TM-073砷盐检查

1、检验方法文件编号: TM-073版本号: 01砷盐检查法页码: 8 /8生效日期:砷盐检查法起草人审核人审核人批准人部门QCQAQC质量管理部姓名饶涛黄祥彪汪大才邓志军签名日期分发部门：质量管理部QC1. 目的制订砷盐检查标准操作规程，规范砷盐测定操作。2. 范围适用于需进行砷盐检查的物料。3. 职责QC4. 操作内容4.1 简述4.1.1 砷盐检查法适用于药品中微量砷盐（以As计算）的限量检查。4.1.2 砷盐检查法中的第一法（古蔡氏法）用作药品中砷盐限量检查：第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）既可检查药品中砷盐限量，又可测定含量：两法并列，可根据需要选用。4.1.3 古蔡氏法是利用金属锌与

2、酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同一条件下定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定砷盐的限量。4.1.4 二乙基二硫代氨基甲酸银法是将生成的砷化氢气体导入盛有二乙基二硫代氨基甲酸银试液的管中，使之还原为红色胶态银，与同一条件下定量的标准砷溶液所制成的对照液比较，或在510nm波长处测定吸收度，以判定含砷盐的限度或测定含量。4.2 仪器与用具4.2.1 第一法（古蔡氏法）按药典规定。有机玻璃塞D和E的孔径应与导气管C内径一致，以免生成的色斑直径不同，影响比色的准确度：B磨口塞，C管顶端与D、E有机玻璃旋塞塞盖间应紧密吻合，以防

3、砷化氢泄漏。4.2.2 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）按药典规定。B磨口塞应密闭，以防砷化氢泄漏；与标准磨口塞B相连的导气管C一端长度应不低于80mm，便于装醋酸铅棉花达80mm，另一端长度应不低于180mm尖端内径不可超过1mm，以保证产生的砷化氢吸收完全；D管的标准管与样品管要一致，管内径，色泽，刻线要相同。4.3 试药与试液4.3.1 标准砷溶液精密称取105干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫

4、酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀即得（每1ml相当于1.0g的As）。4.3.2 碘化钾试液按药典规定，本液应临用新制。4.3.3 酸性氯化亚锡试液按药典规定，配成后3个月即不适用。4.3.4 乙醇制溴化汞试液按药典规定，应置棕色磨口塞玻璃瓶内，在暗处保存。4.3.5 溴化汞试纸取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。4.3.6 锌粒以能通过1号筛的细粒无砷锌为宜，如使用锌粒较大的，用量酌情增加，反应时间亦应延长为1小时。4.3.7 醋酸铅棉花取脱脂棉，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中，湿透后，沥去过多的溶液，并使之

5、疏松，在100以下干燥后，贮于磨口塞玻璃瓶中备用。4.3.8 二乙基二硫代氨基甲酸银试液按药典规定。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。4.4 操作方法4.4.1 第一法（古蔡氏法）4.4.1.1 标准砷斑的制备4.4.1.1.1 装置的准备取醋酸铅棉花适量（60-100mg）撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度为6080mm。用玻璃棒夹取溴化汞试纸1片（其大小能覆盖D顶端口径而不露出平面外为宜），置旋塞D顶端平面上，盖住孔径，盖上旋盖E并旋紧。4.4.1.1.2 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸

6、性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将准备好的导气管C密塞于A瓶置25-40水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。4.4.1.2 检查法按照该药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，即得。4.4.2 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）4.4.2.1 标准砷对照液的制备4.4.2.1.1 装置的准备 取醋酸铅棉花适量（80-100mg），撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度约80mm。精密量取二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml置D管中。4.4.2.1.

7、2 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将准备好的导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置25-40水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。4.4.2.2 检查法准备好C管装置，按照该药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察，比较，即得。必要时，可将所得溶液与标准砷对照液分别转移至1cm吸收池中，用分光光度计，在510nm波长处，以二

8、乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，分别测定吸收度。4.5 注意事项：4.5.1 所用仪器和试液等照本法检查，均不生成砷斑，或经空白试验至多生成仅可辨认的斑痕。4.5.2 新购置的仪器装置，在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪器装置依法制备标准砷斑，所得砷斑应呈色一致，同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。4.5.3 制备标准砷斑或标准砷对照液，应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中 应保持干燥及避光，并立即比较。标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。4.5.4 第一法（古蔡氏法）反应灵敏度约为0.75g（以As计），砷斑色泽的

