普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色ppt课件

1、 实验目的 ； 实验资料 ；显微镜的构造 ； 油镜的原理 ；实验义务 ； 6.实验步骤； 7. 实验报告 ； 8.下次实验。l实验1、察看制备好的装片 ；l实验2、每个同窗本人动手单染三张片子进展察看 ； 1.学习普通光学显微镜的构造和功能；学习普通光学显微镜的构造和功能；2.学习并掌握油镜的原理和运用方法；学习并掌握油镜的原理和运用方法；3.学习微生物的简单染色，察看细菌的学习微生物的简单染色，察看细菌的 形状。形状。 前往前往l显微镜 载玻片 香柏油 擦镜纸 l双层瓶 染色剂 滴管 菌液 l l 前往1、机械系统、机械系统 P15图图1：A单筒显微镜：单筒显微镜： l l l = = R.

2、虎克在17世纪中期 19世纪中期的显微镜 20世纪初期制做的复式显微镜 的显微镜 l 带自动照相机 装有场发射枪的 超高压透射l 的光学显微镜 扫描电子显微镜 电子显微镜l = = l在光学系统中 ，物镜的性能最为关键，分为低、高、油镜头。油镜的放大倍数最大，在运用时比较特殊，需求在载玻片与镜头之间加滴镜油香柏油。 前往l放大倍数可100倍之大，焦距很短，光强度最大。 l 油=1.52香柏油l介质折射率 水=1.33l 空气=1l 玻璃=1.55l香柏油对光的折射率与玻璃类似，光线直接经过香柏油进入物镜而不发生折射，不但添加了照明度，而且使油镜的数值孔径添加，用NA表示，普通在1.21.4。低

3、高倍镜头等干镜NA都低于1.0。假设以可见光的平均波长为0.55m来计算，数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨出间隔不小于0.4m的物体而油镜的分辨率却可到达0.2m左右。可见显微镜的放大效能是由数值孔径决议的。 从物理学角度来看，光学显微镜的分辨率受光的干涉景象及所用物镜性能的限制。 可表示为： 分辨率最大可分辨间隔= l/2NA l =光波波长 ，NA=数值孔径值可见光波0.4 0.7m NA=n*Sina 1.光线投射到物镜上的最大角度的数值孔径值 一半正弦； 2.乘上玻片与物镜间介质折射率积。 n介质折射率， a最大折射角的半数 光线投射到物镜的角度愈大，分辨效能就愈大。物镜的分辨孔

4、径愈大，光波波长愈短，明显的加强分辨率如油镜。 前往l1、察看制备好的装片；l2、每个同窗本人动手单染三张片子进行察看。其中教师检查一片。 l 前往1、涂片、涂片左手持菌液试管左手持菌液试管,右手右手持接种环在火焰中灼持接种环在火焰中灼烧烧,冷却后从试管中冷却后从试管中取菌液一滴取菌液一滴,在干净在干净载玻片上做一涂膜载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取从固体斜面或平板上取菌时菌时,用无菌接种环用无菌接种环取少量菌体取少量菌体,涂抹均涂抹均匀于预先滴有的一滴匀于预先滴有的一滴自来水地玻片上自来水地玻片上; 2、枯燥、枯燥在空气中自然枯燥或在在空气中自然枯燥或在火焰快速经过枯燥火焰快速经过枯燥

5、(与与热固定同步进展热固定同步进展).3、热固定、热固定用镊子夹住涂片一端用镊子夹住涂片一端,在火焰上延续经过几在火焰上延续经过几次次;以载玻片在手背上以载玻片在手背上试觉得不烫为宜试觉得不烫为宜.4、染色、染色在固定的标本上加美兰在固定的标本上加美兰结晶紫染液结晶紫染液1-2滴滴,染色染色1min,悄然滴加水洗悄然滴加水洗; 吸干吸干, 加半滴水加半滴水, 盖上盖盖上盖玻片玻片, 滴上半滴镜油油滴上半滴镜油油镜检。镜检。(到此实践上即为细菌普到此实践上即为细菌普通染色通染色)媒染：揭去盖玻片媒染：揭去盖玻片,吸干水吸干水, 滴加滴加1-2滴革氏碘液媒染滴革氏碘液媒染1min, 悄然水洗悄然水洗,吸干。吸干。5、洗脱、洗脱滴加滴加95%乙醇溶液乙醇溶液(或或30%丙酮乙醇脱色丙酮乙醇脱色),悄然摇动悄然摇动玻片至液滴无色玻片至液滴无色,不要过不要过分脱色分脱色(约约30秒秒),立刻悄立刻悄然滴加水洗然滴加水洗;吸干。吸干。6、复染、复染滴加蕃红染液复染滴加蕃红染液复染3min,悄悄然滴加水洗然滴加水洗;吸干载玻片反面及标本周吸干载玻片反面及标本周围水渍围水渍,滴上半滴水，盖滴上半滴水，盖上盖玻片上盖玻片,油镜镜检。油镜镜检。 前往前往1、根据察看的球，杆菌的察看实况画表示图，各一图。2、用油镜察看时，为什么要求载玻片上加香柏油？3、思索题(4)影响显微镜