ABO血型正反定型

1、ABOB型正、反定型操作规程目的保证ABO血型鉴定准确,保证临床输血平安.适用范围XXX医院输血科责任具有专业技术的工作人员主要负责本院输血或备血标本的ABO血型鉴定但 只对该单份标本负责.相关文件试剂采购、保存和使用治理程序设备采购、使用治理程序消毒与清洁治理程序标本采集、运输、保存和报废治理程序紧急用血治理程序相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录实验原理ABO血型是根据红细胞外表存在的凝集原决定的.存在 A凝集原的称为A型, 存在B凝集原的称为B型.而血清中还存在凝集素.当

2、 A凝集原与抗A凝集素相遇 或B凝集原与抗B凝集素相遇时,会发生红细胞凝集反响.一般 A型血清中含有抗 B凝集素,B型血清中含有抗A凝集素,因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的 红细胞反响称为正定型,用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反响称为反定 型,以确定其ABO血型.仪器器械玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、 恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱.试剂抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准 红细胞、生理盐水.以上试剂均为有合格证件的正品.标本收集与处理1 .受检者血清：采集受检者静脉血 23ml,经1000r/min离心1

3、分钟或室温静 置1小时后取上清.2 . 25%勺受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血,用生理盐水制成25%红细胞盐水悬液备用,制备方法见本节质量限制和考前须知.3.标本出现中度以上溶血者,为不合格标本,不能用于检测. 实验方法与步骤血型的正定型试管法：、取2支试管,分别标上抗A和抗B;、制备待测标本25%的红细胞悬液取1支试管,参加2ml生理盐水,再加 入1滴待测标本红细胞,混匀备用；、在抗A管中参加2滴抗A标准血清,在抗B管中参加2滴抗B标准血清；、在抗A和抗B管中分别参加1滴已制备好的待测标本25%红细胞悬液；、混匀后,立即对称放入离心机中进行 1000r/min离心1分钟,或室温静置1

4、 小时,再轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先肉眼观察有无凝集现象,如内 眼不见凝集,应将反响物倒于玻片上,再以低倍镜检查.根据有无凝集现象判定结果如下.注意凝集强 度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现.国工9 1 A3G in空/定示苴用ABO 血型抗A标准血 清抗B标准血清A型十一B型一十.型一一AB型十十凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块,血清清楚透明.3十红细胞凝集成数小块,血清尚清楚.2十红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞1十肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞.士镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞.MF 混合凝集外观mixed field是指

5、镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细 胞仍呈分散分布.一 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布.血型的反定型试管法：、取3支试管,分别标上A、B和O;、在3支试管中分别参加2滴待测标本的血清；、将ABO标准红细胞轻轻地充分混匀后,在 A管中参加1滴A型标准红细胞,在B管中参加1滴B型标准红细胞,在O管中参加1滴O型标准红细胞；、混匀后,对称放入离心机中进行 1000r/min离心1分钟或3400 r/min离心15 秒;、取出后,先观察是否溶血溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染,再轻轻摇动试管,肉眼观察有无凝集现象,肉眼不易分辨的用显微镜观察；根据有无凝集现象判定结果如下.注意凝集强度,此

6、有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现ABO血型A型标准红细胞B型标准红细胞O型标准红细胞A型一十一B型十一一.型十十一AB型.一.一.一.凝集强度判断标准同ABO血型的试管法正定型质量限制和考前须知1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品,质量性能符合要求,且在有 效期内使用.试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签,使用后应及时置于28c专用冰箱中保存,以免细菌污染和变质而影响试验结果.试剂开封后有效期为 一周.2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品,质量性能符合要求, 且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和, 用生理盐水洗涤13次

7、,以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原,再制成25%勺红细胞悬液备用.试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人 的标签,使用后应及时置于28c专用冰箱中保存,以免细菌污染和变质而影响试验 结果.试剂开封或制备后有效期为一周.3、生理盐水启用后,有效期为二周.4、所有试剂在使用时,必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑 者,必须更换新的试剂进行检测.假设分型标准血清使用时间较长后,最好用的 ABO标准红细胞检查结果是否与的血型相符；假设分型标准红细胞使用时间较长 后,最好用的分型标准血清检查结果是否与的血型相符,以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误.5

