细胞工程细胞工程实验室组成及无菌操作技术精选文档PPT学习教案

1、会计学1第1页/共67页基本实验室辅助实验室实验室组成准备室（通用实验室）缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温 室生化分析实验室第一节第一节 细胞工程实验室组成细胞工程实验室组成第2页/共67页第3页/共67页第4页/共67页第5页/共67页第6页/共67页第7页/共67页第8页/共67页1 1、接种设备：、接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。第9页/共67页第10页/共67页第11页/共67页2 2、高压蒸气灭菌锅、高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的

2、灭菌消毒。第12页/共67页(1)(1)高压蒸气灭菌锅工作原理：高压蒸气灭菌锅工作原理： 在密闭的蒸锅内，0.1MPa的压力下， 锅内温度达121。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。第13页/共67页(2)(2)使用方法：使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.1-0.15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打开入气阀，取出灭菌材料。第14页/共67页(3)(

3、3)注意事项：注意事项：对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；第15页/共67页高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。因此，调PH值时，可适当调高0.10.3个单位。接通电源前一定要加入足量的水。接通电源前一定要加入足量的水。第16页/共67页电炉电炉推车推车酒精灯酒精灯封口膜封口膜接种器具接种器具灭菌器灭菌器培养瓶培养瓶3 3、相关

4、仪器、相关仪器 第17页/共67页4、接种工具、接种工具镊子解剖刀接种针酒精灯第18页/共67页5 5、培养设备、培养设备带日光灯的培养架培养架，主要用于接种后材料的培养。第19页/共67页恒温箱：恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及暗培养。第20页/共67页摇床与转床：摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。第21页/共67页恒温振荡培养箱 光照培养箱 第22页/共67页6、细胞培养设备、细胞培养设备 摇摇 床床第23页/共67页光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显

5、微镜倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜光学显微镜7 7、细胞学鉴定设备、细胞学鉴定设备第24页/共67页分注器分注器血球计数器血球计数器移液器移液器磁力搅拌器磁力搅拌器低速台式离心机低速台式离心机第25页/共67页8、其它辅助设备、其它辅助设备培养基灌装机及洗瓶机培养基灌装机及洗瓶机第26页/共67页 除湿机除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。空调机：空调机：用于接种室和培养室温度的控制。第27页/共67页烘箱烘箱：用于干燥洗净后的玻璃器皿，还可用80的温度烘干组织培养植物材料以测定干物质。冰箱：冰箱：用于在常温下易变性或失效的试剂和母液的储藏，细胞组织和试验材料的冷冻保藏，以及某些材料的预处

6、理。第28页/共67页纯水机与蒸馏水发生器纯水机与蒸馏水发生器第29页/共67页天平：天平：天平包括分析天平，电子天平，药物天平等，用于制备母液时培养基组成成分的称取。如一些需要量少的激素和微生素类物质，天平的精确度要到0.0001g，这就要求精确度更高的分析天平。第30页/共67页酸度计：酸度计： 用于校正培养基和酶制剂的PH。第31页/共67页第32页/共67页第二节第二节 无菌操作技术无菌操作技术一、实验仪器及洗涤一、实验仪器及洗涤二、常用灭菌和消毒方法二、常用灭菌和消毒方法第33页/共67页1、 玻璃器皿的选择与清洗培养皿三角瓶培养瓶试管一、实验仪器及洗涤一、实验仪器及洗涤第34页/共

7、67页不锈钢锅磨口瓶烧杯滴瓶第35页/共67页量筒滴定管容量瓶第36页/共67页2 2、玻璃器皿洗涤（、玻璃器皿洗涤（* *注意污染的玻璃器皿注意污染的玻璃器皿 P14 P14）新购置玻新购置玻璃器皿璃器皿1%稀HCl浸渍浸渍12h12h洗衣粉洗衣粉洗涤洗涤清水清水冲洗冲洗晾干晾干备用备用已用过的已用过的玻璃器皿玻璃器皿第37页/共67页3、塑料用品洗涤、塑料用品洗涤新的塑料器皿打开即用新的塑料器皿打开即用已用过的已用过的塑料器皿塑料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水清水冲洗冲洗2%5%盐盐酸浸泡酸浸泡30min清水清水冲洗冲洗蒸馏水蒸馏水冲洗冲洗晾干备用晾干备用第38页/共67页4 4、金属

8、用品洗涤、金属用品洗涤热洗衣粉水热洗衣粉水洗净洗净冲洗冲洗擦干擦干第39页/共67页二、灭菌和消毒方法二、灭菌和消毒方法1、灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。2、灭菌方法、灭菌方法 物理方法：物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、 过滤、离心、沉淀等 化学方法：化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌第40页/共67页3、灭菌、灭菌（1 1）培养基灭菌：）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.810410.8104Pa温度在 121灭菌1530min（2 2）玻璃器皿灭菌：）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌第41页/共67页（3）接种室灭菌）接种室灭菌空气消毒空气消毒灭菌灭菌接种室接种室超净工超净工作台作台紫外灯紫外灯照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培养材料培养材料的接种的接种紫外灯紫外灯照射照射第42页/共67页第43页/共67页第44页/共67页第45页/共67页第46页/共67页第47页/共67页第48页/共67页第49页/共67页第50页/共67页第51页/共67页第52页/共67页2 2、化学方法、化学方法常用灭菌剂使用浓度及效果比较表第53页/共67页第54页/共67页第55页/共67页一、植物细胞培养基的组成成分植物细胞培养基的组成成分第56页/共67页第57页/共67页第