人胃癌细胞株MGC_803侧群细胞的分选与生物学特征

1、人胃癌细胞株MGC_80侧群细胞的分选与生物学特征2021521 人胃癌细胞株 MGC -803 侧群细胞的分选与生物学特征吴婷，司今，姜伟，李锦毅俞薇，1 辽宁医学院武警总医院研究生培养基地，北京100039； 2 武警总医院11222*摘要：目的803中别离侧群SP 细胞，从人胃癌细胞株 MGC研究其生物学特征。 方法利用流式细胞分选803 细胞株中分选出SP细胞和非SP细胞亚群进行培养，术FACS 从MGC采用克 隆形成实验比拟两组亚群细胞 NOD /SCID鼠成瘤实验检测两组亚群细胞体内成瘤能力。结 果的体外增殖能力，FACS 结果显示，细胞株 MGC-80沖SP细胞亚群占总细胞的 0

2、. 3% 1. 2% SP细胞 体外克隆形成率为 0862?0 050 %，非 SP 细胞体外克隆33形成率为0. 325?0 . 207 %两者比拟P V 0. 05; SP细胞最低成瘤数量是1? 10/只，非 SP 细胞为 5?10/ 只。结论803中存在SP细胞，人胃癌细胞株 MGC其生物学特性与干细胞根本符合。关键词： 胃肿瘤；干细胞；别离；侧群细胞中图分类号：R7352文献标志码： A266X 2021 01-0004-03 文章编号： 1002-Isolation and biologic characteristics of the side population in huma

3、n gastric cancer cell lines MGC-803YU Wei 1， WU Ting ， SI Jin ， JIANG Wei ， LI Jin-yi( 1Graduate Education Center of Liaoning Medical University in GeneralHospital of Chinese People' s Armed Police Forces ， Beijing 100039 ，PRChina )Abstract ： ObjectiveTo investigate isolation and biologic charac

4、teristics of the sidepopulation ( SP )in human gas-Fluoresence activated cell sorting was used to sort SP and NSP cells from MGC-The percent of SP cells was 0 3%-1 2% Cloneformation effi-tric cancer cell lines MGC-803 Methods803s Tumorigenicity of the two subpopulations was observed by sphere formin

5、g assay Proliferation was determined by sub-cutaneous tumor formation in NOD /SCIDmice Resultsciency of SP cells and NSP cells was(0862?0 050)%and ( 0325?0. 207) %respectively , there were significant differ-ences(P v 0. 05). Invivo ， the tumorigenic ability of SP cells was higher than that of NSP c

6、ells . Tumor formed only by 1?103SP cells in nude mice ， but 5 ?103NSPcells . Conclusion SP cells with stem cell properties.Key words ：stomach neoplasms ；stem cells；isolation；side populationcellsHuman gastric cancer cell lines MGC-803contained some随着医学水平的进步，胃癌的生存率有所提高，但仍有相当一局部胃癌患者治疗后出 现远处转移最终死亡。探索防止

7、胃癌转移的途径是进一步提高胃癌生存率的关键。肿瘤干 细胞理论的提出为胃癌的治疗开辟了新的研究方向。研究发现，在乳腺癌、肺癌、卵巢癌 等多种肿瘤中，侧群细胞( SP )具有高增1 3。胃癌干细胞殖和体内高致瘤性等干细胞特性的研究国内外报道较少。 2021 年 10 月 2021 年 8月，我们通过别离胃癌 SP 细胞，对其生物学特征进行初步研究。现报告如下。基金工程：国家自然科学基金资助工程(81072969)。通讯作者11 . 1材料与方法材料803 由中国协和医人胃癌细胞系 MGC科大学细胞中心提供。3 4周龄NOD /SCID小鼠32 只，购自中国医学科学院动物所。胎牛血清、胰Hoches

8、t33342 、PI、DMEM培养液购自美国蛋白酶、Sigma 公司。主要仪器包括 CO 2恒温细胞培养箱、FACS 流式细胞仪、倒置显微镜。 1 21 21方法细胞培养与分选将胃癌细胞置于含 10%100U /mL 青霉素和100 口 g /mL链霉素胎牛血清、37 ?、5%CO 2的DMEM培养液中，饱和湿度条件下培养，胰蛋白酶消化，常规换液传代。收集对数生42021521长期细胞，制成 1?10/mL 的单细胞悬液，设对照组和实验组，对照组参加维拉帕米。 两组分别参加37?水浴 90 终浓度为 5 口 g /mL 的 Hoechst33342 ,min ， PBS 冲洗，离心弃上清，重悬

