加校正因子的主成分自身对照法精编版

1、加校正因子的主成分自身对照法一、定义及适用范围加校正因子的主成分自身对照法， 即以主成分作为对照的内标法 ，校正因子可以在检测时测定， 但需提供杂质对照品 ，也可在建立方法时将测得的校正因子载入质量标准， 供以后常规检验使用， 无需长期提供杂质对照品， 但也仅适用于已知杂质 的控制。建议：校正因子在 0.8-1.2 时可不予校正。校正因子计算公式：As×Crf=Cs×Ar式中： f校正因子；As杂质对照品峰面积或峰高；Cs杂质对照品浓度；Ar待测成分对照品峰面积或峰高；Cr待测成分对照品浓度。二、校正因子的测定在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均

2、是重要的影响因素，研究中需要予以关注。2.1 校正因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定 校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致 ，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物 UV 吸收的各种因素， 如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分 UV 曲线的峰或谷处， 避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。2.2 一般情况下，校正因子可视具体情况通过如下几种方法确定：（

3、 1）单浓度点测定： 制备适当浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液，分别进样测定，照上式计算，得到校正因子。（ 2）多浓度点测定：制备适当的高、中、低三水平浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液（涵盖定量限、标准限度） ，分别进样测定，照上式计算各校正因子，计算 RSD，求平均值，得到校正因子。（ 3）标准曲线法测定 ：精密称取杂质对照品和主成分对照品，分别制备系列溶液（涵盖定量限、 标准限度），分别进样后， 按最小二乘法以进样量对响应值 （峰面积等）进行线性回归，求得两条标准曲线，两曲线斜率之比即为校正因子。（ 4）吸收系数比值法：对于 UV 检测器来讲，两物质的相对校正因子实际上

4、也1%是两物质以流动相为溶剂， 在检测波长处的紫外吸收系数 E 1cm 之比，故可按吸收系数法测定法的相关技术要求测定各自吸收系数，如对照品级别的标准物质、高中低三水平浓度测定、 吸收度介于 0.30.8 之间、至少 5 台不同型号的 UV 分1光光度计、 2 份供试液同时平行制备测定、同台仪器2 份供试液的平行测定结果不超过 ±0.5%等。测定两物质的吸收系数后，经统计分析确定两物质吸收系数，计算比值，求得校正因子。上述各方法中，（ 1）和（ 2）法较为简捷，可以快捷地量化特定杂质与主成分紫外吸收特征的差异， 多用于评估采用主成分自身对照法定量杂质时是否需要校正。但 如采用加校正因

5、子的主成分自身对照法定量杂质，需将标准物质赋值信息转化为校正因子固化在质量标准中，那么校正因子的准确性非常关键，校正因子的准确计算应符合更为严格的要求，需要考虑并控制求算校正因子过程中的各种误差因素，以及仪器通用性和色谱系统的耐用性等因素，以便使求得的常数更为准确并具代表性，此时采用（ 3）、（4）法更为适宜， 如能考虑到测定人员、不同试验室因素的影响，会更加符合常数求算的基本要求。三、方法验证校正因子的测定属于有关物质方法验证中的一个项目，一般采用有关物质的测定方法，杂质对照品和主成分对照品线性浓度从定量限至限度的120%或150%，一般取 5-6 个点，使用 3 台不同的仪器测定，按照上述

6、方法（3），计算平均校正因子。有关物质方法学验证主要包括：系统适用性、方法专属性、精密度（仪器精密度、方法精密度和中间精密度） 、线性、准确度（已知杂质的回收试验） 、检测限和定量限、溶液稳定性和耐用性。试验内容概念溶液配制份数进样针数评定标准杂质峰峰面积系统适用性是RSD2.0%，对分析设备、保留时间 RSD电子仪器与实空白溶液 1 份进 1 针1.0%；杂质系统适用性验操作、测试峰的拖尾因子供试液 1份进 6 针样品等整个系2.0%，理论统进行评估的塔板数应符合指标质量标准的规定专属性系指在空白对照 1 份空白对照无干其他成分（如辅料溶液（或扰；主峰与相方法专属性 1杂质、降解物、 起始原

7、料、中每份各 1针邻杂质峰的分辅料等）可能间体）1份离度 2.0存在下，采用供试液 1份的分析方法能未破坏样品、每份供试液进降解杂质峰与方法专属性 2够正确鉴定检光湿热 10 天1 针；空白溶主峰的分离度出被分析物质破坏样品和酸液、酸碱空白2.02的特性碱氧化破坏样及氧化空白各品各 1份1针在规定的测试条件下， 同一均质供试品， 经多次取样进行一系列精密度检测所得结果之间的接近程度（离散程度）在同样的操作条件下，在较仪器精密度短时间间隔内，由同一分析人员测定所方法精密度得结果的精密度同一实验室，由于实验室内部条件改变，中间精密度如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度在设计的测定范围内，检

8、测结果与供试品线性中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度用该方法测定的结果与真实准确度或认可的参考值之间的接近程度均指试样中的被分析物能够检测限与定量被检测到的最低量；检测限限不一定要准确定量；定量限测定结果应具1%对照液仪峰面积 RSD器精密度进 6 针2.0%供试液仪器精峰面积 RSD进 6 针（同系密度2.0%，保留时统适用性）间 RSD1.0%供试液 6份杂质含量 RSD每份 1针15%12 份供试液响换仪器，换人每份 1 针应因子 RSD6 份供试液20%1%对照线性相关系数（ R）0.990，Y 轴溶液 5份截距应在每份 1针响应值100%已知杂质的线的 25%以内，响应因子

9、RSD性溶液 5份10%对照液 1 份；每份 2针；平均回收率均应在本底供试液 1每份 2针；80%-120%之份；间， 9 个回收供试液 3份每份 3针率 RSD10%基线 1针；1%对照检测限、定量限检测限 2 针；应不小于 3应不小于 10已知杂质对照定量限 6针杂质峰保留时液检测限、定间 2.0%，峰3有一定的准确量限度和精密度供试液经 X 小溶液稳定性时放置，含量供试液 1 份的变化调流动相 pH变化± 0.2调流动相配比测定条件发生变化± 5%小的变动时，柱温变化±耐用性测定结果不受5影响的承受程检测波长变化度±5nm流速相对值变化± 20%换色谱柱面积 5.0%主成分的含量变化的绝对值2.0