细胞分子免疫学-欧盟印迹法检测ENA多肽抗体谱ppt课件

1、抗核抗体谱(IgG)检测试剂盒 -免疫印迹法 顺应症顺应症lSharp综合症混合性结缔组织病,MCTDl系统性红斑狼疮(SLE)l枯燥综合征(Sjoetrens syndrome)l进展性系统性硬化症PSS)l多肌炎/皮肌炎PM)临床意义临床意义l高低度nRNP抗体是Sharp综合症的标志，抗体滴度与疾病活动性相关；lSm抗体是散播性红斑狼疮的特异性抗体；lSS-A抗体与各类本身免疫性疾病相关，常见于枯燥综合征患者；lSS-B抗体仅见于枯燥综合征和散播性红斑狼疮女性患者；lScl-70抗体见于25%-75%的进展性系统性硬化症患者；lJo-1抗体见于多肌炎，常与肺间质纤维化相关。实验原理实验原

2、理核抗原的组成部分：组蛋白；DNA;可溶性核抗原：由于其可以溶解于PBS或NS中，故被称为可提取核抗原extractable nuclear antigen,ENA)目前曾经发现人体内有多种针对ENA的本身抗体，包括抗Nrnp,Sm,SS-A,SS-B,Scl-70和Jo-1等，总称为抗ENA抗体实验原理实验原理l试剂盒提供抗试剂盒提供抗nRNP 、 Sm、SS-A、SS-B、Scl-70和和Jo-1等抗原的人等抗原的人IgG本身抗体的检本身抗体的检测；试剂盒载片上每个反响区内固定了相应抗原；测；试剂盒载片上每个反响区内固定了相应抗原；l实验首先将样本血清与膜条温育，假设标本为阳性，那么其特异

3、性的实验首先将样本血清与膜条温育，假设标本为阳性，那么其特异性的IgG抗体将与相应抗体将与相应抗原位点结合；抗原位点结合；l采用酶标志的抗人采用酶标志的抗人IgG二抗进展第二步温育，假设膜条上已有结合的样本中的抗体，二抗进展第二步温育，假设膜条上已有结合的样本中的抗体，那么二抗可以在相应抗原位点结合标本中的抗体那么二抗可以在相应抗原位点结合标本中的抗体AP 碱性磷酸酶碱性磷酸酶 ；l参与酶底物显色，检测已结合的样本中的抗体参与酶底物显色，检测已结合的样本中的抗体 【 NBT/BCIP四唑硝基苯胺兰四唑硝基苯胺兰/5-溴溴-4-氯啶氯啶-磷酸盐，磷酸盐， 在蛋白转印膜阳性蛋白条带处原位构成蓝紫色

4、的化合物沉淀在蛋白转印膜阳性蛋白条带处原位构成蓝紫色的化合物沉淀) 】实验步骤：预备实验步骤：预备l一切试剂平衡至室温；l稀释酶结合物：样本缓冲液10倍稀释；l稀释清洗缓冲液：蒸馏水10倍稀释；l稀释实验样本血清：样本缓冲液10倍稀释。实验步骤：实验步骤：预处置预处置将检测膜条放入温育槽中，并在每槽中参与将检测膜条放入温育槽中，并在每槽中参与1.5ml样本缓冲液。样本缓冲液。5分钟室温温育第第1步：温育步：温育汲取槽内液体，在温育槽中分别参与汲取槽内液体，在温育槽中分别参与50ul已稀释已稀释1:10血清血清3 0 分钟室温温育清洗清洗用一次性滴管汲取已稀释清洗缓冲液用一次性滴管汲取已稀释清洗缓冲液1：10冲洗反响区冲洗反响区23次，并清洗槽，风干次，并清洗槽，风干第第2步：温育步：温育 在槽内分别参与在槽内分别参与50ul酶结合物。酶结合物。 30分钟清洗清洗用清洗缓冲液清洗膜条用清洗缓冲液清洗膜条3次，清洗槽。次，清洗槽。摇摆摇床温育第第3步：温育步：温育清洗槽，在槽内分别参与清洗槽，在槽内分别参与50ul底物液底物液10分钟终止终止汲取槽内液体，用蒸馏水清洗汲取槽内液体，用蒸馏水清洗3次，每次次，每次1.5ml判别结果判别结果目测或目测或EUROLINE软件软件室温温育清洗方法清洗方法l l 本卷须知本卷须知l试剂盒一切组分该当做潜在传染源处置。