免疫考点知识点学习

1、十一章1固相膜免疫分析技术的概念：以微孔膜为固相载体，包被已知抗原或抗体，加入待测样本后，经微孔膜渗滤作用或毛细管虹吸作用使样本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合，再通过胶体金标记物或酶标记物与之反应形成肉眼可见的显色结果2胶体金的概念：是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核和包围在外双离子构成。由于静电作用，金颗粒之间相互排斥而形成一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液。 胶体金的特性：（1）胶体特性（2）呈色性和光吸收性（3）稳定性3免疫层析实验原理：以硝酸纤维素膜为固相载体，样品溶液借助毛细作用在层析条上泳动，同时样品中的待测物与层析材料上待测物的受

2、体（抗原或抗体）发生高特异性、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过检测标记物胶体金颗粒或荧光素等，在短时间内（20min)聚集而得到直观的试验结果（显色） 。包括双抗体夹心法、竞争法、间接法4免疫渗滤实验原理：是将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上，制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依次在膜上滴加样品、免疫胶体金及洗涤液等试剂并与硝酸纤维素膜上的相应抗原或抗体发生反应，起到亲和层析的浓缩作用，达到快速检测的目的。抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。包括双抗体夹心法、间接法5斑点酶联免疫

3、吸附实验：样品中的抗体或抗原与预先包被在nc膜上的抗原或抗体发生抗原-抗体反应，然后再加入相应的酶标二抗进行反应，反应结束后，通过酶催化底物，形成有色的沉淀物，产生显色反应，根据染色条带或斑点的有无或深浅，对抗体或抗原进行检测。6免疫印记原理：是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容量大、灵敏度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。十二章1免疫组化的概念：是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。 方法：酶免疫组织化学技术、荧光免疫组织化学技术、免疫金（

4、银）组织化学技术、亲和组织化学技术、免疫标记电镜组织化学技术2酶免疫组织化学技术：直接法、间接法、酶桥法、PAP（过氧化物酶抗过氧化物酶）法、双桥PAP、APAAP（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶）3亲和素的种类：植物凝集素、生物素、葡萄球菌蛋白A（SPA）等4免疫标记电镜技术：酶免疫电镜技术、免疫胶体铁化学染色法、免疫胶体金染色法5抗原的修复法：酶消化法、盐酸水解法、微波法、高压锅法、煮沸法十三章1流式细胞术的概念：是基于流式细胞仪的一项快速、精确、高通量针对微粒（细胞）的特征或功能进行多参数定性、定量分析和分选的新型技术。 特点：（1）速度快（2）精度高（3）准确性好（4）多参数量，可以同时对一个

5、微粒作物理、化学和生物特性的多参数测量。2经典流式细胞仪和分选仪的基本结构书：（1）液流系统（2）光学系统（3）信号检测及光电转换系统（4)分选系统（5)计算机系统PPt:液流系统、信号检测、转换及放大系统、计算机分析系统分选仪多了一个：分选系统：荧光激活细胞分选系统（FACS）3数据的显示与分析： 流式细胞检测结果的缩写：散射光信号：前向散射光FSC、侧向散射光（垂直散射光）SSC荧光信号：平均荧光强度（MFI）或相对荧光强度（RFI） 异硫氰酸荧光素（FITC）藻红蛋白（PE） 前向散射光意义：是与细胞切线方向小角度散射光，其能反映细胞形状和体大小。其强度与细胞体积大小成正比。 侧向散射光

6、意义：激光照射到细胞内容物时，可以产生方向不同和强弱不等的散射光，垂直方向散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，可反映被检测细胞内精细结构和颗粒信息。细胞越不规则，细胞表面的突起越多，细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多，其SSC值就越大。4荧光补偿的概念：是指不同的荧光素由于发射光谱重叠，因此在检测的时候有串色现象，通过减去重叠部分的光，使检测器检测到的光能量是真正的某一荧光素产生的光能量。5结果显示方法：？单参数：（单参数直方图）横轴：荧光或散射光，纵轴：细胞数量构成，用于FSC、SSC和荧光（FL1FLn）等单参数的数据显示。 双参数：（二维点图、二维登高）两个独立参数

7、与细胞相对数之间的关系，横坐标和纵坐标分别代表与细胞有关的两个独立参数，平面上每一个点表示具有相应坐标值的细胞。双荧光：CD分子：分区分为：双阳、双阴、x阳y阴、x阴y阳。双散射光：小细胞、小颗粒度的细胞群是淋巴细胞群，T细胞、B细胞和NK细胞都位于此中细胞、中颗粒度的细胞群是单核细胞群，大细胞、大颗粒度的细胞群是中性粒细胞群。 设门分析技术：在某一张选定参数的直方图或散点图上，根据图中细胞群分布特征，选定其中想要分析的细胞群，从而对该群细胞进行单参数或多参数分析。6常用荧光燃料和荧光蛋白：不同通道选不同燃料的搭配原则：流式细胞仪根据荧光素的最大吸收光谱确定该荧光素在流式细胞仪上由哪种激光器激

