在病理学实验室中称为常规染色方法。可用学实验室中称为常规染色方法。可用于观察、描述正常和病变组织的形态于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且学，而且HE切片可较长时间保存。切片可较长时间保存。HE染色的基本原理v细胞核染色的原理细胞核染色的原理v细胞浆染色的原理细胞浆染色的原理vHE染色中二甲苯、酒精和水洗作用染色中二甲苯、酒精和水洗作用v分

14、化和蓝化作用分化和蓝化作用细胞核染色原理v细胞核内染色质主要是细胞核内染色质主要是DNA，带负，带负电，呈酸性，很容易与带正电荷的电，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，因此细胞核被染成蓝色。呈蓝色，因此细胞核被染成蓝色。细胞浆染色原理v细胞浆内主要成分是蛋白质，为两细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物，等电点性化合物，等电点4.7-5.0。pH在胞在胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正点荷，就能被带负电荷使胞浆带正点荷，就能被带负电荷的染

15、料染色。的染料染色。细胞浆染色原理v伊红伊红Y是一种化学合成的酸性染料，是一种化学合成的酸性染料，在水中离解呈带负电荷的阴离子，在水中离解呈带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合而使细与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞浆染色，与蓝色的细胞核形成鲜胞浆染色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。明的对比。二甲苯的作用v脱蜡，使染料易于进入细胞和组织脱蜡，使染料易于进入细胞和组织v透明，以利于光线的透过透明，以利于光线的透过酒精的作用v苏木染色前，酒精由高浓度向低浓度逐苏木染色前，酒精由高浓度向低浓度逐渐下降，目的是洗脱二甲苯，使水分逐渐下降，目的是洗脱二甲苯，使水分逐渐进入切片。渐进入切片。v伊红染色

16、后，酒精由低浓度向高浓度过伊红染色后，酒精由低浓度向高浓度过渡，目的是脱水，为二甲苯进入细胞创渡，目的是脱水，为二甲苯进入细胞创造条件。造条件。水洗的作用v在脱蜡经酒精处理后：使切片中进入水，以利苏在脱蜡经酒精处理后：使切片中进入水，以利苏木精染液进入细胞核中。木精染液进入细胞核中。v染色之后：洗去未与切片结合的染液。染色之后：洗去未与切片结合的染液。v分化后：除去分化液和脱下的染料，中止分化。分化后：除去分化液和脱下的染料，中止分化。v伊红染色后：洗去未结合染液，防止大量伊红进伊红染色后：洗去未结合染液，防止大量伊红进入脱水的酒精中。入脱水的酒精中。分化作用v常用分化液：常用分化液：1%盐酸

17、酒精盐酸酒精v脱去在细胞核中结合过多的染料和细胞浆脱去在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料，保证核浆染色分明。中吸附的染料，保证核浆染色分明。v酸能破坏苏木精的醌型结构，使色素与组酸能破坏苏木精的醌型结构，使色素与组织织 解离，分化不可过度。解离，分化不可过度。蓝化作用v常用液：自来水常用液：自来水/稀氨水稀氨水/温水温水v用弱碱性水是苏木精染上的细胞核变用弱碱性水是苏木精染上的细胞核变为蓝色。为蓝色。人工操作石蜡切片HE染色方法v二甲苯脱蜡，乙醇由高至低，水洗二甲苯脱蜡，乙醇由高至低，水洗v苏木素苏木素1-5 min，水洗，水洗v1%盐酸酒精分化，水洗盐酸酒精分化，水洗v稀氨水返蓝，

18、水洗稀氨水返蓝，水洗v伊红伊红20 sec-5minv酒精逐级脱水，二甲苯透明，封片酒精逐级脱水，二甲苯透明，封片HE染色结果v细胞核呈蓝色，细胞浆、肌肉、结细胞核呈蓝色，细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染色蓝色或紫蓝色。也可染色蓝色或紫蓝色。冰冻切片HE染色方法v切片，固定，水洗切片，固定，水洗v下同石蜡切片下同石蜡切片HE染色中的注意事项v脱蜡脱蜡v染色染色v脱水脱水v透明与封片透明与封片Normal thyroid gland with follicles filled with colloid, medium power microscopicNormal myocardium, medium power microscopic Fatty change, liver, micr