标准菌株使用标准操作规程

1、标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。2 范围微生物实验室保存的标准菌株。3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。4 术语和定义4.1 标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC( American Type Culture Collection)美国标准菌株收藏中心。4.2 标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。4.5 质控菌株ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC寅化的菌株

2、或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。5 保存程序5.1 标准菌株5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80 C低温保存，可以 2年以上。安瓿真空包装的，-80 C可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。5.1.2 复苏用 1ml 无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2 标准储备菌株5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮取 培养物上的菌体，用足量的菌

3、悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株，可用 1-2 年。一年 52 周需要 52 支以上。5.2.2 甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于20%的甘油。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80 C保存。除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限1-5年。5.2.3 全血保存法成分为脱纤维羊血。挑取 5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80 C保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限 1-5 年。5.2.4 标准储备菌株进行编号和登记。

4、5.3 工作标准菌株由标准储备菌株传代得到的菌株。标准储备菌株对多向下传三代。过多的传种会增加变异的机会。标准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养18-24h即工作标准菌株。储存在 2-8 C,可放四周。个别营养要求高的为 2 周，例如肺炎链球菌和嗜血杆菌。使用时应编号并登记。5.4编号方法每个菌的保存管都要有唯一的编号，签字笔标注，便于查找和管理。来源数字意义购买的标准菌株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC25922储备标准菌株1501ATCC25922-3由1501ATCC25922传代而来的3号标准储备菌株5.5记录管理5.5.1菌种应有严格的登记。

5、每个编号都要有详细的记录包括来源、传代、保存方法、使用记录、使用原因、高压灭菌记录等。附表标准菌株记录表标准储备菌株记录表5.5.2菌种保管应有专人负责，保存于专用冰箱中，双人双锁，确保菌种安全。保管人员变动时，必须严格 交接手续。5.5.3各种菌种应按规定时间接种，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换5.5.4 一个使用周期结束后，标准菌株、储备菌株、工作菌株都要进行高压灭菌处理，并做好记录。6使用流程购买的标准菌株（可追溯来源，卫 生部室间质评菌株可作为质控菌 株使用，按照标准菌株管理）作为“储存标准菌株”进行 多个分装保存，按照特定条 件储存和推荐的储存时间接种传代培养一次，

6、并进行 上纯度和生化鉴定*每天传代平板作为第二天的工作标准菌株，进A行室内质控，用完立刻高压处理2代室内质控可以再重复一周，规则同上。 但一般来说工作菌株不能超 过3代L -L 一LL J进行纯度检查 和生化鉴定。 作为传代物或 者第一支“工 作菌株”特定 的储存条件和 推荐储存时间7质量控制7.1观察菌落的典型形态是否符合菌种。有没有杂菌生长。7.2用氧化酶、触酶、上机等生化试验，鉴定菌种有没有变化。7.3如果有污染或怀疑有问题时，应准备新的首次传代物或者获取新的标准菌株。8参考文献序号唯一性编号文献名称9.1ISBN978-7-117-19862-2/R 19863全国临床检验操作规程第四版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R 395临床微生物学诊断