动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)的快速检测

1、中图分类号:O657.63; 文献标识符:B;文章篇号:1007-2764(200303-0030-70动物组织中盐酸克伦特罗 (瘦肉精 的快速检测康笑枫 徐淑元 秦晓霜(广州市农业科学研究所 广州 510315摘 要 :本文对我国强制性农业行业标准 (NY/T468-2001“动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱 -质谱法”的检测方法 的样品预处理进行适当调整,然后再按标准方法对预处理过的样品进行乙酸铵抽提,净化、衍生,用 GC-MS 气相色谱 -质谱联 用仪分析定量。结果发现此方法不影响检测结果,而且可大大缩短检测时间。关键词 :克伦特罗;样品预处理;衍生;气相色谱 -质谱法Rapid d

2、etermination of clenbuterol hydrochloride in animal tissueKang Xiaofeng Xu Shuyuan Qin Xiaoshang( Guangzhou Agricultural Science Institute, Guangzhou 510315Abstract: The sample pretreatment of determination of Clenbuterol hydrochloride by GC-MS was simplified in the paper. the result show it not onl

3、y can shorten the time of determination, but also it would not influence the result of the determination.Keywords: Clenbuterol hydrochloride; rapid determination , GC-MS目前, 测定动物组织中的克伦特罗的方法有高效 液相色谱一质谱联用法 (HPLC-MS、 气相色谱一质谱 联用法 (GC-MS、 高效液相色谱法 (HPLC和酶联免疫 吸附法 (ELISA等。通常以前两种作为确认方法,后 两种作为筛选方法。 中华人民共和国颁布的强

4、制性农 业行业标准 (NY/T468-2001“动物组织中盐酸克伦特 罗的测定气相色谱 -质谱法”方法则为仲裁方法。1 试剂与材料1.1 试剂乙酸铵 (1.45g/L,pH 5.2,分析纯 ; 甲醇 (分析纯 ;正 己烷 (分析纯 ;乙氰 (分析纯 ;双三甲基硅基三氟乙 酰胺 (BSTFA。1.2 盐酸克伦特罗标准溶液(1储备液:精确称取适量的盐酸克伦特罗 (含量 不少于 98.5%,用甲醇配成浓度为 1 mg/ ml的标准 储备液,储于冰箱中,有效期 3个月。(2工作液:将储备液用甲醇稀释为 2.5µg/kg 15µg/ kg.。1.3 仪器离心管 (50 ml,具塞 ;

5、匀浆机;旋涡混合器;高 速冷冻离心机 (10000 r / min; 烘箱 (室温 -300 收稿日期:2003-5-19 1.4 日本岛津 GC-MS-QP5000气相色谱 -质谱联用 仪装有弱级性或非级性毛细管柱的气相色谱仪和具 电子轰击源的质谱仪。GC-MS 仪器参数如下 :(1 色谱条件色 谱 柱 :DB-1(Dimethylpolysiloxane:-60 to 325 (350 ,30m ×0.25mm(内径 , 0.25m(膜厚 。 进样口温度:230; 柱温程序:100 (保持 3 min, 以 30 / min升温至 240 (保持 20 min。进样方式:不分流。

6、进样体积:1l 。进样条件:柱前压 50kPa ,柱流量 30 ml/ min。 溶剂延迟:5 min。(2 质谱条件离子源条件:温度:230; EI 离子源;电子能 量 70eV ,电离电压 1.6kV 。选择离子监测:(M/Z86, 262, 87,2 试验步骤2.1 抽样和制样(1 从市场和养殖场抽取具有一定批量的有代 表性的无皮上肉,剔除去所有杂质、脂肪。(2 精肉用高速捣碎机捣碎混合均匀,放置冰箱70冷冻备用。 (3 称取样本 10克于高速捣碎机中,加 40毫升 的乙酸铵,高速捣碎混合均匀,将样品倒入 50ml 离 心管中,加 10 ml正己烷摇匀。(4将离心管放置高速冷冻离心机中,

7、将温度调 至 4,于 8000r/min离心 10min ,去掉正己烷层, 收集下层清液。2.2 蒸干和净化(1 吸 20ml 样品清液于瓷蒸发皿中,在 80水 浴上蒸干。 (2用 20ml 甲醇溶解残渣,过滤于 60ml 分液漏 斗中,加 10 ml正己烷经两次萃取,去掉正己烷层, 收集待测液于比色管中,在 80水浴上蒸干,蒸干 后在 80烘箱中烘干 1h 。 2.3 衍生化(1经 烘 干 后 的 残 渣 加 50l 乙氰 、 100 l BSTFA , 加盖于旋涡混合器上震荡混匀。 样品抽提时 尽量把脂肪剔除干净, 样品液经蒸干并烘干后衍生时 不能有水,否则会破坏衍生试剂 BSTFA 的作

8、用,衍 生时加乙氰,改善了色谱行为和提高了检测灵敏度。 (2在 60的烘箱加热衍生 20 min。取适量的盐 酸克伦特罗标准工作液同时衍生化。 2.4 检测衍生化后的试样和标液用 GC-MS 气相色谱 -质谱 联用仪测定 3 结果与分析 3.1 未衍生盐酸克伦特罗质谱图、衍生后盐酸克伦 特罗质谱图、经衍生的盐酸克伦特罗标准离子色谱 图、 样本添加标样回收率试验图谱分别见图 1、 图 2、 图 3、图 4。 图 1 未衍生的盐酸克伦特罗质谱图 图 2 经衍生后的盐酸克伦特罗质谱图图 3 经衍生的盐酸克伦特罗标准离子色谱图 (上图为 2.5µg/kg;下图为 5.0µg/kg图

9、 3 样本添加标样回率试验图谱 (上图为 2.5µg/kg;下图为 5.0µg/kg3.2 样本添加标样盐酸克伦特罗的回收率结果 (表 171广州食品工业科技Guangzhou food science and technology V ol.19 No3(总 76表 1 回收率结果表样本名称 峰 面 积 (M/Z86-100.0保留时 间 (min回收 率 (%标样 (2.5µg/kg 114192 10.540 样本 +标样 (2.5µg/kg120362 10.549 105.40标样(5.0µg/kg231829 10.537样本 +标样 (5.0µg/kg230803 10.542 99.56从图 1、图