8、发，并根据最大发射波长确定其接收通道。？十五章1免疫细胞的分离方法和功能检测：(看一下） 怎么标记特定细胞：T细胞：CD3+CD4+CD8-辅助性细胞ThCD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞Tc or CTLCD4+CD25+ Foxp3+调节性细胞Tr or Treg B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-) NK细胞：至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。目前多以CD3-、CD16+、CD56+ 作为NK细胞的典型标志。 十六章1

9、细胞因子测定方法：4种：酶联免疫吸附试验、化学发光酶免疫试验、流式细胞术酶联免疫斑点实验特性1 ：免疫学测定法检测的是细胞因子或黏附分子的蛋白含量，具有特异性高、 操作简便、重复性好，实验结果稳定，测定影响因素较少等特点。 特性2：细胞因子作用特点：低分子量的多肽或糖蛋白，大部分为单体，半衰期短。具有高效性、多效性、重叠性、网络性、协同性和拮抗性。十七章1冷球蛋白的概念：又称冷免疫球蛋白，是血清中一种病理性蛋白质。该蛋白在04°发生沉淀，420°冻胶状或沉淀，37°溶解。今天讲的？二十二章1超敏反应检测方法：1型：体内：皮肤实验、激发试验 体外：血清总IgE检测、

10、特异性IgE检测、IgG4检测、细胞脱颗粒测定 2型：抗血细胞抗体检测、自身抗体检测、抗球蛋白试验即Coombs试验。 3型：免疫复合物 4型：皮肤实验二十四章1免疫增殖病的损伤机制：（1） 浆细胞异常增殖（2） 正常体液免疫抑制（3） 异常免疫球蛋白增殖所造成的病理损伤（4） 溶骨性病变2常见免疫球蛋白增多病：1、 多发性骨髓瘤2、 原发性巨球蛋白血症3、 重链病4、 轻链病：血清蛋白电泳几乎无M带，但尿蛋白电泳显示M带，位于区间5、 良性单克隆免疫球蛋白病6、 淀粉样变性3：M蛋白的概念：一类免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（轻链或重链）的异常增多，但多无免疫活性。形式：完整Ig (IgG, I

11、gA, IgM) 轻链（链, 链) 重链（链，链，链）书上：是浆细胞或B淋巴细胞单克隆大量增殖产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（重链、轻链等）。它产生于单一克隆，又常出现于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤病人的血或尿中，故称M蛋白。4：本周蛋白概念： 当轻链合成超过重链时，轻链游离于血清中，由于分子量较小，容易通过肾小球从尿中排出，而在尿中检出。（轻链病）5检测方法：1血清区带电泳 2免疫电泳3免疫固定电泳4血清免疫球蛋白定量6异常免疫球蛋白检测的应用原则： 一般采用两种以上的方法互相验证。初筛试验：血清区带

12、电泳分析、免疫球蛋白定量检测或尿本-周蛋白定性检测；对于阳性者要作定量分析及免疫球蛋白分类鉴定：免疫电泳或免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量和血清及尿中轻链定量及比值计算；鉴别良性还是恶性增生：良性者轻链与重链增高比为1：1,恶性者轻链与重链比值明显增高改变；临床诊断还要结合相关实验室资料：骨髓检查、影像学及病理学结果等综合考虑做出正确诊断。1抗原抗体结合反应的原理：（1） 抗原抗体结合力：静电引力、范德华引力、氢键、疏水作用力。（2） 抗原抗体结合力的亲和力：抗体单价Fab片段与单价抗原表位的结合能力（3） 亲和力：多价抗体与抗原分子之间的结合能力背：2抗原抗体结合反应的特点：（1） 特异性：

13、交叉反应：若两种不同抗原分子表面的部分抗原表位相同或类似，则可与 与彼此相应的多克隆抗体发生交叉反应。（2） 可逆性：抗原抗体是分子表面的非共价键结合，形成的复合物不稳定，在一定条件下可以解离为游离抗原和抗体。这种结合特性称为可逆性。（3） 比例性：前带：抗体过剩、等价带：比例合适的范围、后代：抗原过剩（4） 阶段性：特异结合阶段（肉眼不可见，数秒数分钟内完成）反应可见阶段（凝集和沉淀现象）3影响抗原抗体结合反应的因素（1） 本身因素：抗原：理化特性、表位数目 抗体：来源、特异性和亲和力 抗原抗体的比例：影响最大（二）反应基质因素：干扰反应但与分析物本身无关的非特异性2因素：蛋白、盐、补体、抗

