阿奇霉素片方法验证

1、一. 概述1有关物质1.1 照高效液相色谱法（通则0512）测定1.2 色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相 A为磷酸盐 缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%勺磷酸溶液调节pH 值至8.2）-乙睛（45： 55）,流动相B为甲醇，柱温为30c （必要时 适当调整）；按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟 1.0ml,检测 波长为210nm取杂质S和杂质A对照品各适量，加上述稀释液溶解并稀释制成 每1ml中各约含0.05mg的溶液，作为杂质S和杂质A对照品溶液； 另取阿奇霉素系统适用性对照品（含杂质R杂质Q杂质J、杂质I、 杂质H阿奇霉素和杂质B）适量，加上述对照品溶液溶解

2、并稀释制 成每1ml中约含10mg的溶液，作为系统适用性溶液；精密量取对照 溶液10ml,置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为灵敏 度溶液，取系统适用性溶液和灵敏度溶液各 50口,分别注入液相色 谱仪，灵敏度溶液主成分峰峰高的信噪比应大于10,系统适用性溶液色谱图中各峰之间的分离度均应大于 1.2,阿奇霉素峰的保留时间 应在30 40分钟之间。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0752535955649556575257175251.3测定法取本品细粉适量，加稀释液磷酸二氢镂溶液（称取磷酸二氢镂 1.73g,加水溶解并稀释至1000ml,用氨试液调节pH值至10.0 

3、7;0.05） -甲醇-乙睛（7: 7: 6）使阿奇霉素溶解并稀释制成每1ml中含阿奇 霉素10mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1 ml, 置200 ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 精密量取供试品溶液和对照溶液各 50区l ,分别注入液相色谱图仪， 记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰， 杂质B峰面积不得大 于对照溶液主峰面积的4倍（2.0%）,杂质H与杂质Q按校正后的峰 面积计算（分别乘以校正因子 0.1、0.4）不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0%）,其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积 的2倍（1.0%）,各杂质峰面积的和按校正后的峰

4、面积计算不得大于 对照溶液主峰面积的8倍（4.0%）。2溶出度2.1 照溶出度与释放度测定法（通则 0931第二法）测定。2.2 取本品，以磷酸盐缓冲液（pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 6000m1,加盐酸约40ml,调节PH®至6.0 ± 0.05）900ml为溶出介质， 转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液适量，滤过， 精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉 素0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿奇霉素对照品适量，精密 称定，加适量乙醇（每2mg约加乙醇1ml）使溶解，用溶出介质定量 稀释制成每1ml中约含0

5、.2mg的溶液，作为对照品溶液。照含量测定 项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每片的溶出量。 限度为标示 量的75%,应符合规定。3含量3.1 照高效液相色谱法（通则0512）测定。3.2 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%勺磷酸 溶液调节pH值至8.2）-乙睛（45： 55）为流动相；检测波长为210nm 取阿奇霉素系统适用性试验对照品适量，加乙睛溶解并稀释制成每 1ml中含10mg的溶液，取50/注入液相色谱仪，记录的色谱图应 与标准图谱一致。3.3 测定法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约

6、相当于阿奇霉素0.1g）,加乙睛溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿 奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取 50 “注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿奇霉素对照品适量，同法 测定。按外标法以峰面积计算，即得。4.工艺处方组成规格：0.25g物料名称基准处方1000片阿奇霉素250g糊精20g低取代羟丙纤维素25g微晶纤维素69.5g竣甲淀粉钠20g硬脂酸镁8g聚维酮K308g合计（干物质）400.5g5、仪器基本情况:设备名称XXXXX设备编号XXXXX型 号XXXXX出厂编号XXXXX出厂日期XXXX安装位置XXXXXX生产厂家XXXX供货厂家XXXXXX6.相关术语：6

7、.1 准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率（%表示。回收率限度应在98%- 102炕间。6.2 精密度系指在规定的条件下同一份均匀的供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标 准偏差表示。6.3 线性系指在设计的测定范围内，测定结果与试样中被测物的浓度 直接呈比例关系的程度。6.4 范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。6.5 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。6.6 耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受 程度。二.验证目的通过验证以确认所采用的方法适合于阿

