传代培养及细胞计数实用教案

1、实验(shyn)目的掌握(zhngw)传代培养的一般方法和步骤以及培养过程中的无菌操作技术。熟悉培养细胞的观察方法。学习血球计数板的计数方法。第1页/共16页第一页，共17页。实验(shyn)原理u 细胞在培养皿长成致密(zhm)单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。u 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分皿就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分皿。第2页/共16页第二页，共17页。实验(shyn)用品u仪器：培养箱（调整至37）、培养皿、超净工作台、倒置相差显微镜。u材料(cili

2、o)：卵巢癌细胞HO-8910。u试剂：1640培养基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%消毒酒精。第3页/共16页第三页，共17页。实验(shyn)步骤实验前将无血清(xuqng)培养基和含血清(xuqng)培养基分装并进行温育（37）。以温度计实际(shj)显示温度为准！第4页/共16页第四页，共17页。实验(shyn)步骤将长满细胞的培养(piyng)瓶中原来的培养(piyng)液弃去。第5页/共16页第五页，共17页。实验(shyn)步骤用不含血清1640培养基冲洗(chngx)细胞。第6页/共16页第六页，共17页。实验(shyn)步骤将无血清培养基吸出，加入胰蛋白酶溶液(r

3、ngy)1ml，使细胞都浸入溶液(rngy)中。第7页/共16页第七页，共17页。实验(shyn)步骤消化30-40s后，弃去胰酶，加入含血清(xuqng)1640培养基2ml，终止消化，并充分吹打。吹打后将悬浮起来的细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5min。第8页/共16页第八页，共17页。实验(shyn)步骤离心后，弃上清，加含血清1640重悬，混匀，取50ul用于细胞(xbo)计数。第9页/共16页第九页，共17页。第10页/共16页第十页，共17页。实验(shyn)步骤血球计数(j sh)板的计数(j sh)原理第11页/共16页第十一页，共17页。实验(shyn)步骤根

4、据细胞(xbo)计数的结果，用含血清的培养基调整细胞(xbo)浓度到1X105个/ml。分至两个培养皿中，做好标记，继续培养。第12页/共16页第十二页，共17页。实验完毕，将培养基瓶口(pn ku)迅速过酒精灯火焰消毒，拧紧后，封口膜密封。拿出超净台，放入冰箱。实验后，请将超净工作台内擦拭干净，酒精喷洒消毒，并将酒精擦干净，打开紫外灯灭菌。用过的离心管和血球计数板须清洗干净。各个实验小组的同学负责将垃圾带走，值日生打扫实验室卫生。实验(shyn)步骤：9、实验(shyn)后的整理工作第13页/共16页第十三页，共17页。实验报告试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤。传代培养时要

5、注意严格的无菌操作，并防止细胞之间的交叉污染。酶解消化要适度，消化过度会对细胞造成(zo chn)损害，消化不够则难于将细胞解离下来。传代后第2-3天观察细胞生长情况，了解细胞是否健康生长：健康细胞的形态饱满，折光性好。掌握好代传代时机：健康生长的细胞生长致密，即将铺满瓶底时，即可传代。第14页/共16页第十四页，共17页。思考(sko)与讨论细胞传代培养的目的是什么？判断细胞健康(jinkng)的标准是什么？第15页/共16页第十五页，共17页。感谢您的观看(gunkn)！第16页/共16页第十六页，共17页。NoImage内容(nirng)总结实验目的。掌握传代培养的一般方法和步骤以及培养过程中的无菌操作技术。学习血球计数板的计数方法。实验前将无血清培养基和含血清培养基分装并进行温育（37）。将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。将无血清培养基吸出，加入胰蛋白酶溶液1ml，使细胞都浸入溶液中