免疫学检验第十三章凝集反应

1、第十三章第十三章 凝集反应凝集反应制作人：和燕制作人：和燕 早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。-肥达试验 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学奖。 -血型鉴定凝集反应的发现凝集反应的发现凝集反应的定义凝集反应的定义凝集反应：凝集反应： 颗粒性抗原颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗细菌、红细胞等）与相应抗体特异性结合体特异性结合，或，或可溶性抗原可溶性抗原（或抗体）与（或抗体）与载载体体颗粒结合成致敏颗粒（红细胞、聚苯乙烯乳颗粒结合成致敏颗粒（红细胞、聚苯乙

2、烯乳胶颗粒、炭粒）后，它们与相应抗体（或抗原）胶颗粒、炭粒）后，它们与相应抗体（或抗原）发生发生特异性反应特异性反应，在适当，在适当电解质电解质存在下，形成存在下，形成肉眼肉眼可见的凝集现象可见的凝集现象。可见反应形成可见反应形成阴性？阴性？阳性？阳性？凝集反应的分型凝集反应的分型凝集反应凝集反应直接凝集反应直接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应抗球蛋白试验抗球蛋白试验第一节第一节 直接凝集反应直接凝集反应直接凝集反应：直接凝集反应： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。凝集原凝集原( (aggl

3、utinogenagglutinogen) )：凝集反应中的抗原。凝集反应中的抗原。凝集素凝集素(agglutinin)(agglutinin)：凝集参与反应的抗体凝集参与反应的抗体（一）玻片凝集试验（一）玻片凝集试验方法评价方法评价: :定性试验定性试验简便和快速简便和快速敏感度低敏感度低应用应用: :菌种鉴定菌种鉴定血清学分型血清学分型血型鉴定血型鉴定 在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。现象。（二）试管凝集试验（二）试管凝集试验0.50.50.50.50.50.5 0.50.50

4、.50.5弃掉弃掉0.50.5 试管凝集试验原理试管凝集试验原理结结果果 1 2 3 4 5 6 7菌液菌液 结果结果+ +很小的凝集颗粒很小的凝集颗粒混浊混浊- -无凝集现象无凝集现象与对照相同与对照相同+小、部分凝集块小、部分凝集块中等混浊中等混浊+大多凝集管底大多凝集管底轻度混浊轻度混浊+大的凝集块大的凝集块清亮清亮凝集程度凝集程度沉淀沉淀上清上清管底沉淀管底沉淀凝集程度凝集程度方法评价：方法评价：半定量试验半定量试验简便、快速简便、快速敏感度低敏感度低可有假阳性可有假阳性临床应用：临床应用：肥达试验肥达试验外斐试验外斐试验交叉配血试验交叉配血试验第二节第二节 间接凝集反应间接凝集反应间

5、接凝集反应间接凝集反应: : 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象现象. .载体载体可溶性抗原可溶性抗原致敏致敏致敏颗粒致敏颗粒NSNS凝集颗粒凝集颗粒 间接凝集试验示意图间接凝集试验示意图常用载体常用载体红细胞红细胞-间接血凝试验间接血凝试验聚苯乙烯乳胶聚苯乙烯乳胶-胶乳凝集试验胶乳凝集试验1 1、正向间接凝集试验、正向间接凝集试验2 2、反向间接凝集试验、反向间接凝集试验3 3、间接凝集抑制试验、间接凝集抑制试验 4

6、 4、协同凝集试验、协同凝集试验间接凝集反应的类型间接凝集反应的类型用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗体检测抗体正向间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验用抗体致敏载体用抗体致敏载体-检测抗原检测抗原间接凝集间接凝集抑制抑制试验试验用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗原检测抗原间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体特异特异结合结合抗原抗体复合物抗原抗体复合物NSNS致敏颗粒致敏颗粒无凝集颗粒无凝集颗粒阳性阳性间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体无结合无结合抗原抗体分散抗原抗体分散NSNS致敏颗粒致敏颗粒有凝集颗粒有凝

7、集颗粒阴性阴性SPA:SPA-IgG Fc;SPA抗体致敏抗体致敏-测抗原测抗原协同凝集试验协同凝集试验 原理图原理图IgGSPASPA- IgG 待测抗原待测抗原SPA- IgG-待测抗原待测抗原凝集颗粒凝集颗粒混混合合 加入加入间接凝集反应的应用间接凝集反应的应用抗原的检测抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。种蛋白质成分。抗体的检测抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。后产生的抗体。 抗球蛋白试验抗球蛋白试验又称又称Coombs试验试验第三