8、奇霉素片的测定。 根据 样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据 验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行阿奇霉素片检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。三.验证依据中国药典2015年版二部中国药典2015年版四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则四.参考文件1、验证管理规程2、验证总计划3、SIL-20A高效液相色谱仪操作维护保养规程5、变更控制规程6、偏差控制规程5 .验证职责6 .验证步骤1 .阿奇霉素片含量分析方法验证1.1 系统适应性试验1.1.1 色谱条件固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色

9、谱柱（C8）； 检测器：紫外检测器，检测波长 210nm 流动相：磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20% 磷酸溶液调节PH值至8.2）-乙睛=（45: 55）流速：1.0mL/min。柱温：30c进样量：50 w L。照高效液相色谱法（通则0512）测定。1.1.2 系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约20mg加乙睛2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作为系统适用性试 验溶液。1.1.3 取系统适用性试验溶液50 pL注入液相色谱仪。1.1.4 判定标准：记录的色谱图应与标准图谱一致。1.2 阿奇霉素片含量分析方法线性验证1.2.1 溶液配制1.2.2 流

10、动相配制以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L 磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH值至8.2 ）-乙睛（45 ： 55）为流动相1.2.3 处方量辅料配制精密称定糊精约200mg低取代羟丙纤维素约250mg微晶纤维 素约695mg竣甲淀粉钠200mg硬脂酸镁80mg聚名t酮K30 80mg 混合。 此混合辅料约为10 片阿奇霉素片（ 2.5g） 所需的辅料共约1505mg。1.2.4 样品溶液配制精密称取阿奇霉素对照品约8mg 、 9mg 、 10mg 、 11mg,12 mg，置 10ml 量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 按 80%、 90%、 100%、 110

11、%、 120%的倍数稀释，加乙腈配置成浓度为0.8mg /ml 、 0.9mg /ml 、 1mg/ml、 1.1mg /ml 、 1.2mg /ml的溶液。1.2.5 测定精密量取经微孔滤膜过滤后各不同浓度稀释液50屋，注入液相色谱仪，每个样品进样2 次，记录色谱图。1.2.6 判定标准：阿奇霉素在0.8 mg /ml 至 1.2mg /ml 的浓度范围内，阿奇霉素峰面积成线性且相关系数RA 99.8%。1.3 阿奇霉素片含量分析方法精密度验证1.3.1 流动相配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。1.3.2 样品溶液配制取阿奇霉素片（XXXXfe产）10片，研细，精密称取样品适量（约

12、相当于阿奇霉素0.1g ）置100ml量瓶中，加乙睛溶解并定量稀释制 成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶 液； 1.3.3 测定精密量取50屋注入液相色谱仪，记录色谱图，连续6次，得到拉 呋替丁峰面积。1.3.4 判定标准：峰面积的 SeiW2.0%。1.4 阿奇霉素片含量分析方法准确度验证1.4.1 流动相配制、处方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。1.4.2 样品溶液配制精密称取阿奇霉素对照品约 8mg、10mg、12 mg,置10ml量瓶中， 乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀， 作为对照品溶液。按 80%、100%、 120%的倍数稀释，加乙腈配置成

13、浓度为0.8mg /ml 、 1mg/ml、1.2mg /ml 的溶液。1.1.3 测定精密量取50屋 注入液相色谱仪，记录色谱图，得到阿奇霉素峰面积。 通过线性方程计算阿奇霉素浓度。用测得浓度和实际浓度之比计算回收率。1.1.4 判定标准：回收率限度应在98%-102脸间，回收率的SeiW2.0%。1.5 阿奇霉素片含量分析方法范围验证1.5.1 数据记录及结果计算依据 1.2 线性， 1.3 精密度，1.4 准确度，确定高效液相色谱法符合中国药典2015 版阿奇霉素峰含量的范围一般为测定浓度的范围。1.5.2 判定标准：含量的范围一般为测定浓度的80%? 120%。1.6 阿奇霉素片含量分

14、析方法专属性验证1.6.1 流动相配制、处方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。1.6.2 溶液配制1.6.2.1 供试品溶液：取阿奇霉素片（XXX双产）10片，研细，精密称取样品适量（约相当于阿奇霉素0.1g ）置 100ml 量瓶中，加乙睛溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；1.6.2.2 精密称取阿奇霉素对照品（约25mg） ，置25ml 量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。1.6.2.3 空白溶液：取乙腈作为空白溶液。1.6.2.4 阴性溶液：按照阿奇霉素片配方，加入处方量混合辅料60.2mg,置100ml量瓶

