食源性微生物快速检测研究现状（二）

1、食源性微生物快速检测研究现状（二） 1.免疫荧光技术 免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标志在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下展现一种特异性荧光反应,可用来对、和单核细胞增生李斯特菌等举行迅速检测。该技术的主要特点是特异性强、敏感性高、速度快,但还存在不足,如非特异性染色问题尚未彻低解决,结果判定的客观性不足,技术程序比较复杂。 2.酶联免疫吸附技术 酶联免疫吸附技术是将抗原或抗体吸附于同相载体,在载体上举行免疫酶染色。底物显色后,通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。它结合了免疫荧光法和发射免疫测定法两种技术的优点,具有可定量、反应

2、敏捷精确、标志物稳定、适用范围宽、结果推断客观、简便彻低、检测速度快以及费用低等特点,可同时举行上千份样品的分析。 3.酶联荧光免疫吸附技术 酶联荧光免疫分析技术将酶系统与荧光免疫分析结合起来,在一般酶免疫分析的基础上用抱负的荧光底物代替生色底物,可提高分析的敏捷度和增宽测量范围,削减试剂的用量。酶放大技术、固相分别及荧光检测三者的联合将成为荧光免疫分析中最敏捷的办法。 4.免疫磁珠分别技术 免疫磁珠分别技术是将磁性微球与免疫化学技术结合起来的一种技术。该技术是先用抗体包被的磁珠与样品混合,再用一个磁场装置收集磁珠。该技术可迅速从食品成分中分别出靶细菌,克服了挑选性培养基的抑制作用问题。据报道

3、,用免疫磁珠分别技术从乳及乳制品、肉类和蔬菜中分别出沙门菌,其检测限为每克1×102个细菌。假如和其他检验办法相结合,则可数倍地提高分别效率和检测限。 5.免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以微孔滤膜为载体包被已知抗原或抗体,加入待检标本后,经滤膜的毛细管作用或渗滤作用使标本中的抗原或抗体与膜上包被的抗体或抗原结合,再用胶体金结合物标志而达到检测目的。显色程度与抗原含量成正比,因而用于定性或半定量的迅速免疫检测办法中,其特点是敏捷度和特异性都较高,且操作简便、迅速、结果精确,不需任何仪器设备,易于判读,几分钟就可用肉眼观看到色彩鲜亮的试验结果,并可保存试验结果。目前已有特地用来检测食品

4、及环境中沙门菌抗原的商品沙门菌检测卡。 6.免疫印迹技术 免疫印迹技术分3个步骤:第一,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(sds-page),将蛋白质抗原按分子大小和所带电荷的不同分成不同的区带;其次,电转移,目的是将凝胶中已分别的条带转移至硝酸纤维素膜上;第三,酶免疫定位,目的是将前两步中已分别,但肉眼不能见到的抗原带显示出来。将印有蛋白抗原条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标志的其次抗体反应后,再与能形成不溶性显色物的酶反应底物作用,终于使区带染色。该办法综合了sds、page的高辨别率及酶联免疫检测技术(elisa)的高敏感性和高特异性,是一种有效的分析手段,在蛋白质化学中应用广泛,既

5、可用于分析抗原组分及其免疫活性,也可用于疾病的诊断。 (六)分子生物检测技术 1.分子杂交技术 分子杂交技术是指利用核糖核酸(rna)和脱氧核糖核酸(dna)可以和特定微生物的核酸相结合,来诊断和鉴别微生物的一种技术。该技术可以解决抗体检测的特异性问题,但需要相对大的样本量,才干获得明确的结果,所以在食品微生物方面主要是利用琼脂平板上的细菌菌落举行杂交。 2.pcr技术 聚合酶链式反应(pcr)是近十多年来应用最广的分子生物学办法,在食源性致病菌的检测中均是以其遗传物质高度保守的核酸序列设计特异引物举行扩增,进而用凝胶电泳和紫外核酸检测仪观看扩增结果。其中,依靠pcr的dna指纹图谱技术、多重

6、pcr检测技术及实时荧光定量pcr技术等应用最为广泛。 (1)依靠pcr的dna指纹图谱技术 依靠pcr的dna指纹图谱技术是通过各种改进的pcr技术,使目标微生物的核酸经扩增后,产生多条dna扩增片段,通过统计分析找出某种微生物的特征条带,举行区分鉴定。 (2)随机引物扩增dna多态性(rapd)技术 rapd技术主要用于不考虑微生物核酸精确序列的状况下,比较微生物间的dna指纹图谱差异,用于细菌种间的鉴定,louie等比较了核酸分型技术、rapd技术和脉冲场凝胶电泳技术用于李斯特菌的分型鉴定,结果显示后两种办法效果较好。 (3)基因内重复性全都序列(eric)的扩增 eric片段是存在于肠

7、道细菌核酸中的重复dna序列,分布在细菌染色体的不同位点上且以不同的距离分隔。因此,以这些重复的dna片段作为pcr扩增时引物的结合位点,使其被分隔的片段大量扩增,在凝胶电泳上形成一系列的条带,从而区别不同的肠道细菌。该办法引用的引物序列固定,结果的重复性更好。 (4)多重pcr(m-pcr)技术 mpcr是指在同一个反应体系中,加入多对特异性引物,假如存在与各引物对特异性互补的模板,即可同时在同一反应管中扩增出一条以上的目的dna片段。mpcr技术的建立,实现了多种食源性致病菌的同时检测。 3.基因芯片技术 基因芯片是指根据预定位置固定在同相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵列。其检测致病菌原理为:挑选细菌的共有基因(16s rdna、23srdna及eric)作