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文档简介

1、实验七 丙酮酸含量的测定一、实验目的掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原理和方法。二、实验原理 植物样品中的组织液，用三氯乙酸去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与2,4 二硝基苯肼作用，生成丙酮酸 2,4 二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈樱红色， 其颜色可用分光光度计测量， 与已知丙酮酸标准曲线进行比较， 即可求得样品中 丙酮酸的含量。三、实验器材与试剂1、. 实验器材分光光度计；研钵；具塞刻度试管：20mLX8;容量瓶：100mL X2移液管：1mLX 15mLX4 ;量筒：10mLXl；离心机；天平；大蒜、大葱或洋葱2、试剂（ 1 ） 8%三氯乙酸 （当日配制置冰箱中备用 ）2）1.5mol/L 氢

2、氧化钠（3）0.1%2,4 二硝基苯肼：称取2.4 二硝基苯肼100mL溶于2mol/LHCI中配成100mL溶液，盛入棕色试剂瓶，保存于冰箱内。（4）丙酮酸钠四、实验操作步骤1. 丙酮酸标准曲线的制作:称取丙酮酸钠7.5mg于烧杯中，用8%E氯乙酸溶解，转入100mL容量瓶中，并 用8%E氯乙酸定容，此液为60卩g /mL的丙酮酸原液。取6支试管，按下表数据配制不同浓度的丙酮酸标准液:管？号123456丙酮酸原液量（mL00.61.21.82.43.08%三氯乙酸量（mL3.02.41.81.20.60丙酮酸浓度（卩g/mL）01224364860在上述各试管中分别加入1.0mL0.1%的2

3、,4 二硝基苯肼，摇匀，再加5mL1.5moI/L的氢氧化钠溶液，摇匀显色，在 520nm波长下比色。做标准曲线。2. 植物样品组织液的提取:称取植物样品（大蒜、大葱或洋葱）5g，于研钵中加入少许石英沙及少量 8%三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用8%E氯乙酸洗入100mL容量瓶中（沙留在研钵内），定容至刻度。静置30 min,取10mL匀浆液离心(4000r/min ) 10min,取上清液备用。3. 组织液中丙酮酸的测定取3mL上清液于一刻度试管中，加 2mL8三氯乙酸，力卩I.OmLO.1%的2,4 二硝 基苯肼溶液，摇匀，再加5mL 1.5mol/L氢氧化钠溶液，摇匀显色。在 520nm波 长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得丙酮酸的含量。五、结果处理样品中頁酮驗

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