荧光分析法试验有思考题答案_第1页
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文档简介

1、实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量五.数据处理1 .用实验获得的数据绘制两种氨基酸的激发、发射、同步光谱图（如图3、4）2 .从激发和发射光谱中找出最大激发波长和最大发射波长值，以及它们相对应 的峰高。在它们的同步荧光光谱中也确定最大波长和对应的峰高。苯丙氨酸的荧光光谱图|跖FL Ti3-d ilA 疗:i« ytili'diHC 廿Qhl h hWrll iTif SrrS储 Iffl X|-I用凶苯丙氨酸扫描激发波长在 214nm和285m两处出现最高峰，本实验选择 214nm为最大激发波长。此外，激发波长曲线在 280 300nm处出现了一个十 分完美的

2、峰，此峰为倍频峰，非激发波长峰，我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证，如图，我们通过同步扫描荧光光谱技术获得的激发波长也在215nm与之前基本吻合。色氨酸的荧光光谱图色氨酸扫描激发波长在217nm处有一个最大峰，所以激发波长为 217,发 射波长为361。发射波长曲线在450460nm处出现了一个十分完美的峰（在 这张图上没显示出来），此峰为倍频峰，非激发波长峰，我们通过同步扫描荧光 光谱技术可以验证。六.讨论与思考1 .对待测溶液进行预扫描的有何作用？从预扫描得到激发和发射波长的初步结果， 根据我们得到的初步结果对仪 器进行设置，然后对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、 发射和同步荧光光 谱

3、。2 .观察激发波长的整数倍处荧光发射光谱在有何特点？该波长是否适合于进行定量分析？激发波长的整数倍处荧光发射光谱会出现以很强的峰，是倍频峰。不适合定量分析。3 .同步荧光技术有哪些优点？比较激发、发射和同步荧光光谱中的峰值及对应波长，比较他们的不同，并解释原因。同步荧光法能简化光谱，减少光谱重叠和散射的影响，提高对荧光性质相 近化合物同时测定的选择性和灵敏度。同步荧光法相对于激发光谱和发射光谱, 得到的峰比较窄，更明显。同步荧光光谱不是荧光物质的激发光谱和发射光谱的简单叠加。在选合适的扫描波长差值的情况下，同时扫描激发光谱和发射光谱重叠波长处，才同时产生信号，4 .通过两种氨基酸的化学结构，

4、是否可以不经试验判断其荧光强度的大小次序COOH苯丙氨酸色氨酸从共腕角度看，体系的共腕度增强，荧光效率一般也将增大，并使荧光波 长向长波方向移动。共腕效应使荧光增强的原因，主要是由于增大荧光物质的 摩尔吸光系数，冗电子更容易被激发，产生更多的激发态分子，使荧光增强。苯 丙氨酸有4个共腕双键，而色氨酸有5个共腕双键，所以色氨酸荧光强度要高 一些。5 .比较紫外分光光度法和荧光分析法的区别和各自的优缺点。紫外分光光度法是根据物质分子对波长为 200-760nm这一范围的电磁波的 吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。反映的是分子结构中 发色基团和助色基团的特征，但是紫外分光光度法提供的信息量比较少，所以 虽然可以提供化合物的骨架结构和验证某些发色基团和助色基团，但很难确定 其基团位置

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