9、于含2%胎牛血清的培养基中。检测前10mi n参加PI至终浓度1 口 g /mL,去除死细胞，用 FACS流式 细胞仪分选 SP 细胞和非 SP 细胞，分别接种于细胞培养皿中培养 2周，到达再次分析的 细胞数目后收集细胞做 Ho-echst33342 染色,计算 SP 细胞比例。 122细胞平板克隆形成实验分别收集分选的 SP 细胞和非 SP 细胞,按 200 个/孔接种于 6 孔板,SP 细胞非 SP 细胞表1注射细胞数 5?1021 ?101 ?10各组接种的细胞数和形成的肿瘤数肿瘤形成数 / 注射小鼠数SP 细胞非 SP 细胞 0/41/44/44/40/40/42/44/45 ?103

10、4设 3 个平行孔。 2 周后终止培养，结晶紫染色。显微镜下计数50个细胞的克隆数，计算克隆形成率 CFE : CFE =克隆形成数/接种 细胞数 ?100%。 123体内致瘤性的研究将小鼠随机分成 8 组45 ?各 4 只。将 SP 细胞和非 SP 细胞分别以 1?10、图 1SP 细胞、非 SP 细胞在小鼠体内形成肿瘤的组织学结构有异质性、增殖和浸润等特性。 Hoechest33342 是一种脂溶性DNA结合荧光染料，某些癌细胞和干细胞可以将其排出细胞，表现为细胞核 不着色或者很低程度的着色，利用流式细胞仪可以将不着色细胞加以别离。这种可以排除 Hoechest33342 的特性称为 SP

11、 表型，别离出来的细胞称为 SP 细胞。本研究利用这种原理 培养胃癌细胞株分选 SP 细胞，发现在胃 803细胞株中 SP 亚群占细胞总数的 03%癌 MGC- 12%，进一步证实胃癌肿瘤组织中 SP 细胞亚群的存在。王宁等28 肿瘤细胞系SP对胃癌MKN细胞亚群初步分析发现，该细胞系SP细胞占细胞总数的 025%。提示不同肿瘤细胞系中 SP 细胞亚群的比例存在差异。肿瘤干细胞是肿瘤研究的热点。干细胞和肿瘤1细胞有很多共同点，研究推测胃癌也可能属于干 SP 细胞和非 SP 细胞在形细胞疾病。 本研究说明，态学上无明显差异，只能从功能学角度鉴定 SP 细胞的干细胞特性。平板克 隆形成实验是测定单

12、个细胞增殖能力的有效方法之一，本研究采用克隆形成试验证实SP细胞体外克隆形成能力显著高于非SP细胞。NOD /SCID鼠体内成瘤实验是验证肿瘤干细胞 SP 细胞形成肿瘤所需最可靠的指标。本研究发现，3最低细胞数为 1?10 ，而非 SP 细胞所需最低细胞33数为 5?10 。以 5?10 注射 SP 细胞成瘤率高达 100%， S P 细胞的致而非 SP 细胞成瘤 率仅为 50%，5103 、 1?103 、5?102 数量级注射于每组小鼠腋下的 8 同一个位点。每日观察成瘤情况 并记录成瘤时间，周时处死。取瘤体10%甲醛固定，制作小鼠移植瘤HE 染色。石蜡切片，1 24 统计学方法采用 SP

13、SS170 软件，计量资珋 ?s 表示，料以 x 组间比拟采用t检验。P < 0. 05为差异有统计学意义。2结果2 . 1流式细胞仪分析结果用 FACS 检测到胃癌细胞株中存在 SP 细胞亚群，其占细胞总数 的 0 3% 1 2%，经维拉帕米阻断后 SP 细胞亚群减少至 0 0 1%。镜下观察分选后的 SP 和非 SP 细胞无明显形态学差异。2 2 克隆形成率 2 周后终止培养，显微镜下可见 SP 细胞和非 SP 细胞均有集落形成， SP 细胞形成的克隆细胞排列密集且直径较非 SP 细胞明显增大。两者的 CFE 分别为(0. 862?0 . 050)呀口( 0. 325?0 . 207

