三七总皂苷与奥美拉唑对大鼠急性酒精性胃溃疡的防治作用结题报告

1、三七总皂苷和奥美拉唑对大鼠酒精性急性胃溃疡的防治作用【实验背景】 胃溃疡是一种常见的消化系统疾病, 其主要临床表现为长期性、周期性上腹痛，返酸、嗳气和消瘦等。胃溃疡不仅发病率高。还易引起出血、穿孔、癌变等严重并发症，严重威胁着患者生活质量和生命健康。因此研究胃溃疡的防治方法具有重要的临床意义。近年来，我国的中医药研究在消化系统疾病的防治上取得较大进展，尤其中西医结合疗法在消化系统疾病的防治上疗效显著。其中从三七中提取的有效活性成分-三七总皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好活性。近期实验研究还发现三七总皂苷对肠粘膜具有良好的保护作用，多项临床观察也表明

2、，三七对慢性胃溃疡的临床疗效显著，但是三七总皂苷对急性胃溃疡的防治作用尚不清楚，其与奥美拉唑的联合应用是否对急性胃溃疡的防治作用更优也不清楚。因此本实验拟初步探究三七总皂苷是否对大鼠酒精性急性胃溃疡具有防治作用，其与奥美拉唑联合应用对大鼠酒精性急性胃溃疡的防治作用是否更好，揭示中西医结合治疗对急性胃溃疡的重要意义，最终为急性胃溃疡的临床治疗提供新的思路。【创新点】 虽然已有报道称三七总皂苷对于慢性胃溃疡模型有治疗效果，但三七总皂苷对于急性胃溃疡模型的治疗研究领域存在空白。本实验旨在通过制备急性大鼠胃溃疡模型探究三七总皂苷对其治疗的效果。并且，通过横向比较，探讨中西医结合治疗的价值。【实验目的】

3、1、 复制酒精性急性胃溃疡模型，探究中药提取物三七总皂苷对其的疗效及可能机制。2、 利用统计学方法，比较三七总皂苷治疗组、奥美拉唑治疗组、及三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组的防治效果【实验原理】胃消化性溃疡的病因和发病机制尚未完全阐明。目前认为主要与胃液的消化作用、幽门螺杆菌感染和神经内分泌失调所致的胃黏膜自身屏障破坏有关。酒精可刺激胃酸分泌，对胃黏膜也有直接损伤作用，短期摄入大量酒精可引起胃黏膜的损伤而产生溃疡。奥美拉唑是H+-K+-ATP酶（又称质子泵）抑制药，其药理作用与机制如下：1、 抑制胃酸分泌作用2、 胃黏膜保护作用3、 抗幽门螺杆菌作用三七总皂苷的药理作用与机制可能为：兼具止血作用

4、与抗血栓作用，改善溃疡表面微循环，其在人体内的代谢产物原人参二醇具有抗幽门螺杆菌作用。【实验对象】SD大鼠，雄性，250-300g【实验材料】大鼠手术台：2个哺乳动物手术器械：两套（每套含组织剪一把，眼科剪一把，止血钳四个，弯针1枚,缝线1轴，粗棉线5根）50ml烧杯:3个一次性医用注射器：6个1ml注射器，2个5ml注射器大鼠20号灌胃针：3个玻璃干燥器：1个棉花：若干鼠笼：5个计数器：3个【实验步骤】1、 实验准备大鼠禁食24h，自由饮水。2、 随机数表法分组将大鼠称重，按体重从小到大编为1-15号鼠号123456789101112131415随机数字2217686581689523923

5、58702225751除数5432-5432-5432-余数2121-3320-2211-组别乙甲丁丙戊丙丁乙戊甲乙丙甲丁戊甲：假手术组乙：酒精性急性胃溃疡组丙：三七总皂苷治疗组丁：奥美拉唑治疗组戊：三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组实际称重与分组情况如下：表 1 大鼠体重及其排序编号体重（g）排序1280.082260.053253.534283.5105230.026282.597303.0118317.5159270.0610210.5111316.01412275.5713258.0414309.01315303.012假手术组：4、5、14酒精性急性胃溃疡组：1、7、10三七总皂苷治疗组

6、：9、13、15奥美拉唑治疗组：3、11、12三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组：2、6、83、 手术乙醚麻醉大鼠。随后将大鼠固定于手术板上，自剑突下剪开腹壁,用扁头镊子将肝脏内侧的胃拉出腹腔，用手术线在幽门和十二指肠的交界处做结扎。然后将胃放回原位，缝合腹部。【观察项目】1 假手术组1.1 随机取大鼠3只，生理盐水0.5ml灌胃，接着再灌入1ml生理盐水，将大鼠放入笼内。1.2 解剖 术后2h将大鼠用颈椎脱臼法处死。剪开腹壁缝线，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯将胃剪开，用自来水冲洗干净内容物后平展于玻璃板上。1.3 计数 用小方格计数板测定大鼠胃黏膜的总面积、溃疡面积及溃疡数目。计算溃疡面积占胃黏膜