15、中，加乙睛溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过 （0.45um微孔滤膜），滤过，续滤液，作为阴性溶液。1.6.3 测定精密量取经微孔滤膜过滤后的供试品溶液、对照品溶液、空白溶液、阴性溶液各50区l ,注入液相色谱仪，每个样品进样 2次，记录色谱图。1.6.4 判定标准：阿奇霉素对照品溶液与样品溶液主峰保留时间一致，空白溶液与阴性溶液在主峰保留时间处应为平直基线，无吸收峰。1.7 阿奇霉素片含量分析方法耐用性验证1.7.1 改变流动相比例1.7.1.1 色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18） ； 检测器：紫外检测器，检测波长210nm； 流动相： 磷酸盐缓冲液（ 0.05mol/L 磷酸

16、氢二钾溶液，用 20%磷酸溶液调节PH值至8.2）-乙睛=（40: 60） 流 速： 1.0mL/min。 柱 温：30进样量：50 w L。照高效液相色谱法（通则0512）测定。1.7.1.2 系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约20mg加乙睛2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作为系统适用性试 验溶液。1.7.1.3 取系统适用性试验溶液50区L注入液相色谱仪。1.7.1.4 判定标准：在改变流动相比例后，记录的色谱图应与标准图 谱一致。2. 阿奇霉素片溶出度分析方法验证2.1 阿奇霉素片溶出度分析方法线性验证照溶出度与释放度测定法（ 通则 0931 第二法及高效液相色

17、谱法测定法测定 ）2.1.1 溶液配制2.1.1.1 取磷酸盐缓冲液（ pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液6000ml，加盐酸约40ml,调节PH值至（6.0 ±0.05）900ml为溶出介质。2.1.1.2 样品溶液配制分别称取阿奇霉素对照品约2.4 mg、 2.7 mg、 3.0 mg、 3.3mg、1.1.1 ,精密称定，置10ml的量瓶中，加乙醇12ml使阿奇霉素溶解，再加溶出介质稀释至刻度，滤过，分别制成含阿奇霉素浓度约为0.24mg /ml 、 0.27mg /ml 、 0.3mg/ml 、 0.33mg /ml 、 0.36mg /ml 的溶液。1.1.2

18、 测定以溶出介质作为空白试验；照高效液相色谱法，取供试品溶液在210nm的波长处测定峰面积 A,记录色谱图。（图谱附后）1.1.3 判定标准：阿奇霉素片在0.24mg /ml 至 0.36mg /ml 的浓度范围内，阿奇霉素溶出度峰面积成线性且相关系数RA 99.0%。2.2 阿奇霉素片溶出度分析方法精密度验证2.2.1 样品溶液配制取阿奇霉素片1片（XXXX双产），用磷酸盐缓冲液（pH6.0）（0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液6000ml,加盐酸约40ml,调节PH值至（6.0± 0.05）900ml 为溶出介质。照溶出度与释放度第二法（通则0931）测定，转速为每分钟100 转，

19、依法操作。经45 分钟时，在浆叶顶端至液面中心，距溶出杯内壁10mm处取溶液10 ml,滤过，作为样品溶液。2.2.2 测定取供试品溶液在210nm勺波长处测定峰面积A,记录色谱图。连 续检测6次，得阿奇霉素峰面积，计算RSDt。2.2.3 判定标准：阿奇霉素片溶出度溶液峰面积的 SeiW2.0%。2.3 阿奇霉素片溶出度分析方法耐用性验证2.3.1 样品溶液配制取阿奇霉素片1片（XXXXXXk产），用磷酸盐缓冲液（pH6.0）（0.1mol/L磷酸氢二钠溶液 6000ml,加盐酸约 40ml,调节 PH值至（6.0 士0.05）900ml 为溶出介质。，照溶出度与释放度第二法（通则0931）

20、测定，转速为每分钟100 转，依法操作。经45 分钟时，在浆叶顶端至液面中心，距溶出杯内壁10mm处取溶液10 ml,滤过，作为样品溶液。2.3.2 测定样品溶液，在室温下放置，分别于0、 1、 2、 3、 4、 5、 6小时精密样品溶液，按含量测试方法，在 210nm的波长处测定峰面积 A2.3.3 判定标准：溶出度溶液6小时内溶液稳定，阿奇霉素片溶出度溶液峰面积的RS比2%2.4 阿奇霉素片溶出度分析方法准确度验证2.4.1 处方量原辅料配制处方量50%M辅料：精密称定阿奇霉素原料药 125mg混合辅料75.3 mg ,混合。处方量80%M辅料：精密称定阿奇霉素原料药 200mg混合辅料1

