氨基糖苷类药残留测定方法（四）

1、氨基糖苷类药残留测定方法（四） 5)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography， hplc) hplc常用于难挥发、强极性物质的分别检测，因其专一性强和敏捷度高，在药物检测中得到广泛的应用。ags水溶性好、极性大且分子量高，特殊适合于采纳hplc法检测。目前，利用液相色谱检测ags的办法主要有紫外检测法、荧光检测法、电化学检测法、蒸发光散射检测法、化学发光检测等。 a.紫外检测法(ultraviolet detector， uvd) a.紫外检测法(ultraviolet detector，uvd) 因为ags没有特征的紫外汲取生色基团，常按照

2、其分子中的活泼基团(如氨基和羰基)与衍生化试剂反应生成有紫外汲取的物质，再采纳uvd检测。 董晓庆等采纳柱前衍生化、hplcuvd检测鸡组织中链霉素的残留量。用沉淀蛋白质，ods-c18柱净化，1，1-萘醌-4-磺酸钠(nqs)柱前衍生化反应，hplc-uvd在252nm检测。流淌相为-醋酸盐缓冲液(ph3.3)-水(10+10+80， v/v)，流速0.3ml/min，柱温35。在200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml添加浓度，办法回收率分离为75%90%、70%86%、64%75%，cv均小于10%在肌肉、肝脏和肾脏中的lod分离为120ug/kg、123 ug/kg和218u

3、g/kg。 feng等建立了一种迅速分析血浆中痕量妥布霉素的hplc办法。采纳1-异硫代氰酸萘基酯(nitc)与血浆中的妥布霉素在70衍生化反应，加入/乙腈溶液消耗掉过量的衍生化试剂，缩短分析时光。衍生物用purospher star rp-18e色谱柱分别，流淌相为乙腈-水(50+50，v/v)，uvd在230nm检测。办法线性范围为0.939.34mg/l，lod可达0.23mg/l，回收率超过99%，日内rsd小于2.1%，日间rsd小于5.2%。fenelli等建立了牛奶和动物组织中庆大霉素的hplc-uvd测定办法。样品用kh2po4-na2so4溶液(ph8.8)提取，经spe柱净

4、化后，用(opa)衍生化，hplc-uvd在330nm处检测。庆大霉素的4种同分异构体分别良好，出峰位置没有干扰。牛奶和组织中庆大霉素的lod分离为0.6ug/kg和1ug/kg，cv分离为2.5%和8.1%，回收率超过90%。 b.荧光检测法(fluorescence detector， fld) ags本身不产生荧光，也需要衍生化反应后，才干采纳fld检测。 陈晓红等报道了蜂蜜中链霉素的hplc-fld检测办法。采纳50%三氯乙酸提取，在c18柱上以0.01mol/l1-庚烷磺酸钠+乙腈为流淌相分别，用氢氧化钠和nqs双试剂柱后衍生化，在激发波长263 nm和放射波长447nm下，用fld

5、检测，获得的回收率为87.9%93.8%。周萍等建立了蜂王浆中链霉素的残留分析办法。用高氯酸提取，经羧基柱和c18小柱的净化后，hplc-柱后衍生-fld检测。流淌相为20%乙腈水溶液加1.1g庚烷磺酸钠和0.052g 1，1-茶-4-磺酸钠，用乙酸调ph3.3；色谱柱为hypersil ods2(150mm×4.6mm，4um)；流速1.0ml/min；衍生剂为0.2mol/l naoh，流速0.4ml/min；柱温50，衍生温度50；检测波长为ex=263nm，em=435nm。该办法回收率在74.7%95.3%之间，办法敏捷度达到了5ug/kg。姜莉等用磷酸溶液提取鲜牛奶中的链