7、总面积的百分比。将实验结果记入自行设计的表格中。2 酒精性急性胃溃疡组2.1 随机取大鼠3只，生理盐水0.5ml灌胃，接着再灌入1ml无水乙醇，将大鼠放入笼内。2.2 解剖 同阴性对照组2.3 计数 同阴性对照组3 三七总皂苷治疗组3.1 随机取大鼠3只，三七总皂苷40mg/100g溶于0.5ml生理盐水灌胃，接着再灌入1ml生理盐水，将大鼠放入笼内。3.2 解剖 同阴性对照组3.3 计数 同阴性对照组4 奥美拉唑治疗组4.1 随机取大鼠3只，奥美拉唑0.2mg/100g溶于0.5ml生理盐水灌胃，接着再灌入1ml生理盐水，将大鼠放入笼内。4.2 解剖 同阴性对照组4.3 计数 同阴性对照组5

8、 三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组5.1 随机取大鼠3只，奥美拉唑0.2mg/100g与三七总皂苷40mg/100g溶于0.5ml生理盐水灌胃，接着再灌入1ml生理盐水，将大鼠放入笼内。5.2 解剖 同阴性对照组5.3 计数 同阴性对照组【实验结果】1. 鼠胃粘膜照片图 1 各组鼠胃粘膜比较 假手术组酒精性急性胃溃疡组三七总皂苷治疗组奥美拉唑治疗组三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组图 2 假手术组鼠胃黏膜图 3 酒精性急性胃溃疡组鼠胃黏膜图 4 三七总皂苷治疗组鼠胃黏膜图 5 奥美拉唑治疗组鼠胃黏膜图 6 三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗组鼠胃黏膜2. 整理实验数据，录入Excel 2010系统。表 2

9、 胃溃疡面积及比例统计分组编号胃溃疡数目（个）胃溃疡面积（cm2）胃黏膜总面积（cm2）胃溃疡占总面积的比例（%）xs假手术组4008.700005007.40014009.000酒精性急性胃溃疡组130.239.002.514.45 酒精性急性胃溃疡组1号大鼠胃溃疡面积百分比严重偏离均值，剔除。3.857131.659.0018.31030.807.5610.6三七总皂苷治疗组970.566.289.04.203.431350.197.802.41530.108.121.2奥美拉唑治疗组350.287.064.02.900.941150.247.203.01240.148.401.7三七总皂

10、苷与奥美拉唑联合治疗组230.128.411.41.130.91610.036.750.4830.127.501.6【数据分析】由于各组方差不齐，不能通过one way ANOVA分析数据，故求各组溃疡百分比均值与方差，绘制直方图，进行比较。三七总皂苷治疗组奥美拉唑治疗组图 7 各组溃疡面积比例比较1. 三七总皂苷、奥美拉唑及两药联用对大鼠酒精性急性胃溃疡均有防治作用。2. 三七总皂苷与奥美拉唑联合治疗效果最好，奥美拉唑治疗效果其次，三七总皂苷治疗效果再次。3. 实验结果符合预期结果。【思考讨论】1. 各组方差不齐1.1. 各组样本太少。可以扩大各组样本量。1.2. 实验员操作不够熟练导致组内

11、变异较大。通过预实验或对实验员进行培训，增加操作熟练度。2. 禁食效果不好2.1. 延长禁食时间。2.2. 使用禁食专用笼具，防止禁食大鼠食粪、食垫料。2.3. 由于手术开始时间不一，各组禁食时间不一，成为实验的干扰因素之一。3. 灌胃操作存在缺陷3.1. 灌胃时机：应待大鼠较为清醒、吞咽反射明显时进行。3.2. 灌胃针伸入大鼠食管深度：充分伸入。3.3. 灌胃速度：适中4. 组织取材操作不够轻柔4.1. 钳夹鼠胃时不够轻柔，造成充血、淤血，对溃疡出血点的计数造成干扰。取组织时应尽量轻柔。5. 溃疡面积计算5.1. 用刻度尺粗略测量，误差较大。可采用积分法计算。5.2. 受实验员主观因素影响。

12、可采用盲法。【思路延伸】乙醇可以使中性粒细胞浸润于胃黏膜,并释放氧自由基导致黏膜损伤。氧自由基是胃溃疡发病的重要攻击因子，胃肠道中黄嘌呤脱氢酶的含量远高于其他任何组织，很容易通过次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统、吞噬细胞“呼吸爆发''、醛氧化酶等途径产生氧自由基，故有人将胃肠道喻为产生氧自由基的“定时炸弹”三七总皂苷具有清除氧自由基的能力，但其治疗胃溃疡的机制是否与清除氧自由基有关尚不清楚。可设计实验，进一步探究三七总皂苷防治大鼠酒精性急性胃溃疡的机制是否为清除氧自由基。【参考文献】1 钱忠义,申丽娟,王芳,阮永华.三七总皂苷预处理对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用J世界华人消化杂志

13、,2012,20(14):1178-11832 王晓瑜,苏振政,张国华.三七、白芨、血竭治疗十二指肠球部溃疡出血的临床疗效观察J黑龙江中医药,2014,5:26-273 韩宇,李鲜.中医药治疗胃溃疡的研究进展J中国中医药现代远程教育,2016,14(6):150-1524 朱会超,国晶晶,任煜.三七总皂苷药理研究进展J河南中医,2014,34(3):537-5415. He, C., et al., Pharmacokinetics, bioavailability, and metabolism of Notoginsenoside Fc in rats by liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry.