实验二十四尿药法测定核黄素片剂消除速度常数.

1、实验二十四尿药法测定核黄素片剂消除速度常数、实验目的1. 熟悉尿药法在药物动力学实验中的应用。2. 掌握尿药法计算消除速度常数的方法。二、实验原理药物在体内过程是一个整体，吸收、分布、代谢、排泄等过程既有区别，又有 联系，观察一个方面的变化，常可间接地认识另一方面的情况，所以药物在体内的速度过程变化规律，既可用血药法来估算，也可用尿药法来估算。在多数情况下，尿药浓度高于血药浓度， 定量分析精密度好， 测定方法较易建 立，而且取样方便，受试者可免受多次抽血的痛苦。因此，在体内药物大部分以原 形从尿中排除条件下，通常可用尿药法估算消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。尿中原形药物的瞬时排泄速度，可

2、用下列微分式表示：Xu=KeX（ 1）dtKe为表观一级排泄速度常数，Xu为t时尿中原形药物的累计排泄量， 时间体内存有的药量。在静脉给药时，体内药量的经时过程可由下式表示：(2)X=Xoe-ktXo为给药剂量，K为表观一级消除速度常数。将（2）式中X值代入（1）式后得：数=2dt两边取对数得：logdXu . V Kt/ 八=logK eXo- （ 4） dt2.303由（4）式可见，原形药物排泄速度的对数对时间作图为一直线，其斜率为K2.303 与血药浓度的对数对时间作图所求的斜率相同。 消除速度常数。若口服给药，（4）式适用于静脉给药后求算则体内药量经时过程可由下式表示:KaXoF （

3、e-Kt e-Kat）Ka KKa为表观一级吸收速度常数。尿中原形药物的瞬时排泄速度可用（X=5）式代入（1）式得:dXu_ KeKaFXo -Kt _ a一(e edt Ka K当Ka>K, t充分大时，则e-kat7 0, (5)式简化为:-Kat )(6)dXu = KeKaFXo e-Kt drKa K两边取对数得：(7)logdXu =log KeKaFXo _ Kt "dTKa K2.303(8)对t作图，可得到一条二项指数曲线，从K。由上述关系式可见，若以logXu/dt其后段直线的斜率可求出一级消除速度常数通过实Xu,贝 yK会出由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变

4、化率是不可能用实验方法求算的，验只可求出平均排泄速度，设在一段时间间隔t内药物的排泄速度量为平均排泄速度为Xu，这样（4 ）或（8 ）式可改写如下：tlogXu -logKeXo K t 中 t2.303(9)logXu . KeKaXoFK +-log t 中(10)tKa K 2.303由于实验中采取平均排泄速度代替瞬时排泄速度，求得的消除速度常数现一些误差。但若以恒定的时间间隔集尿，其时间间隔不大于一个药物的半衰期时,则仅发生2%M内的偏差。（一）服药及尿样收集1.倒掉。2.三、实验内容与操作服药前一天收集 24小时尿液，每次收集尿液后量体积，取10ml保留，其余临服药前排空小便。早餐后

5、立即服用核黄素片三片（5毫克/片），用温水吞服不嚼碎，记录服药时间。4. 按药片服下后的第 2、4、6、& 10小时收集尿液，用量筒取并记录尿液体积，然后，将尿液倒入盛有0.2毫升冰醋酸的刻度试管内至20毫升，摇匀，于阴凉避光处保存。5. 注意点：（1）每次收集尿液后饮 200毫升左右水以维持尿量。（2）每次大便时收集小便，切勿损失。（3）试验期间（包括服药前一天）控制食谱，不能吃含有核黄素的食物，如：蛋类、牛奶、麦乳精、奶糖等。并不得服用含有B族维生素的药品。（二）尿液中核黄素含量的测定1. 原理：可以由加入保的差值，来计算尿液核黄素的异咯嗪环上具有活泼的双键，能接受和放出氢原子，在

6、保险粉（连 二亚硫酸钠）的作用下，能还原为无色双氢核黄素，利用这一特性， 险粉前后二次测得的吸收度 （核黄素在波长444nm处有吸收） 中核黄素的含量。2. 方法（1）标准溶液的制备精密称取105 C干燥2小时的核黄素对照品 50毫克于500毫升容量瓶中，加 0.02mol/L醋酸液稀释至300毫升，置水浴加热溶解后，放冷至室温，用0.02mol/L 醋酸液稀释至刻度， 摇匀即得，每1毫升中含核黄素100微克，然后加入甲苯覆盖 上面，置凉暗处保存。（2）标准曲线的制备精密吸取标准液 0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0毫升分别置于10毫升容量 瓶中，用酸化蒸馏水（每 100毫升蒸馏水

7、中含1毫升冰醋酸）稀释至刻度，摇匀。 以酸化蒸馏水作空白，用721或722型分光光度计，在 444nm波长处测定吸收度，然后，在每管中各加保险粉约3毫克，摇匀。在一分钟内再次测定吸收度。两次测定值之差，即为核黄素的吸收度，以此值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.111（3）尿样中核黄素含量测定尿样测定照标准曲线制备项下的方法。从“以酸化蒸馏水作空白”起，依法测 定吸收度，以两次测定值之差，从标准曲线上查出尿液中核黄素的含量。以上操作步骤，均须注意避光。四、实验结果与讨论1.原始记录服药后尿液收集与测定数据表1空白尿药测定数据A （未加保险粉）A （加保险粉）A-A2C空白尿体积（毫升）：空白尿中排泄核黄素的总 Xu量: 平均每2小时排泄核黄素的ug数：表2尿样的原始记录试管号集尿时刻（hr）集尿时间间隔（hr）尿量（ml）空白12345表3尿药测定记录试管号A1 （未加保险粉）A2（加保险粉）A1-A2C空白12345表4尿药法动力学分析记录试管号集尿时间间 隔t）中点时间（t中） Xu(mg平均排泄速度（ Xu/ t）log Xu t空白123452.绘制尿药排泄速率二项指数曲线。3.从二