21、20.4 mg,混合。处方量100%原辅料：精密称定阿奇霉素原料药250mg、 混合辅料150.5 mg,混合。2.4.2 样品溶液配制分别将处方量50%、 80%、 100%原辅料置溶出杯中，用磷酸盐缓冲液 （ pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液6000ml， 加盐酸约40ml，调节PH值至（6.0 士 0.05）900ml为溶出介质。，照溶出度与释放度第二法（通则0931）测定，转速为每分钟100转，依法操作。经45分钟时，在浆叶顶端至液面中心，距溶出杯内壁10mmt取溶液10 ml,滤过 , 作为样品溶液。每个浓度水平配制3 份。2.4.3 测定按含量测试方法，在210nm

22、的波长处测定峰面积 A2.4.4 判定标准：回收率应为标示量的95%-105%之间，回收率的Sel W2.5%。3. 阿奇霉素片有关物质分析方法验证3.1 系统适用性实验3.1.1 色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18） ； 检测器：紫外检测器，检测波长275nm； 流动相：0.5mol/L醋酸镂（用冰醋酸调节PH至6.5）甲 醇乙腈（70： 30： 30） 流速：1.0mL/min 。 柱温：35 进样量：20 wL。3.1.2 测定方法按高效液相色谱法（通则0512）测定。3.1.3 溶液配制取阿奇霉素系统适用性对照品约 20mg加乙睛2ml溶解，制成每 1ml中含10mg

23、的溶液，作为系统适用性试验溶液。3.1.4 取系统适用fi试验溶液50M注入液相色谱仪，记录色谱图。3.1.5 判定标准：阿奇霉素系统适用性对照品图谱与标准图谱一致。3.2 阿奇霉素片有关物质分析方法专属性验证3.2.1 溶液配制A. 稀释液配制：磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.73g, 加水溶解并稀释至1000ml,用氨试液调节PH直至10.0 ±0.05）-甲醇- 乙腈（7： 7： 6）流动相：流动相A为磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶 液，用20%勺磷酸溶液调节pH值至8.2）-乙睛（45 ： 55）,流动相B为甲醇B.取杂质S和杂质A对照品（约5m。，置同一

24、100ml量瓶中加上 述稀释液溶解并稀释至刻度，制成每 1ml中各约含0.05mg的溶液， 作为杂质S和杂质A对照品溶液；另取阿奇霉素系统适用性对照品约 20m动口上述对口K品溶液2ml 溶解，制成每1ml中约含10mg的溶液，作为系统适用性溶液； C精密量取对照溶液10ml,置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度， 摇匀，作为灵敏度溶液， 取系统适用性溶液和灵敏度溶液各 50口,分别注入液相色谱仪，记 录色谱图，系统性实验图谱。D.空白溶液：取已配制的处方量辅料 60.2mg,置10ml量瓶中，加稀 释液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（0.45um微孔滤膜），摇匀，滤 过，取续滤液，作为储备液。

25、E供试品溶液：取本品细粉适量（约0.16g）称定，置10ml的量瓶中 加稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，滤过，取滤 液，作为供试品溶液；3.2.2 测定色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相A为磷酸盐缓冲液（取 0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%勺磷酸溶液调节pH值至8.2）- 乙睛（45： 55）,流动相B为甲醇，柱温为30C （必要时适当调整）； 按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml,检测波长为210nm时间（）流动相A（%）流动相B（%）075253595564955657525717525精密量取系统适用性溶液、供试品溶液、储备液各50 w l,注入液相色谱仪，记录色谱图。3.2.3 判定标准：取系统适用性溶液、供试品溶液、储备液各50“，分别注入液相色谱仪，系统适用性溶液色谱图中各峰之间的分 离度均应大于1.2,阿奇霉素峰的保留时间应在 3040分钟之间。 空白辅料不干扰有关物质检测。3.3 阿奇霉素片有关物质分析方法检测限验证与定量限检测。3.3.1 溶液配制供试品溶液：见专属性验证项下供试品溶液。样品溶液：取供试品溶液适量，加流动相分别配置成 1 mg/ml、 0.1 mg/ml、10 回/ml、1 闵/ml、0.1 ml、0.01