6、霉素，用苯磺酸阳离子交换柱和c18固相萃取柱净化，用0.01mol/l庚烷磺酸钠溶液溶解，hplc分别，柱后衍生，fld在激发波长263nm和放射波长435nm测定。办法线性范围为0.010.10mg/kg，回收率为78.3%80.2%，cv为7.4%12.4%；办法lod为0.005mg/kg。edder等开发了肉、奶、蜂蜜等动物源食品中链霉素残留的hplc测定办法。用高氯酸提取动物源食品中的链霉素，阳离子交换和c18柱固相萃取净化，离子对lc分别，nqs柱后衍生化，fld测定(激发波长为260nm，放射波长为435nm)。蜂蜜、牛奶、肉、肝和肾中的lod分离为0.005 mg/kg、0.0

7、3mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.1 mg/kg，loq分离为0.01mgkg、0.05mg/kg、0.05mg/kg、0.2mg/kg和0.2mg/kg；办法回收率超过80%。vinas等采纳离子对hplc分析了食品中链霉素和双氢链霉素残留。该办法采纳了一种新型的lc色谱固定相(具有酰胺基团和三甲基硅封端的配体)，有效避开了拖尾。以乙腈-10mmol/l戊磺酸(ph3.3)(6+94， v/v)为流淌相，等度洗脱，流速1ml/min；nqs柱后衍生，fld检测。链霉素和双氢链霉素的lod分离为7.5ug/kg和15ug/kg。该办法适用于蜂蜜、牛奶、鸡蛋、肝脏等食品基质

8、中链霉素和双氢链霉素的测定。posyniak等在检测猪肉、肝和肾中庆大霉素和新霉素残留时，提取物经c18固相萃取柱净化后，用9-芴基甲基氯甲酸酯举行柱前衍生化，反相hplc分别，fld检测，激发波长为260nm，放射波长为315nm。庆大霉素线性范围在0.11.0mg/kg之间，新霉素在0.21.0 mg/kg之间；lod分离为0.05mg/kg和0.10mg/kg，loq分离为0.1 mg/kg和0.20mg/kg；回收率分离为76%86%和77%83%。 c.电化学法(elctrochemical detector，ecd) 常用的ecd办法是脉冲电化学法(pulse electroche

9、mical detection，ped)，是一种无需衍生化过程可挺直检测的办法。ped在色谱分别阶段需在酸性环境下举行，而检测阶段需在高ph环境中，所以普通在柱后加入氢氧化钠等强碱性物质，将流淌相调至碱性。官斌等建立了阴离子交换色谱-脉冲安培检测分析牛奶中新霉素残留量的办法。采纳三氯乙酸沉淀蛋白，弱阳离子交换固相萃取柱富集净化，分析柱为carbopac pa10(250mm×4mmi.d.)，流淌相为10×10-3mol/l naoh溶液，流速0.5ml/min，工作电极为金电极，参比电极为ag/agc1，对电极为钛。该办法线性范围为10.0160.0ng/ml；在1016

10、0 mg/kg添加水平下，回收率为50.3%76.9%.braganoski等采纳hplc-ped办法，检测了脑脊髓中的丁胺卡那霉素。办法线性范围在0.064.0g/ml之间，loq达0.06ug/ml，回收率临近100%。 d.蒸发光散射法(evaporative light scattering detector， elsd) elsd已被应用于ags的检测，它与uvd或fld不同，其响应不依靠于样品的光学特性，任何挥发性低于流淌相的样品均能被检测，且不受其官能团的影响。megoulas等报道了采纳反相hplc-elsd检测农产品中卡那霉素a和b的办法。用spherisorb ods-2c18柱分别，流淌相为水-乙腈(60+40，v/v，含11.6mmol/l)，流速1ml/min。该办法对于卡那霉素a的线性范围为0.628ug/ml，r 0.9998，卡那霉素b的线性范围为436ug/ml，r 0.9994它们的lod分离为0.2ug/ml和1.4ug/ml。 e.化学发光检测(chemiluminescent detector， cld) serrano等采纳hplc-cld定量检测人血浆和尿液样品中的丁胺卡那霉素。血浆用乙醇/