14、) % 二者比拟 P V 0. 01。2. 3体内致瘤性及病理染色接种 SP 细胞和非 SP 细胞到小鼠 8 周时，各组均未发生意外 死亡。各组接种的细胞数和形成的肿瘤数见表 1 。 SP 细胞最33低成瘤数量是 1?10 ；非 SP 细胞仅 5?10 注射组有 2 只小鼠有肿瘤生长，且成瘤体积 小。两者形成肿瘤的组织学结果见图1。 3讨论Reya 等 4于 2001 年提出肿瘤干细胞学说，认瘤能力显著高于非 SP 细胞。以上均证实了 SP 细胞的干细胞样特性。Burkert等从HCG10胃癌细胞株中分选出 SP细胞和非SP细胞，分别注射到 1016 周后未发现肿瘤生长，只小鼠的皮下，这可能与

15、细胞系的选择有关。干细胞多处于 G 0 期，传统的放疗和化疗治疗恶5为肿瘤组织中存在一小局部具有干细胞特性的肿瘤细胞，其具有无限自我更新、高度增殖能力及多向分能够产生不同表型的肿瘤细胞， 并使肿瘤具化潜能，2021521 性肿瘤主要针对肿瘤中快速增殖的细胞，治疗后仍有相当一局部人出现复发 和转移。针对干细胞的靶向治疗将为延长胃癌患者的生存期甚至治愈胃癌提供可能。如能 杀灭胃癌干细胞或诱导其分化可能解对改善预后有重决胃癌术后复发和转移两大问题，要意义。参考文献：1 Ginestier C， Hur MH ， Charafe-Jauffret E ， et al ALDH 1 is a mark-

16、erof normal and malignant human mammary stem cells and a predic-tor of poorclinical outcomeJ Cell Stem Cell ， 2021， 1 7： 555-567 2 王翠环，杜勇瑞，高燕，等人卵巢癌细胞系干/ 祖细胞别离及其J 中华肿瘤防治杂志， 2021， 176：412-416鉴定:3王波，杨欢，黄玉政，等人小细胞肺癌细胞株H446侧群细胞的癌症， 2021， 29 3： 272-278 生物学特征 J 4 Reya T ， Morrison SJ ， Clarke MF ， et al Ste

17、m cells ， cancer ， andcancer stem cells J Nature ， 2001， 4146859：105-111 5王宁，28肿瘤细胞系 SP 细胞亚群初陈凛，卫勃，等胃癌MKN-2021， 159：1000-1003步分析 J 世界华人消化杂志，6 Burkert J ， Otto WR ， Wright NA Side populations of gastrointestinalcancers are not enriched in stem cellsJ J Pathol ， 2021， 2145：564-573收稿日期： 2021-11-13 -个案报

18、告白塞病合并心脏右室肿瘤 1 例报告范文强，王文翔，冯俊，侯爱萍新乡市中心医院，河南新乡45300029 岁。因口腔溃疡 2 年，患者男，视力模糊 1 年，阴囊溃疡 2 个月于 2021 年 9 月 9 日入院。患者 2 年前无明显诱因反复出现口腔深大溃疡，无疼痛，服用强的松后好转。1年前出现左眼视力下降，皮肤间断出现结节性红斑。 2 个月前再次出现口腔溃疡，伴结节 红斑加重，并出现阴囊深大溃疡。入院前 3d 阴囊溃疡出现疼痛，并出现右肩关节肿胀、 疼体温升至 38 5? 。无口干、眼干、脱发、皮疹、光痛，过敏现象，无家族遗传病史。入院查体： T 376? ，BP 110/70mmHg 。全身

19、无皮疹、 水肿及淋巴结肿大。心肺听诊无异常。腹平软，肝脾肋下未及。四肢肌力、肌张力正常， 神经系统查体。专科查左眼视力 0 4。口腔黏膜可见数体：右眼视力 10，个直径 2 3mm 的溃疡，面部痤疮样皮疹。阴囊处见一 5mm?4mm 大小溃疡，无触痛。 右肩关节皮温增高、肿胀伴压痛，双上肢散在数枚结节样红斑。针刺反响阳性。实验室检 查：血常规： WBC 13?109/L ，N 854%，余正常；尿常规：葡萄糖 +； ESR 46mm /h， CRP 462mg /L ；肝肾功能未见异常。尿C3 轻度增酸 328U /L 。免疫球蛋白： IgG 轻度降低，C4 正常。抗核抗体、高、抗 ENA 抗体、抗 CCP 抗体等均为阴性。心电图正常。胸部CT 示右下肺炎症改变。心脏彩超示右室侧壁 27mm?19mm 等回声，向腔内突出，流出道 无明显狭窄，考虑右室侧壁纤维瘤或横纹肌瘤可能性大。腹部超声实性占位，未见异常。眼底造影示：左眼后葡萄膜炎。入院诊 63d