初始污染菌检测ppt课件

1、初始污染菌检测初始污染菌检测参考规范参考规范 20192019版版 附录附录 微生物限制检查法微生物限制检查法ISO 11737-1:2019 Sterilization of medical devices ISO 11737-1:2019 Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 1: Determination of a Microbiological methods Part 1: Determination of a population of microorganisms on productspop

2、ulation of microorganisms on productsGB/T 20193.1 /ISO 11737-1:2019 GB/T 20193.1 /ISO 11737-1:2019 医疗器械的灭菌医疗器械的灭菌 微生物方法微生物方法 第第一部分：产品上微生物总数的估计一部分：产品上微生物总数的估计GB 15980-2019 GB 15980-2019 一次性运用医疗用品卫生规范一次性运用医疗用品卫生规范检测环境及检验量检测环境及检验量n应在环境干净度10000级下的部分干净度100级的单向空气区域内进展n普通供试品的检验量为310个独立包装的同批次供试品。见ISO 11737-

3、1:2019 A8.1实验资料及设备实验资料及设备n营养琼脂培育基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液n滤器、微孔滤膜孔径0.45微米，直径50mm、量筒、剪刀、镊子、培育皿n过滤安装、电子天平、压力蒸汽灭菌器、生化培育箱等主要步骤主要步骤采样采样供试液制备供试液制备培育培育菌落计数菌落计数供试液的制备供试液的制备n用？ml 氯化钠-蛋白胨缓冲液浸提？小时包括最内层包装的内壁n-所需供试液的用量和浸提时间需验证n处置方法：振动、冲洗、擦拭法、袋蠕动、超声、涡旋混合、搅拌举例举例振动振动n小型医疗器械可以投入无菌的自封袋中，参与缓冲液充分振动。n另外，用缓冲液冲洗内包装袋的内壁。并与产品缓冲液相混。

4、梯度稀释梯度稀释1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml供试液供试液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:1000转至培育基转至培育基n膜过滤法适用于微生物浓度较低的悬液n平板倾注适用于微生物浓度较高的悬液n平板涂布适用于微生物浓度较高的悬液n螺旋涂布薄膜过滤法薄膜过滤法培育培育n药典中的培育条件：n 细菌 30-35 48hn 霉菌、酵母菌 23-28 72hn 必要时，可适当延伸培育时间至5-7天菌落计数菌落计数n计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的反面直接计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的反面直接以肉眼用标志笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细以肉眼用标志笔点计，

5、以投射光衬以暗色背景，仔细察看，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。察看，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。n菌落特征：菌落特征：n 形状特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、形状特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色假设培育基中参与淡黄色假设培育基中参与0.1%TTC(氯化三苯基四氯化三苯基四氮唑试剂氮唑试剂)，菌落为红色，菌落为红色n 边缘整齐或不整齐，外表有光滑、粗糙，皱褶、突边缘整齐或不整齐，外表有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。起或扁平。n 大小差别很大。大小差别很大。计数方法的验证计数方法的验证回收率回收率n验证实验至少应进展3次独立的平行实验，并分别计

6、算各实验菌每次实验的回收率。nA 实验组 供试液+实验菌50100cfunB 菌液组 实验菌50100cfunC 供试品对照组 nD缓冲液对照组 缓冲液+实验菌50100cfun(A-C)/B70% nD/B70%菌落计数报告规那么菌落计数报告规那么平板法平板法n选取细菌、酵母菌平均菌落数在选取细菌、酵母菌平均菌落数在30300之间、霉菌平均菌落数在之间、霉菌平均菌落数在30100之间的稀释级作为报告菌落数的根据。之间的稀释级作为报告菌落数的根据。n1如只需如只需1个稀释级平均菌落数符合上述规定，那么将稀释级的菌落数个稀释级平均菌落数符合上述规定，那么将稀释级的菌落数乘以稀乘以稀 释倍数报告。

7、释倍数报告。n2如有两个相邻稀释级的平均菌落数在如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，那么先计算两之间，那么先计算两稀释级菌落数的比值。稀释级菌落数的比值。n 高稀释级的平均平板菌落数高稀释级的平均平板菌落数稀释倍数稀释倍数n 比值比值=n 低稀释级的平均平板菌落数低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数稀释倍数n 当比值当比值2时，那么以时，那么以2个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值2但不超越但不超越5时，那么以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比时，那么以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比值大于值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀

8、释级的菌落数等异常情，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明缘由再进展检查，必要时，应进展方法的重新验证。况时，应查明缘由再进展检查，必要时，应进展方法的重新验证。n3如各稀释级平均菌落数均在如各稀释级平均菌落数均在300以上，那么按最高平均菌落数乘以以上，那么按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，那么按最低平均菌以下，那么按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。落数乘以稀释倍数报告。n4如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于长，但平均菌落数小于1时，以时，以1