水质的细菌学检查

1、水质的细菌学检查一、目的要求一学习水质的细菌学检查法二了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性.二、根本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一.饮水是否符合卫生标准,需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定.大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌,由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、 无芽抱杆菌,它们在乳糖培养基中经37c培养24小时即能产酸、产气,所以常将其作为粪便污染的标志.饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水中大肠菌群数不得超过3个.三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白陈培养基、乳糖蛋白陈发酵管内倒置小管、三

2、倍乳糖蛋白陈发酵管内倒置小管、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管.四、实验内客一采取水样1、自来水：从学校各生活区取样.先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流12分钟后,用无菌空瓶接取水样.2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面10-15厘米深层水样.水样采取后应立即检验,不得超过4小时.二水中细菌总数测定1、自来水：稀释水样：原水样和10-1水样,用无菌移液管分别吸取1毫升原水样和10-1水样,分别注入二个无菌培养皿中.每皿各加13-15毫升已融化并冷却到45-50C的牛肉膏蛋白陈培养基,轻轻旋转,使培养基与水样充分混匀,待凝固后,将平板倒置于37.叵温箱

3、内,培养24小时进行菌落计数.制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导,具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的别离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的别离与测数2、池水、湖水或河水等.稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定,使水样培养后每个平板中的菌落数在30-300之间的的稀释度最为适宜.例如：取湖水稀释成10-1、10-2、10-3.每个稀释度作两个培养皿,并依上法倾入培养基制成平板,培养,计数.菌落计数方法：1先计算同一稀释度的平均菌落数.假设其中一个平板有较大片状菌落

4、生长时,那么不应采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数.假设片状菌落的大小不到培养皿的一半,而其余的一半菌落分布又很均匀时,那么可将此一半的菌落数乘2代表全平板的菌数,然后再计算该稀释度的平均菌落数.(2)首先选择平均菌落在30-300之间的平板,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,那么以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数(见表1中例1).(3)假设有两个稀释度的平均菌落数都在30-300之间,那么按两者菌落总数之比值来决定.假设其比值小于2那么应取两者的平均数；假设大于2那么取其中较小的菌落表一计算菌落总数方法举例例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之

5、比菌落数10-110-210-3111365164120r1600或1.6*10422760295461.638000或3.8*10432890271602.227000或2.7*1044无数46505135.1*105527115270或2.7*1026无数3051231000或3.1*104(三)用发酵法检查大肠菌群1、自来水：分三个步骤进行检查(1)初发酵试验：在2个装有50毫升三倍乳糖蛋白陈发酵管中,各参加100毫升水样,在10支装有5毫升三倍乳糖蛋白陈发酵管中,各参加10毫升水样.曰M匀后37c培养24小时.(2)平板别离： 经24小时培养后,将产酸产气及只产酸的发酵管,分别划线接种

6、于伊红美蓝平板上,于37c培养18-24小时,将符合下例特征的菌落的一部分,进行涂片、 革兰氏染色、镜检.a.深紫黑色,具有金属光泽的菌落；b.紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落；c.淡紫红色,中央色较深的菌落.(3)复发酵试验：经涂片、染色、镜检为革兰氏阴性无芽抱杆菌时,那么挑取该菌落的另一局部,再接种于普通浓度的乳糖蛋白陈发酵管中,每管可接种来自同一发酵管的同类型菌落1-3个.37c培养24小时,结果假设产酸产气,即证实有大肠菌群存在.证实有大肠菌群存在后,再根据发酵试验的阳性管数查表二,即得大肠菌群数.2.池水,湖水或河水等分别取湖水10-2、1.1的稀释液及原水样各1毫升,加到装有10毫

