用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用ppt课件

1、Identification of the transaminationby paper chromatography Exp.9Exp.9 用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 Purpose(Purpose(目的目的) )1.To master the principle of transamination掌握转氨基作用原理掌握转氨基作用原理2.Identify the transamination by paper chromatography 用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 PrinciplePrinciple原理）原理）1、 transaminationR2CCOOHNH2H1RCCO

2、OHOR2CCOOHOR1CCOOHNH2Hamino acid-keto acidamino acid- keto acidaminopherasetwo important aminopherasesGPTacute hepatitis）GOTmyocardial infarction）（两种重要的转氨酶）（两种重要的转氨酶） Reaction - this experimentCOOHCH2CH2COCOOH+CH3CH-NH2COOHGPTCOOHCH2CH2CH-NH2COOH+CH3C OCOOH2、the paper chromatography纸层析）纸层析）Ala, low-

3、poleGlu, high-poleThe stationary phase : Fibrin combine waterphenol , low-poleThe flowing phase:（固定相）（固定相） （流动相）（流动相）XsYmThe foreland of solventThe center of the speckleThe center Rf ; ，Rf coefficient of distribution = Cs/CmCs：固定相中的浓度：固定相中的浓度Cm：流动相中的浓度：流动相中的浓度（分配系数：（分配系数： ） Rf=Xs/YmXs：溶质移动的距离：溶质移动的距

4、离Ym：溶剂移动的距离：溶剂移动的距离transport ratio（迁移率）（迁移率） The influencing factor on Rf ：The structure and character of the AAThe Solvent systemTemperatureThe quality of the filter paper（影响因素（影响因素 ） 3、Color：(显色显色)OHOHOO2水合茚三酮水合茚三酮+ H2N-CH-COOHRONH4ONOO+RCHO+CO2罗曼氏紫罗曼氏紫Operation(Operation(操作操作) )1、 The enzymatic r

5、eaction(酶促反应酶促反应)12100，5minsadd0.5ml Ala0.5ml aketoglutarate1.5ml bufferMix up37 , 1hr1100 10mincool23000rpm5minssupernatant 肝匀浆（两种：已备好）（ 上清液）上清液）2、 Chromatogram(层析层析)Dont touch the filter paper by handMark with pencil , hole with toothpick Spotting the sample(点样点样) Chromatogram(层析层析) Drying (烘干烘干)

6、Color(显色显色)4(Glu ) 2 (Ala) 1(A)3(c)Results(结果）结果） X1 X1 X2 X3 X4 Y1 Y1 Y2 Y3 Y4Rf1Rf1Rf2Rf3Rf4 X Y Rf(1、assay; 2、 Ala ; 3、 control; 4、 Glu)Rf= 溶质层析点中心到原点中心的距离X） 溶剂前沿到原点中心的距离Y） Discussions(讨论讨论)1、2、questionsAttentions(注意注意)1.手洗净，滤纸勿污染，滤纸勿折，手洗净，滤纸勿污染，滤纸勿折，2.点样分配标记用铅笔点样分配标记用铅笔1.2.3.4），），3.点样点直径点样点直径 0.4cm，1、3点点3次：干后重复次：干后重复 ）；）； 2、4点点1次），点样的吸管勿串用，用毕放回原处。次），点样的吸管勿串用，用毕放回原处。4. 用牙签穿洞，做滤纸芯用牙签穿洞，做滤纸芯5.层析结束，铅笔先标出酚的前沿再烘干。（做记号）层析结束，铅笔先标出酚的前沿再烘干。（做记号）6.喷茚三酮时不要对着人喷），前沿以内，喷均匀，。喷茚三酮时不要对着人喷），前沿以内