9、深度随砷化氢的量而定，药典规定标准砷斑为2ml标准溶液（相当于2g 的As）所形成的色斑，此浓度得到的砷斑色度适中，清晰，便于分辨。供试品规定含砷限量不同时，采用改变供试品取用量的方法来适应要求，而不采用改变标准砷溶液取量的办法。检查。4.5.5 药品中存在的微量砷盐常以三价的亚砷酸盐或五价的砷酸盐存在，五价状态的砷生成砷化氢比三价砷慢，故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使五价砷还原为三价砷。4.5.6 如供试品中存在锑盐，将干扰砷盐检查，所以本法不适用供试品为锑盐的砷盐检查。但在药典规定的实验条件下，100g的锑存在不至于干扰测定。实验中加入氯化亚锡不仅有效地抑制锑的干扰，防止锑化氢与溴化汞

10、试纸作用生成锑斑或与二乙基二硫代氨基甲酸银试液反应，干扰砷盐检查，还可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀连续地发生，使产生的砷化氢气体一致，有利于砷斑的形成。4.5.7 供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生H2S气体，干扰实验，故用醋酸铅棉花吸收除去H2S；因此导气管中的醋酸铅锦花，要保持疏松、干燥，不要塞入近下端。4.5.8 制备溴化汞试液的滤纸的质量，对生成砷斑的色泽有影响，用定性滤纸，所显砷斑色调较暗，深浅梯度无规律；用定量滤纸质地疏松者，所显砷斑色调鲜明，梯度规律，因此必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。4.5.9

11、 锌粒大小影响反应速度，为使反应速度及产生砷化氢气体适宜，选2mm左右径的锌粒。反应温度一般控制在30左右，冬季可置温水浴中。如反应太快，宜适当降低反应温度，使碘化氢气体能被均匀吸收。4.5.10 如供试品为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将高铁离子还原为低价铁而除去干扰。4.5.11 有机药品中的砷盐检查可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸及其盐、氨基已酸与葡萄糖酸钙等，一般可不经有机破坏而直接依法检查砷盐；多数环状结构的有机药物，因砷与杂环分子可能以共价键结合，需先行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。有机破坏时，所有试剂的含砷量如超过1g，除另有规定外，对照标准液应取同量的试剂按供试品同

12、样处理，最后加入砷标准液一定量，与供试品所生成砷斑的颜色比较。4.5.12 如供试品为硫化物、亚硫酸盐或硫代硫酸盐等，则在酸性溶液中可生成大量硫化氢或二氧化硫气体，干扰检查；可加硝酸使氧化成硫酸盐以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐检查。4.5.13 在二乙基二硫代氨基甲酸银法中，需要加入一定量的有机碱以中和反应中的二乙基二硫代氨基甲酸，USPXX配制成0.5%二乙基二硫代氨基甲酸银的吡啶溶液，其缺点是吡啶有恶臭；中国药典2005年版采用含1.8%三乙胺和0.25%二乙基二硫代氨基甲酸银的氯仿溶液，呈色稳定性及试剂稳定性均好，低毒、无臭，与砷化氢产生的颜色在510nm波长处有最大吸收；如遇室温低，按

13、法操作，标准砷对照液不显色，可将D管置2540水浴加温使显色。4.5.14 二乙基二硫代氨其甲酸银试液在配制后两周内稳定。当供试液中含砷（As）0.757.5g时显色反应的线性关系良好，2小时内稳定，重现性好。操作时，由于砷化氢气体导入盛有准确5ml的二乙基二硫代氨基甲酸银试液中，在2540水浴中反应45min后，有部分氯仿挥发，比色前应添加氯仿于5.00ml，摇匀，比色。因二乙基二硫代氨基甲酸银试液带浅黄绿色，测吸收度时要用此试液作空白。4.6 记录与计算4.6.1 记录必须记录采用的方法，样品取样量，标准砷溶液取用量，操作过程，使用特殊试剂、试液的名称和用量，实验过程中出现的现象及实验结果

14、等。4.6.2 计算4.6.2.1 标准砷溶液浓度的计算：1mol的三氧化二砷质量为197.82g，含砷（As）274.92g，称取三氧化二砷0.132g溶于1000ml溶液中配成的贮备液，每1ml含As量为：274.920.1321000=0.1mg197.81000 贮备液定量稀释100倍后所得标准砷溶液，每1ml含As量为1g。4.6.2.2 砷限量计算进行限量检查时，取标准砷溶液2ml制成对照液，与供试品溶液在相同条件下处理比较砷斑或吸收液颜色的深浅，从而确定砷含量是否超过规定，砷限量可用下式计算：砷限量(%)=标准砷溶液体积(ml)标准砷溶液浓度(g/ml)供试品量(g)4.6.2.3 供试品取样量计算如已知砷限量P，取用标准砷溶液为V，标准砷溶液浓度C，求供试品取样量(g)。砷