7、升普通乳糖蛋白陈发酵液试管中.另取10毫升和100毫升原水样,分别加到装有5毫升和50毫升三倍乳糖蛋白陈发酵液的试管中.以下步骤同上述自来水的平板别离和复发酵试验.总数(表1中例2及3).(4)假设所有稀释度的平均菌落数均大于乘以稀释倍数(表1中例4).(5)假设所有稀释度的平均菌落数均小于以稀释倍数(表1中例5)(6)假设所有稀释度的平均菌落数均不在平均菌落数乘以稀释倍数(表一中例6)300,那么应按稀释度最高的平均菌落数30,那么应按稀释度最低的平均菌落数乘30-300之间.WJ以最接近300或30的假设证实有大肠菌群存在,那么根据大肠菌群阳性管数查表三或表四即得每升水样中的大肠菌群数.表

8、二大肠菌群检数表接种水样总量300毫升100毫升2份,10毫升10分100毫升水量阳性管数、012每升水样中大肠菌群数每升水样中大肠菌群数每升水样中大肠菌群数0230表三大肠菌群检数表接种水样总量111.1毫升100毫升、10毫升、0.1毫升各1份接种水样量毫升每升水样中大肠菌群数1001010.1-2380表四大肠菌群检数表接种水样总量11.1毫升10毫升、1毫升、0.1毫升、0.01毫升各1份接种水样量毫升每升水样中大肠菌群数1010.10.01-23800五、实验报告内容一我校各生活区水样中,细菌总数每毫升多少？经大肠菌群检查每升水中含多少？水源被污染,出现什么情况？二在湖水或河水水样中

9、细菌总数及大肠菌群数是多少？不同区域取样有无区别,为什么？六、思考题一大肠菌群中的细菌种类一般并非是病原菌,为什么要选大肠菌群作为水源被污染的指标？二伊红美兰培养基中的哪些成分有助于我们鉴别大肠杆菌附录：所需培养基配方一、牛肉膏蛋白陈培养基：300ml/桌,用500ml三角瓶做牛肉膏3克蛋白陈10克NaCl5克琼脂20克自来水1000毫升PH7.2-7.4灭菌121C,30分钟二、乳糖蛋白陈培养液单倍200ml/桌,用500ml瓷缸子做蛋白陈10克牛肉膏3克乳糖5克NaCl5克1.6%澳甲酚紫乙酉!溶液1毫升将蛋白陈、 牛肉膏、 乳糖及NaCl加热溶解于1000毫升蒸储水中,调pH至7.2-7

10、.4.参加1.6%澳甲酚紫乙醇溶液1毫升,混匀,分装于有倒置杜氏小管的试管中.115c灭菌20分钟.、三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液：600ml/桌,用1000ml瓷缸子做上述培养液中成分各按三倍量配制,蒸储水仍为1000毫升.200ml/桌,用300ml三角瓶做10克10克2克20克1000毫升20毫升13毫升7.2-7.4115C,20分钟*为灭完菌再加四、伊红美兰培蛋白陈乳糖磷酸二氢钾琼脂蒸储水*2%伊红水溶液*0.5%美兰水溶液PH灭菌水质细菌学检查实验时间安排第一次：讲实验第二次：准备器皿、洗器皿、准备无菌水管、灭菌第三次：做培养基、采样、接种、初发酵实验第三次应在下午1时准时开始第四次：

11、平板计数、接种于伊红培养基中第五次：革兰氏染色、复发酵实验第六次：分析结果水质细菌学检查需要器皿共分六个组培养皿：18副/组,配铁桶2个/组试管架：1个/组能插入大试管的大试管：22支/组,配塞子小试管：5支/组,配塞子500毫升矿泉水瓶：2个/组150毫升三角瓶：4个/组,配塞子300毫升三角瓶：1个/桌,配塞子做伊红美兰培养基用500毫升三角瓶：1个/桌,配塞子做细菌培养基用100毫升容量瓶：2个/组灭菌接种水样用5毫升枪头：5支/组其中需灭菌3支1毫升枪头：6支/组全部灭菌50毫升量筒：1个/组指形试管：4支/组杜氏小管：22支/组瓷缸：1000毫升1个/桌500毫升2个/桌玻璃棒：2支/桌pH广泛试纸：1个/桌凉开水：1锅洗衣粉革兰氏染色盘：1套/桌所需试剂：实验室准备一份1NHC