8、、试管、滴管和玻片必须清洁枯燥,预防溶血.6、操作方法应按规定进行,一般应先加血清,后加红细胞悬液,以便容易核实 是否漏加血清.7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反响温度以4c为最强,但为了预防冷凝集 现象的干扰,一般仍在室温2024c内进行试验,37c可使反响减弱.8、离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果. 用试管法进行ABO血型的正定型时不能测出亚型如 Ax,需延长作用时间.9、在反定型试验中,如果受检者的血清或血浆与 O型标准红细胞产生阳性反响, 那么需要添加自身对照试验.如果自身对照试验为阳性,说明是自身冷凝集素导致.如 果自身对照试验为阴性,那么说明

9、被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外其它系统的抗体干扰,此时需做其它相关试验加以解决上述定型问题.10、对含有较多自身冷凝集素的受检者, 在使用标准血清进行正定型时往往被误 定为AB型,遇到此种情况,需用37c生理盐水洗涤受检者的红细胞 23次,以去除 吸附在红细胞上的冷凝集素,然后再鉴定血型.11、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别.对 于可疑结果,必须更换所用的试剂,重新检测.12、对于可能存在不完全抗原的时候,应在各反响中参加凝聚胺试剂,以检验不 完全抗原的存在.13、判断结果后应仔细核对、记录,预防笔误.14、25%T细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细

10、胞 3次,再根据下表进行红 细胞悬液的配制.悬液浓度%压积红细胞滴盐水滴2140(2ml)5116临床应用用于检验人的ABO血型归属血型鉴定的影响因素及解决方法准确的血型鉴定是临床平安、 有效输血的重要保证之一,但影响血型鉴定结果的 因素很多.如发现ABOE反定型结果不一致,应先重复做 1次试验.重复做试验时, 应严格执行操作规程,使用质量合格的试剂,并细心观察和解释试验结果,就可解决 明显的问题.对一些疑难问题必须做如下进一步研究：1、标本血标本的采集错误、稀释和溶血.另从受检者采集 l份新鲜血液标本,这样可 以纠正因污染或搞错样本造成的不合. 标本一般要求离体后尽快实验, 最长不能超过 3

11、天,每次输血后受血者和供血者的血标本应在 28c保存7天.患者的药物使用有时也对实验有一定影响,当受血者使用肝素治疗时,应使用 硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝集；如果受血者使用右旋糖酊、聚乙烯叱咯烷酮PVP等治疗,应注意将红细胞洗涤.受检者红细胞上抗原位点过少 如亚型或抗原性减弱见于白血病或恶性月中 瘤,以及类B或cisAB等.如疑为A抗原或B抗原减弱,那么可将受检红细胞与抗 一A或抗一B血清做吸收及放散试验,以及用受检者唾液作 A B、H血型物质测定只 对80% HA明泌型的人有用.如受检者为A型血而疑为有类B抗原时,可用以下 方法进行鉴别：1观察细胞与抗一A及抗一B的凝集强度,与抗一A的反响要比

12、与抗 一B的反响强,这种区别用玻片法作试验更为明显；2用受检者红细胞与自身血清 作试验,血清中的抗一B不凝集自身红细胞上的类B抗原；3检查唾液中是否有A、 B物质,如果是分泌型,可检出 A物质而无B物质；4核对患者的诊断,类B抗原 的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关.受检者血清中蛋白紊乱高球蛋白血症,或实验时温度过高,常引起红胞呈缗 钱状排列.如试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水 l滴.混和,往往可使缗钱 现象消失.注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞做试验, 以免使血清 中抗体被稀释.细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因.如发现多凝集现象,应考

13、虑由遗传产生的 Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或 产生机制不太明了的Tn受体所引起.多凝集红细胞具有以下特点：1能被人和许多 家兔的血清凝集；2能与大多数成年人的血清凝集,不管有无相应的同种抗体.3不被脐带血清凝集.4通常不与自身的血清凝集.5如有条件可用外源凝集素加以 鉴别.检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一B抗体,如丙种球蛋白缺乏症,老年人血 消中抗体水平大幅度下降等.如果试验结果未见凝集,应将细胞及血清试验至少在室 温和4 c放置30min,用显微镜检查核实.血清中有意外抗体,如自身抗一I,常引起干扰.用A1、A2、B、O红细胞及自 身红细胞检查受检者血清.如果疑心是抗一I

