常规实验所用溶液配方大全

1、常规实验所用溶液配方大全常规实验所用溶液配方大全 1.0.5mol/LEDTA 配制 组分浓度： 0.5mol/l EDTA， PH=8 配制量：500ml 配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500 ml烧杯中 (2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌 (3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH (4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8 (5)加dd H2O将溶液定容到500 ml (6)高温高压灭菌后，室温保存 2.NaOH溶液的配制 组分浓度：5 mol/l NaOH 配制量：100 ml 配制方法(1)称取固体NaOH20

2、克于容器中 (2)加入dd H2O定容到100 ml 3.100 mmol/l Tris-HCl的配制 组分浓度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4 配制量：250 ml 配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中. (2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解. (3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml (4)将溶液定容至250ml (5)用棕色瓶分装于4度冰箱中 (6)如使用，用水浴加热溶解. 4.氯仿-异戊醇的配制： 配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可 (2)储存于棕色玻璃瓶子中 (3)置于4度冰箱以便日后使用 5.去污

3、剂： CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性. EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA. 6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐. 7.氯仿异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳 水化合物等分开除去. 8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA. 9.硅珠悬浮液的配制 （1） 称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中. （2） 放入4冰箱备用. （3） 使用时先涡旋使其混合均匀 10. 10×TE，500ml

4、配制如下： 将100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。 11. 1×TE Buffer 组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配制量：500ml 配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存. 12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE PAGE操

5、作流程及注意事项： 1、涂胶 1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟. 2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟. 3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟. 2、封胶 1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管. 2） 溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出. 3） 用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡. 4） 吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶

6、流下） 3、灌胶 1) 用长细枪头透开加胶枪头 2) 从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡. 3) 插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡. 4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出. 5) 在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度. 6) 等待2小时，以便胶充分凝固. 4、吹孔 1） 向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米. 2） 拔梳子，小心平稳，均匀平衡. 3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样 1） 用细长专用枪加入DNA 0.5ul. 2）

7、 一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖. 3） 一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落. 4） 加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干. 5） 首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分. 6） 加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半，可用两个孔. 6、跑胶 1) 向两侧槽中加入粗制TBE，至U管线处. 2) 打开电源，稳压到120V 3) 电泳2h左右 4) 当样品跑到底部2cm处，关闭电源. 7、撬玻片 1）刀片不伸入过深.刀片平行于玻片，稍用力. 2）将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中，还有梳子. 3）清理琼脂胶，放于烧杯

8、中. 4）胶玻片放于盘中，银染. 13. 2、TBE电泳母液（10×）的配制 1） 分别称取54克Tris碱，27.5克硼酸，20ml 0.5mol/EDTA（PH=8.0） 2） 将各组分别加入1升烧杯中，用ddH2O定容到1升. 3） 在电泳时使用1倍工作液，按1：4与水混合. 4） 1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量. 5） 盛于玻璃瓶，在室温保存. 14. AgNO3的配制 量取AgNO3原液2500ul；将250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入胶玻片上. （AgNO3原液的配制：50ml 中含AgNO3 7.5g 浓度为0.15g/ml） 15溴化乙锭

9、（10mg/ml） 组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭 配制量 100ml 1称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。 2加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。 3将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。 4溴化乙锭最终工作浓度为0.5g/ml。 15. 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 17.10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L

10、的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 16. 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水

11、中使终体积为100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20 17. DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 18. TE（用于悬浮和贮存DNA

12、） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml 19. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）

13、: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成

14、小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩

15、尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100

16、mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮

17、存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

18、2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成

19、分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） 0.5mg/ml BSA（组分V）（可选） 水 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTP

20、s贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.

21、6g 固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水） 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反

22、应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（

23、Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.6