常用pH缓冲液配置方法及注意事项

1、常用pH缓冲溶液的配制和pH值序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13.0 ml 0.2 mol/L HCl与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均匀后,加水稀释至100 ml1.72氨基乙酸-盐酸在500 ml水中溶解氨基乙酸 150 g,力廿480 ml浓盐酸,再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200 ml水中溶解2 g 一氯乙酸后,加 40 g NaOH ,溶解完全后再加水稀释至1 L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml0.1 mol/L HCl混合均匀,加水稀释至100 ml3.65邻苯二甲酸氢钾-

2、氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀,加水稀释至 100 ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g,加浓HCl 10 ml,再加水稀释至 1L5.47磷酸二氢钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与 23.6 ml 0.1mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1mol/L NaOH 混合均匀,加水稀释至100 ml8.09氯化铵-氨水把0.1 m

3、ol/L氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以2: 1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与 43.9 ml 0.1mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把49.0 ml 0.1 mol/L氨基乙酸-氯化钠与 51.0 ml0.1 mol/L NaOH 混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢氧化钠扌巴 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO与 26.9 ml 0.1 mol/LNaOH混合均匀,加水稀释至100 ml12.013氯化钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/

4、L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaO混合均匀,加水稀释至100 mlH13.0、常用溶液的配制(一)溶液配制考前须知1药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guara nteed reage nt , G R.)、分析试剂(An talyticalreage nt , A. R )化学纯(Chemical pure , C. P.)和实验试剂(Laboratoryreage nt , L. R.)等等.工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液 用的硫酸、配枯燥剂的氯化钙等.2. 药品称量要精确.3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在5

5、0万欧姆以上,pH在5.57.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水.4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长.(二) 0.067 (1/15 ) Mol/L 磷酸缓冲液1. 1/15MOI/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾(KHPQ, A. R.) 9.08g,用蒸馏 水溶解后,倾入1000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1000ml ).2. 1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO, A.R. ) 9.47g (或者NqHPO2HO 11.87g )用蒸馏水

6、溶解后,放入 1000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1000ml ).3. 按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液.附表1磷酸盐缓冲液配制法(单位：毫升)pH1/15Mol/L Na 2HPO1/15Mol/L KH 2POpH1/15Mol/L Na 2HPO1/15Mol/L KH 2PQ5.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.41

7、0.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0(三)0.15Mol/L PB 液附表2 0.15MOI/LPB液配制法pH0.15Mol/L Na 2HPQ ( ml)0.15Mol/L NaH 2PQ ( ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO 2H2

8、O分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含 26.7g/L .NHPO 12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含 53.7g/L.NaHPQ -H2O分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含 20.7g/L .NaHPQ - 2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含 23.4g/L . 四0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na 2HPQ ml0.2Mol/L NaH 2PO ml5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.

9、56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L Na 2HPO 2 H 2O溶液 35.61g/LNa2HPO 12 H2O溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH 2PQ -H 2O溶液含 27.60g/LNaHPQ - 2 H 20溶液含 31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液那么在0.2Mol/L PB缓冲液的根底上加 H2O稀释1倍即可.欲配制PBS 液时,那么在溶液中加 0.85 %的NaCl溶液即可.五无钙镁离子磷酸缓冲盐水 PBS0.15Mol

10、/L PH 7.2NaCl 8.0gKCl 0.2gNHPO1.15g如为 NatHPO 12HO,那么为 2.89g KHPO 0.2g将上述试剂依次溶于 1 000ml去离子水中,完全溶解后,115C高压灭菌10min15min,存在4C冰箱中备用.此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物.六硼酸盐缓冲液 Borate sali ne buffer 1. 硼酸H 3BO0.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml.2. 硼砂NaabO0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml.附表4不同pH的0.2MOI/L硼酸缓冲液配制法pH0.0

11、5MOI/L 硼砂ml0.2MOI/L 硼酸mlpH0.05MOI/L 硼砂ml0.2MOI/L 硼酸ml7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.03.03.07.09.08.02.0七巴比妥缓冲液1. pH8.2离子强度0.05MOI/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水3 000ml1.17N HCl 55.0ml1.17 N HCI=193ml 浓 HCl 力口 1 807ml 蒸馏水将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水.加 1.17 N HCl 55ml .用HCI调节pH到8.2,并加蒸馏水至 4 265ml

12、.2. pH8.4 0.06MOI/L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至1 000.00ml3. pH8.6 0.06MOI/L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1 000.00ml八0.2MOI/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5 0.2MOI/L 醋酸盐缓冲液配制法pH0.2MOI/L0.1MOI/LpH0.2MOI/L0.1MOI/L23 C37 CTris (ml)HCI ( ml)23 C37 CTris (ml)HCI (ml)9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758

13、.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5九三羟甲基甲烷一盐酸缓冲液 Tris HCI缓冲液不同 pH, 0.05MOI/L25ml0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷加x mIO.INHCI,加水稀释至100ml 见下表附表6 Tris HCI缓冲液配制法pH0.2MOI/LTris(ml)0.1NHCI(ml)pH0.2MOI/LTris(ml)0.1NHCI(ml)

14、23 C37 C23 C37 C9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷Tris分子量=121.140.2MOI/L 三羟甲基氨基甲烷：Tris24.2

15、3g ,加水至1 000ml.0.1NHCI: 取 HCI8.6ml,加水至 1 000ml.十0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO3.70gNatCO 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得.不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降.最好小量配制.一甘油磷酸缓冲液1 .配制pH8.0磷酸缓冲液0.1MoI/L Na 2HPQ 94.50ml0.1N NaH 2PO4 5.50ml混合即可29份甘油与 1份 pH8.0 磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液. 用途：用于免疫荧光试验.十二 Hank's 液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNHPO

16、 12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4 酚红液 50.00ml双馏水加至 100.00ml115C高压灭菌15min,冰冻保存.2工作液贮存液 1 份双馏水 9 份115C高压灭菌15min.临用时用灭菌的5.6 % NaHCO夜调pH值至7.2左右溶液呈橙红色 十三萘钠氏试剂 Nessler 's reagent 配方 1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20% NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方 2：碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml完全溶解后过滤,加 20% NaOH 50ml.用途：检测溶液中氨离子.十四阿氏Alsev

17、er ' s液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后,以10%宁檬酸调节pH至6.1 ,过滤,分装,10磅10min灭菌,4C保存.十五青、链霉素混合液简称S. P.液或双抗液青霉素 40 万 U 5 支链霉素200万卩g1支分别溶于 100ml 灭菌无离子水中或共同溶于 200ml 灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置 -10C-20C冰箱保存备用1万单位 卩g/ml .临用时,按1%的量参加营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml.十六洗液清洁液配方 1 ： 重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾参加蒸馏水中, 使之自然溶解或水浴溶解, 亦可在大坩埚中加热溶解, 然后慢慢 参加浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧那么稍