14、 ,用O型或AB3目合的脐血红细胞检 查.各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集.局部溶血时,可溶性血型物质中 和了相应的抗体.将红细胞洗涤数次,配成25啾理盐水细胞悬液,用抗一A、抗一B、 抗一Al,抗一A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息.对受检红细胞作直接抗 球蛋白试验,如结果呈阳性,表示红细胞已被抗体致敏.2、试剂运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效,造成配血错误.实验前进行试剂 外观、效价等工程质量限制.不同抗凝剂制备的标准红细胞质量也不同；另外,红 细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例不适当,使反响不明显,易误判为阴性反响.应依据要求正确配制红细胞浓度.分型血清效价太低、亲和力不

15、强,如抗一 A血清效 价不高,可将A亚型误定为O型、AB型误定为B型.实验前应进行试剂效价等工程质 量限制.3、冷凝集素在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中,冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交 叉配血不合的常见原因,尤其是在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而 导致出现假阳性.正常人血清中冷凝集素效价一般不高,且在4c以下时才有活性.但由于人免疫系统的差异,在恶性月中瘤或病原体感染后有时冷反响性自身抗体可异常 增高,造成溶血性贫血.这种冷凝集素效价在4 c可高于1000,用37c生理盐水洗涤 红细胞,操作时再置于37c水浴中轻轻摇动可以排除冷凝集素的干扰.4、自身免疫性溶血性贫血红细胞

16、被自身抗体强烈致敏后将干扰 ABO定型,且自身抗体的存在会导致交叉 配血不合,选择适宜的试验方法对红细胞上结合的抗体做放散处理,确定抗体的特异 性.如果抗体属于同种抗体,那么交叉配血时应选取该抗原阴性的献血者的血液.如果 该抗体无法确定特异性,那么交叉配血时要根据患者自身红细胞与自身血清的对照反响 选取较弱反响的献血者血液,由于自身抗体的干扰而发生ABO正反定型不相符时,可用37c45c生理盐水洗涤红细胞三次,或者用放散后的红细胞放散方法需不破 坏红细胞结构,血清定型那么可用洗涤或放散后的红细胞将血清中的自身抗体吸收后 再进行.5、弱凝集血型试验是抗原抗体反响,当患者红细胞上抗原异常或血清中存

17、在ABO血型以外的不规那么抗体时,可能会导致减弱的或缺少的凝集反响.抗原异常包括：亚型, 这种亚型红细胞抗原性较弱,可以通过亚型定型试剂来具体定型. 红细胞抗原形成 缺乏或敏感性降低,如新生儿、老年人及少数恶病质患者.鉴定血型时要注意正反定 型的结合,加用抗H和抗A, B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质, 必要时作吸收放散试验以确定.假设血清中存在不规那么抗体可在反定型用 O细胞加以鉴 定,有些亚型由于抗原的某些位点缺失,也会产生相对于缺失抗原位点的抗体,这些 抗体的产生有助于亚型的判定.6、细菌性凝集常见有类B凝集,A型或O型病人因大肠杆菌O86感染,从而使红细胞上获得 类B抗原

18、,能与抗B抗体发生凝集,表现为B或AB型.其不受温度影响,病情好 转类B凝集即消失.另外红细胞被细菌或细菌酶污染,红细胞上的 T抗原被激活, 与供血者中抗T抗体发生凝集.此种凝集在4c和37c之间随着温度的升高凝集程度 逐渐减弱,在37 c时最弱或消失.7、混合外观凝集现象出现混合外观凝集的情况时一般要核对标本,必要时可重新抽取血样.患者在近 期有过骨髓移植或输血史、胎盘出血和白血病等应在疾病恢复后再确定血型. 其他原 因如嵌合现象、A3亚型及Tn多凝集反响等在定型时可帮助正确判断血型.8、不规那么抗体及亚型血型试验是抗原抗体反响,当患者血清中存在 ABO型以外的IgM或IgG和IgM 混合型不规那么抗体时,必然会导致 ABO正反定型不一致.可通过测定唾液中的血型 物质来鉴定ABO血型.由于受检者红细胞上有弱抗原,且抗原表达性特别弱,在纸 片定型中很可能被错