荧光法测定水中硒

1、荧光法测定水中硒 一、目的和要求(1)了解荧光光度计的原理。(2）把握荧光分光光度计的操作办法。(3）学会用荧光法测定水中不同价态硒的含量。二、原理硒是人体及动植物生长所必须的微量元素，但过量的硒能引起中毒，如脱发、脱指甲等；而硒的缺乏则会导致生病。硒的测定办法无数，常用的有二氨基萘荧光法，该法挑选性好、敏捷度高、操作简便、精确，能测定总硒、+ 6价硒、十4价硒及十4价以下的无机硒和有机硒含量，最低检测限为0. 005g（硒）。在ph为1.5-2.0溶液中，2,3-二氨基茶挑选性地与4价硒离子反应，生成4,5-苯并苤脑绿色荧光物质，用环己烷萃取，其荧光强度与se4+含量成正比，可定量测定硒含量

2、。水样不经消解挺直测定出的硒为se4+；水样经混合酸消解后，可将十4价以下的无机硒化物和有机硒化物氧化至se4+，故测出的硒含量为4价及低于十4价硒的总量；若再加盐酸继续消解，则可将se6+还原成se4+，测出来的为总硒。三、仪器与试剂(1) 荧光分光光度计。(2) 25ml及250ml分液漏斗（活塞勿涂油）。(3）电热板。(4）水浴锅。(5) 100ml具塞瓶。(6) 5ml比色管。(7) 硒标准储备溶液。称取0. 1000g金属硒（se),溶于少量浓硝酸中，加入2ml高氯酸，在沸水浴上加热蒸去硝酸（(3-4h)，稍冷后加入约l0ml纯水及8. 4ml浓盐酸，继续加热2min，然后定容至10

3、00ml。此溶液1. 00ml含100. 0g硒，储于冰箱内备用。(8）硒标准溶液。取一定量的硒标准储备溶液，用0. lmol/l盐酸稀释，此溶液1. 00ml含0. 050g硒，于冰箱内保存。(9) 硝酸一高氯酸溶液（1:1)。硝酸与高氯酸均为优级纯。(10）盐酸溶液（l:4)。盐酸为优级纯。(11) 氨水（1:1)。(12) 0.02甲酚红指示剂溶液。(13) 混合试剂。称取l0g乙二胺四乙酸二钠于少量纯水中，加热溶解。冷却后，加入l0g盐酸羟胺，搅拌至溶解，加入l0ml 0. 02甲酚红指示剂溶液，用纯水稀释至200ml。(14) 混合试剂n。用纯水将混合试剂工稀释10倍。(15）精密p

4、h试纸。ph=0. 5-5. 0。(16) 0.1% 2, 3-二氨基萘溶液（此溶液需在暗室中配制）。称取l00mg2,3-二氨基萘c10h8 (nh2 )2 , dan，置于250ml磨口锥形瓶中，加入l00ml0. lmol/l盐酸，振摇至所有溶解（约15min后）。加入20ml环己烷，继续振摇5min，移入底部塞有玻璃棉（或脱脂棉）的分液漏斗中，静置分层后将水相放回原锥形瓶内，再用环己烷萃取多次（普通需5-6次），直到环己烷相的荧光强度最低为止，弃去环己烷相。将此纯化的水溶液储于棕色瓶中，加一层约l cm厚的环己烷以隔绝空气，于冰箱内保存。用法前再用环己烷萃取一次。常常用法以每月配制一次

5、为宜，不常常用法可保存一年。(17）环己烷。不得有荧光杂质，不纯时需重蒸后用法，用过的环己烷重蒸后可再用。四、试验步骤1总硒(1）消解。吸取5.0-20. 0ml水样（含0.005-0. 05g硒）及硒标准溶液(0. 05g/ml) 0ml、0. 10ml、0.30ml、0. 50ml、0. 70ml及1. 00ml分离于100ml磨口锥形瓶中，加纯水至与水样相同体积。沿瓶壁加入2. 5ml硝酸一高氯酸（(1：1)，摇匀。将锥形瓶（勿盖塞）置于电热板上加热至瓶内产生深厚的白烟，溶液由无色变为浅黄色（瓶内溶液太少时，色彩变幻不显然，以观看深厚白烟为准）即到尽头，立刻取下（注重：如消解未到尽头而过

6、早取下，会因荧光杂质未被分解而产生干扰，使测定结果偏高；但到达尽头还继续加热，将会造成硒的损失）。稍冷后加入2. 5ml）盐酸（1:4)溶液，继续加热至尽头。(2) 消解完毕的溶液放冷后，各瓶均加入l0ml混合试剂ii，摇匀，溶液呈桃红色，再用氨水（1：1)调至浅橙色。若加过量氨水，溶液呈黄色或桃红（微带蓝）色，需用盐酸（1：4）再调至浅橙色。此时溶液ph=1.5-2.0，须要时需用ph=0.5-5.0的精密试纸检验。(3) 在暗室内黄色灯光下，向上述各瓶内加入2ml 0. 1% dan溶液，摇匀，置沸水浴中加热5min后取出，冷却。向各瓶加入4. 00ml环己烷，加塞盖严，振摇2min，所有

7、溶液移入分液漏斗中，待分层后，放掉水相，将环己烷相由分液漏斗上口（先用滤纸擦整洁）倾入具塞试管内，盖严待测。(4) 荧光测定。用荧光分光光度计（激发光波长为376nm，放射光波长为520nm）或用荧光光度计如930型，其激光滤片为330nm，荧光滤片长为510nm（截止型）和530nm（带通型）组合滤片 测定荧光强度。(5) 绘制标准曲线，从曲线上查出水样中总硒含量。2. +4价无机硒吸取20-50ml水样（含0.005-0. 05g硒）及硒标准溶液（0. 05g/ml)0ml、0. l0ml、0. 30ml、0. 50ml、0. 70ml及1. 00ml于磨口三角瓶中，加纯水至与水样相同体积

8、。加入1ml混合试剂i，溶液呈浅黄色，加盐酸数滴，调至浅橙色。以下步骤同总硒测定。3. +4价以下的无机硒或有机硒操作步骤除水样消解至尽头时不加盐酸外，其余步骤同总硒测定。五、数据处理总硒、+4价无机硒、+4价及4价以下的无机硒和有机硒的浓度均按以下公式计算：c (g/ml）=m/v式中：c水样中所测价态硒浓度，g/ml;m从曲线上查得水样中所测价态硒含量，g;v水样体积，ml。六、注重事项(1) 本法样品预处理操作很重要。样品以硝酸一高氯酸消解不彻低时杂质荧光最高，若消解时光过长，硒损失很大。所以消解快到尽头时，需要注重观看深厚白烟的变幻，不要过多摇动瓶，当瓶内白烟分层滚动时，即到尽头，应立刻取下。(2) 硒与2,3一氨基萘必需在酸性溶液中反应，ph以1.5-2.0为最佳，ph过低时溶液易乳化，太高时侧定结果偏高。甲粉红指示剂有ph=2-3及ph=7.2-8.8两个变色范围，前者