8、节第三节 抗球蛋白试验抗球蛋白试验（一）直接（一）直接CoombsCoombs试验试验不完全抗体不完全抗体检测红细胞上抗体检测红细胞上抗体（二）（二）间接间接CoombsCoombs试验试验检测血清中的检测血清中的抗红细胞抗体抗红细胞抗体临床应用：临床应用：在输血上的应用在输血上的应用血型抗原抗体的检查血型抗原抗体的检查对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对溶血性贫血的研究对溶血性贫血的研究对细菌或立克次体的不完全抗体检查对细菌或立克次体的不完全抗体检查 冷凝集试验原理冷凝集试验原理抗原决定簇隐含，不能与抗体结合抗原决定簇隐含，不能与抗体结合混混合合暴露的抗原决定簇与抗

9、体结合暴露的抗原决定簇与抗体结合混混合合3737443737胶乳凝集试验胶乳凝集试验-类风湿因子检测类风湿因子检测 抗自身变性抗自身变性IgGIgG抗体，属于抗体，属于IgMIgM类，主要类，主要存在于血清中。存在于血清中。 约约90%90%类风湿性关节炎（类风湿性关节炎（RARA）患者的）患者的RFRF呈呈阳性。阳性。 某些自身免疫病，如冷球蛋白血症、进某些自身免疫病，如冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、行性全身性硬化症、干燥综合征、SLESLE等等患者都有较高的阳性率；一些其他疾病患者都有较高的阳性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出现如血管炎、肝病、慢性感染也可出现

10、RFRF。类风湿因子类风湿因子RFRF 其病因及发病机制仍不完全明了其病因及发病机制仍不完全明了, , 机体出现机体出现免疫系统紊乱免疫系统紊乱, , 进而引起关节滑膜、软骨组进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的织慢性炎症和破坏的自身免疫性疾病自身免疫性疾病。类风湿性关节炎类风湿性关节炎RARA RFRF可与可与IgGIgG的的FcFc段结合。将段结合。将变性变性IgGIgG包被于包被于聚苯乙烯胶乳颗粒聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待上，此致敏胶乳在与待测血清中的测血清中的RFRF相遇时，即可发生肉眼可见相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。的凝集。乳胶凝集试验乳胶凝集试验 类风湿胶乳诊断

11、试剂类风湿胶乳诊断试剂 RFRF阴性对照阴性对照 RFRF阳性对照阳性对照 反应板反应板 搅拌棒搅拌棒主要的试剂和器材主要的试剂和器材 取阳性血清、阴性血清各取阳性血清、阴性血清各1 1滴于反应滴于反应板上，然后分别加类风湿胶乳诊断板上，然后分别加类风湿胶乳诊断试剂试剂1 1滴。滴。 用搅拌棒充分混匀后，轻轻摇动反用搅拌棒充分混匀后，轻轻摇动反应板应板2 23min3min，观察结果。，观察结果。步骤步骤 在室内的光线下观察，有清晰的凝集在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性阳性结果观察和判断结果观察和判断 1、凝集反应是指凝集反应是指细菌和红

12、细胞细菌和红细胞等等_或或载体载体表面包被表面包被_与相应抗体与相应抗体/ /抗原抗原结合后，可出现肉眼可见的结合后，可出现肉眼可见的_现象现象 2 2、凝集反应的分类？、凝集反应的分类？ 3 3、直接凝集反应包括哪两类？、直接凝集反应包括哪两类？ 4 4、间接凝集反应的分类？原理？、间接凝集反应的分类？原理？复习题复习题小结小结 凝集反应是指凝集反应是指细菌和红细胞细菌和红细胞等等颗粒性抗原颗粒性抗原或表面包或表面包被抗原被抗原/ /抗体的抗体的颗粒性载体颗粒性载体与相应抗体与相应抗体/ /抗原结合后，抗原结合后，可出现肉眼可见的可出现肉眼可见的凝集凝集现象。现象。 可以分为可以分为直接凝集反应、间接凝集反应直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白和抗球蛋白试验试验。直接凝集反应直接凝集反应主要有主要有玻片法玻片法和和试