14、免疫球蛋白抗体、药物等（三）实验环境因素：电解质：抗原等电点：PH35，抗体等电点：PH56 酸碱度：反应一般在PH68进行 温度：最常用室温，其次43°和28°一定温度范围，速度随升温加快，但过高反应物失活。4抗血清保存：短期4°保存、冰冻5年，-80°，避免反复冻融，真空保存更久。5McAb单克隆抗体制备：杂交瘤技术：在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞（有HGPRT但无组织培养的增值能力）与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞(缺乏HGPRT)融合为B细胞杂交瘤。 运用HAT培养基：H黄嘌呤、A氨基喋呤、T胸腺嘧啶核苷 细胞DNA合

15、成途径：主要途径：糖和氨基酸作为原料，叶酸作为要辅酶。 应急（弥补）途径：在H和T存在的情况下，HGPRT、TK 催化合成 过程：融合、选择培养基培养、抗原特异性杂交瘤细胞筛选抗体杂交瘤细胞阳性保存：液氮：慢冻-70°，快融：34-40°，定期检查染色体数和抗体产生能力背6基因工程抗体：又称重组抗体，是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体按不同需要进行加工改造和重新装配，经转染适当受体细胞表达的抗体分子。7免疫凝集实验抗原称为：凝集原，抗体称为：凝集素8玻片凝集试验：定性：1菌种诊断或分型鉴定2检测病人血清中的抗体3血型ABO血型鉴定9试管凝集试验：（半定量）定量抗原

16、与倍比稀释受检血清混合反应。 效价：产生明显凝集显现的血清最高稀释度 肥达实验、外-斐实验、交叉配血实验10间接免疫凝集抑制实验：检测标本中是否存在与和致敏抗原相同的抗原， 先将标本和抗体试剂结合，再加入致敏载体抗原，出现凝集现象，表示无相同抗原（阴性）11间接Coombs实验：用于检测游离在血清中的不完全抗体。将受检者与正常人O型红细胞混合，如受检者血清中有不完全抗体，则可吸附于红细胞上，形成致敏红细胞，再加入抗人球蛋白抗体，与致敏红细胞表面的不完全抗体结合，使红细胞凝集。12自身红细胞凝集试验：用于检测全血中的抗体或抗原，运用抗人O型红细胞单克隆抗体与另一种特异性抗体或抗原连接形成双功能抗

17、体，该抗体能和任意血型红细胞结合，不出现凝集现象，可以利用全血的红细胞检测相应抗原或抗体。13透射免疫比浊实验：指可溶性抗原与相应抗体在一定缓冲液中结合形成免疫复合物，使反应浊度发生改变，在一定波长的光线通过反应液时，被其中免疫复合物反射、吸收而引起透射光减少，可用吸光度表示，吸光度与免疫复合物含量成正比，在保持抗体过量条件下，吸光度与抗原量成正比。14散射免疫比浊实验：抗原抗体在液相中特异性结合后产生一定大小的免疫复合物，一定波长的光通过通过反应液遇到免疫复合物发生散射现象，光的强度与免疫复合物含量和散射夹角成正比，与入射光波长成反比。保持散射角度和波长一定，光强与免疫复合物含量成正比，保持

18、抗体过量，免疫复合物与抗原含量成正比。15单向免疫扩散实验：是先将一定量的抗体混于琼脂凝胶中，使待测的抗原溶液在琼脂内从局部向周围自由扩散，在一定区域内形成可见的沉淀环。16双向免疫扩散实验：是将抗原和抗体加在同意琼脂板对应孔中，各自向对方扩散，在浓度比例恰当处形成沉淀线，观察沉淀线的位置、形状及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。（测定抗体的效价：出现沉淀线最高的抗体稀释度）17免疫电泳技术：是电泳分析与免疫沉淀实验相结合的产物，是直流电场作用下的凝胶扩散实验，是将抗原-抗体反应的高特异性与电泳技术的高分辨率及快速、微量等特性相结合的一种免疫化学技术。1加快沉淀反应速度2抗原抗体扩散方向固定集中，提高灵敏度3可以分离不同蛋白后再与抗体反应。 对流免疫电泳：将双向免疫扩散和电泳相结合在直流电场中定向加速的免疫扩散技术。抗原等电点较低，带负电向正极移动，抗体等电点偏高，向负极移动。（浓度最适比出形成沉淀线）对流只是对部分抗体而言18免疫电泳：亦称免疫区带电泳-免疫双扩散实验，是区带电泳与双向免